膀胱尿路上皮癌中CXCL1、CXCR2的表達及臨床意義

翟曉利 章艷斐 施紅旗 樓善賢

（金華市中心醫(yī)院，浙江金華 321000）

膀胱尿路上皮癌中CXCL1、CXCR2的表達及臨床意義

翟曉利 章艷斐 施紅旗 樓善賢

（金華市中心醫(yī)院，浙江金華 321000）

目的探討膀胱尿路上皮癌中CXCL1及其受體CXCR2蛋白的表達與膀胱尿路上皮癌患者各臨床病理因素之間的關系。方法采用免疫組織化學EnVision法檢測90例膀胱尿路上皮癌和20例癌旁正常膀胱黏膜中CXCL1、CXCR2的表達情況。結(jié)果在膀胱尿路上皮癌組織中CXCL1、CXCR2蛋白的表達陽性率分別為65.6%、31.1%，顯著高于癌旁正常膀胱黏膜組織，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；與腫瘤分化程度，臨床病理分期以及復發(fā)有關（P＜0.01）。癌組織中CXCL1的表達與CXCR2呈正相關（r＝0.487，P＜0.05）。生存曲線顯示，CXCL1陰性組的3、5、10年的生存率分別明顯高于CXCL1陽性組的3、5、10年生存率（P＝0.006）。結(jié)論CXCL1和CXCR2在膀胱尿路上皮癌中的高表達與腫瘤的臨床分期及復發(fā)有關。檢測CXCL1在膀胱尿路上皮癌中的表達對患者預后評估可提供幫助。

膀胱尿路上皮癌；CXCL1；CXCR2；免疫組織化學

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，大約50%的患者前來就診時已屬中晚期，常形成復發(fā)和轉(zhuǎn)移。趨化因子CXCL1（CXC ligand1），即CXC的配體1，屬于趨化因子CXC家族的重要成員，在大腸癌、胃癌、皮膚惡性黑色素瘤和乳腺癌等多種腫瘤中呈異常表達［1－3］，但在膀胱癌中的表達情況鮮有報道。本組檢測了90例膀胱尿路上皮癌中CXCL1及其受體CXCR2的表達情況，旨在探討其表達在膀胱癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集浙江省金華市中心醫(yī)院2005年1月～2007年1月存檔膀胱尿路上皮癌病例組織石蠟包埋標本90例（所有病例均經(jīng)病理學證實為膀胱尿路上皮癌，且術前均未行放、化療）和癌旁正常膀胱黏膜組織標本20例，所有病例均有完整的臨床及病理資料，每例隨訪至今，生存時間為3～120個月，根據(jù)Kaplan－Meier生存曲線法計算患者的中位生存期為44.8個月。其中男60例，女30例。年齡49～78歲，平均（64.5±3.9）歲，≥60歲47例，＜60歲43例。根據(jù)WHO（2004版）尿路上皮腫瘤組織學分類，低級別尿路上皮癌18例，高級別尿路上皮癌72例。根據(jù)2002版國際抗癌聯(lián)盟（UICC）的TNM臨床分期標準進行分期，其中T1～T2期52例，T3～T4期38例。90例膀胱癌患者中，無復發(fā)者50例，有復發(fā)者40例；單發(fā)腫瘤77例，多發(fā)腫瘤13例。按腫瘤大小，＜3.0cm者56例，≥3.0cm者34例。對照組為癌旁正常膀胱黏膜組織20例，取自距離行膀胱切除術標本邊上3.0～5.0cm的膀胱黏膜組織，病理HE染色證實為正常膀胱黏膜組織。

1.2 方法 鼠抗人CXCL1單克隆抗體及CXCR2抗體購自北京中杉生物技術有限公司，EnVision試劑盒以及DAB顯色試劑盒均購自福州邁新生物技術開發(fā)公司。采用免疫組織化學EnVision法。石蠟包埋的組織4微米連續(xù)切片；二甲苯脫蠟，乙醇梯度水化；3%過氧化物消除內(nèi)源性過氧化物酶；EDTA修復；正常羊血清室溫下封閉；加入即用型一抗（鼠抗人CXCL1單克隆抗體及CXCR2抗體）4℃冰箱過夜；PBS清洗，加入二抗溫育0.5小時，沖洗后DAB顯色，蘇木精對比染色，中性樹膠封片。采用已知陽性片作對照，以PBS液代替一抗作空白對照。

