色譜法及其相關(guān)技術(shù)在中藥研究中的運(yùn)用*

★ 彭水梅 付小梅 孫艷朝 吳志瑰 劉婧 裴建國

(江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 江西 南昌 330004)

中藥是幾千年來人民智慧的結(jié)晶，它不僅為中華民族的繁衍和人民的健康作出了不可磨滅的貢獻(xiàn)而且也給周邊的一些國家的醫(yī)藥事業(yè)帶來了巨大的發(fā)展[1]，中藥的質(zhì)量研究一直是中藥研究與應(yīng)用的難點(diǎn)與重點(diǎn)問題，中藥質(zhì)量研究的目的是保證中藥的有效性和安全性，

因而需要搞清中藥的藥效物質(zhì)、有毒物質(zhì)及其作用機(jī)制，并對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制?，F(xiàn)代高新技術(shù)和各種化學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法在中藥質(zhì)量研究和質(zhì)量控制中起著重要的作用，而色譜及其聯(lián)用技術(shù)作為現(xiàn)代高效分離分析技術(shù)更是該研究的重要技術(shù)平臺(tái)之一。色譜法是綜合的鑒別手段，該方法簡便、快速，也是藥物質(zhì)量控制的最主要的方法之一，在藥物分析中的應(yīng)用越來越廣泛。常用的色譜法有如下幾種：高效液相色譜法(HPLC)、薄層色譜法(TLC)、氣相色譜法(GC)以及高效毛細(xì)管電泳法(HPCE)等。本文主要對(duì)這幾種色譜法進(jìn)行系統(tǒng)的介紹及其技術(shù)在中藥研究中的運(yùn)用進(jìn)行闡述，從而對(duì)中藥的質(zhì)量控制及安全用藥等方面作出指導(dǎo)性意義。

1 薄層色譜法

薄層色譜法是較早應(yīng)用于中藥快速分析少量物料的一種非常重要的技術(shù)，薄層色譜的主要優(yōu)點(diǎn)是：(1)可在同板同時(shí)分析多達(dá)18個(gè)樣品的色譜，時(shí)效高；(2)所用的是正相展開劑，其組成變化靈活多樣，可適應(yīng)多種成分的分離；(3)離線操作，既可直觀比較圖譜，又可上機(jī)掃描得到羅闊圖和處理數(shù)據(jù)；(4)占機(jī)時(shí)間短；(5)最突出的優(yōu)點(diǎn)是比柱色譜多了色彩參數(shù)，得到的是色彩豐富的色譜圖像，直觀性強(qiáng)。薄層色譜法的缺點(diǎn)在于其色譜結(jié)果易手鋪板質(zhì)量、點(diǎn)樣技術(shù)、展開劑配制、層析環(huán)境中展開劑的均勻度、環(huán)境溫度濕度等因素的影響，有時(shí)難于重復(fù)；顯色又受均勻性、靈敏度、穩(wěn)定性等影響，這些因素均會(huì)使測(cè)定結(jié)果偏差較大。最近幾年圍繞著測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)化和自動(dòng)化，薄層色譜技術(shù)有了全新的發(fā)展，按其原理的不同，薄層色譜法又分為高效薄層色譜法(HPTLC)、假相薄層色譜法、反相薄層色譜法(RPTLC)。

在實(shí)際的薄層層析鑒別中，有時(shí)因中藥的成分性質(zhì)相近而難以分開時(shí)，還可采用高效薄層層析法(HPTLC),該方法是采用更細(xì)、更勻的吸附劑，因而提高了分離效果，使斑點(diǎn)小而圓，重現(xiàn)性增強(qiáng)。同時(shí)，點(diǎn)樣量還可以減少到0.1μL以下，使原點(diǎn)直徑控制在1mm內(nèi)，展開時(shí)間縮短，展距縮小(3～7cm/10～15min)，達(dá)到微量、快速和高效的目的。用HPTLC不僅可以定性，還可用于定量分析。對(duì)生物體內(nèi)藥物分析，抗菌素發(fā)酵成分分析，藥物制劑分析及植物藥中有效成分的分析有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。崔友、孫秀燕等[2]人采用薄層色譜法，硅膠薄層板，正己烷：醋酸丁酯(98∶2)為展開劑，香草醛硫酸試液顯色，結(jié)果鑒別出莪術(shù)油中有效成分是：牛二酮、呋喃二烯和莪術(shù)二酮，表明采用薄層色譜法操作簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好；楊建明等[3]人采用薄層