1.3 結(jié)果判定 CXCL1及CXCR2均以細胞膜和細胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。參照Miyake等［4］報道的文獻資料，采取二次計分法：每例標本隨機計數(shù)10個高倍視野（×400），計數(shù)每個高倍視野中陽性細胞所占百分比并計分。首先將染色強度計分：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。再將陽性細胞百分比計分，0分為陰性，1分為陽性細胞1%～40%，2分為41%～75%，3分為76%～100%。用染色強度得分和細胞數(shù)得分的乘積作為判斷標準，若積分≤1為陰性，＞1為陽性。免疫組化結(jié)果由兩位病理醫(yī)生采用獨立雙盲法判定。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。在膀胱尿路上皮癌組織中CXCL1及CXCR2的表達與各臨床病理因素的關系以及兩個指標之間的相關性采用χ2和Pearson線性相關分析。

2 結(jié) 果

2.1 膀胱尿路上皮癌中CXCL1的表達與各臨床病理指標的關系 CXCL1蛋白主要定位于尿路上皮癌癌細胞的胞膜和胞漿，為黃色或棕黃色顆粒。在尿路上皮癌中，CXCL1的陽性率為65.6%（59／90），對照組癌旁正常膀胱黏膜組織中未見CXCL1的表達，兩組陽性率比較差異有統(tǒng)計學意義（χ2＝28.28，P＜0.01）。CXCL1的表達與患者的性別、年齡、腫塊數(shù)目等因素無關（P＞0.05）；隨著CXCL1的表達程度的增高，癌組織的分化越差、臨床分期越晚、更易出現(xiàn)復發(fā)（P＜0.01），見表1。CXCL1陰性組中位生存期為62.3個月，其中9例死亡，3、5、10年生存率為88.3%、78.8%、71.0%；CXCL1陽性組中位生存期為35.6個月，其中38例死亡，3、5、10年生存率為61.9%、47.1%、35.2%，兩組間比較差異有統(tǒng)計學意義（P＝0.006），生存曲線見圖1，顯示CXCL1陰性組預后好于CXCL1陽性組。

2.2 膀胱尿路上皮癌中CXCR2表達與各臨床病理指標的關系 在尿路上皮癌中，CXCR2的陽性率為31.1%（28／90），對照組癌旁正常膀胱黏膜組織中未見CXCR2的表達，兩組陽性率比較差異有統(tǒng)計學意義（χ2＝8.35，P＜0.01）。CXCR2的陽性率與膀胱尿路上皮癌患者的性別、年齡、腫塊數(shù)目及大小之間差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。隨著癌組織的分化程度的降低，CXCR2的陽性率升高，差異有顯著性（P＜0.01）；出現(xiàn)復發(fā)的病例組中CXCR2的陽性率為57.5%（23／40），無復發(fā)的病例組中，CXCR2的陽性率僅為10.0%（5／50），兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。pTNM分期T1～T2期CXCR2陽性率為0%（0／52），T3～T4期CXCR2陽性率為73.7%（28／38），CXCR2陽性患者pTNM分期更晚（P＜0.01，表1）。CXCR2陰性組中位生存期為59個月，其中45例死亡，3、5、10年生存率為78.0%、45.9%、27.0%；CXCR2陽性組中位生存期為46個月，其中19例死亡，3、5、10年生存率為70.9%、42.1%、29.3%，兩組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P＝0.096），生存曲線見圖2，顯示CXCR2的表達與預后關系不明顯。

圖1 膀胱尿路上皮癌CXCL1陰性組和CXCL1陽性組生存曲線的比較

圖2 膀胱尿路上皮癌CXCR2陰性組和CXCR2陽性組生存曲線的比較

2.3 膀胱尿路上皮癌中CXCL1與CXCR2的表達之間的關系 Pearson相關分析顯示，膀胱尿路上皮癌組織中CXCL1與CXCR2的表達呈正相關（r＝0.487，P＜0.05）。

3 討 論

CXCL1即趨因子生長調(diào)節(jié)基因1，屬于趨化因子CXC家族［5－7］。CXCL1在巨噬細胞、中性粒細胞和上皮細胞中表達，并呈現(xiàn)中性粒細胞趨化活性，CXCR2是CXCL1的趨化因子受體，與CXCL1結(jié)合后表現(xiàn)出趨化作用［2］，研究表明CXCL1及其受體CXCR2可能參與多種腫瘤細胞的發(fā)生和轉(zhuǎn)移等一系列事件，文獻報道［1－4］CXCL1的持續(xù)表達可促進黑色素瘤的形成；以CXCL1基因轉(zhuǎn)染鱗癌細胞后發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染后癌細胞生長和轉(zhuǎn)移能力均增強；在乳腺癌、卵巢癌、腺泡性橫紋肌肉瘤中也均高表達CXCL1及CXCR2。

Kawanishi等［8］檢測了67例膀胱尿路上皮癌中CXCL1的表達水平，顯示CXCL1是膀胱癌有無浸潤的獨立影響因子。本組90例膀胱尿路上皮癌中，CXCL1的陽性率為65.6%（59／90），并且在分化差、臨床分期晚、有復發(fā)的病例中，其表達程度明顯高于分化好、臨床分期早、無復發(fā)的病例，并有統(tǒng)計學意義，這些結(jié)果與相關文獻［3－4］報道基本一致。進一步的分析顯示，膀胱尿路上皮癌組織中CXCL1與CXCR2的表達呈正相關性（r＝0.487，P＜0.05），且在低分化腫瘤及臨床T2、T3期患者更進一步高表達，提示CXCL1－CXCR2途徑可能介導了膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移，如進一步研究針對CXCL1－CXCR2的靶向治療，可進一步增強療效，減少毒副作用。本組研究顯示，CXCL1陰性組中位生存期為64.7個月，其中3例死亡，3、5、10年生存率分別為92.3%、92.3%、72.8%；CXCL1陽性組中位生存期為26.1個月，其中9例死亡，3、5、10年生存率分別為58.9%、47.1%、35.3%，兩組間比較差異有統(tǒng)計學意義（P＝0.006），顯示CXCL1陰性組預后好于CXCL1陽性組。提示CXCL1的陽性表達與患者預后相關，可作為其預后的預測指標。

近年來，研究人員圍繞腫瘤血管形成進行了大量的試驗研究，相繼發(fā)現(xiàn)了血管內(nèi)皮生長因子等一系列的腫瘤血管生成促進因子及相關受體，其中CXC趨化因子及受體更是近年抗腫瘤相關研究的熱點之一。研究表明［2］，阻斷CXCR2可以引起腫瘤組織的壞死，阻斷CXCR2的小鼠模型，腫瘤相關的新血管生成以及腫瘤的轉(zhuǎn)移均得到了明顯的抑制，而近年來有關抑制腫瘤血管生成的靶向治療已成為熱點。本組結(jié)果表明，膀胱癌組織中CXCL1及CXCR2均高表達，揭示了CXCL1及CXCR2與膀胱癌生長、惡性程度、預后及臨床病理特征的關系，為進一步闡明CXCL1及CXCR2的致病機制，研究基因或藥物干預的作用奠定了基礎。

［1］Verbeke H，Geboes K，Van Damme J，et al．The role of CXC chemokines in the transition of chronic inflammation to esophageal and gastric cancer．Biochim Biophys Acta，2012，1825（1）：117

［2］Verbeke H，Struyf S，Laureys G，et al．The expression and role of CXC chemokines in colorectal cancer．Cytokine Growth Factor Rev，2011，22（5－6）：345

［3］Lerebours F，Vacher S，Andrieu C，et al．NF－kappa B genes have a major role in inflammatory breast cancer．BMC Cancer，2008，8：41

［4］Miyake M，Lawton A，Goodison S，et al．Chemokine（C－X－C）ligand 1（CXCL1）protein expression is increased in aggressive bladder cancers．BMC Cancer，2013，13：322

［5］張瑋，黃寧，王琪，等．黑色素瘤生長趨化因子1對卵巢癌細胞生物學功能的影響．中華腫瘤雜志，2013，35（2）：109

［6］黃寧，王琪，張瑋，等．卵巢腫瘤組織CXCLl基因表達與臨床病理的相關性探討．中華腫瘤防治雜志，2011，18（1）：85

［7］Booth CM．Optimizing care and outcomes of patients with muscle－invasive bladder cancer．Can Urol Assoc J，2013，7（9－10）：E625

［8］Kawanishi H，Matsui Y，Ito M，et al．Secreted CXCL1 is a potential mediator and marker of the tumor invasion of bladder cancer．Clin Cancer Res，2008，14（9）：2579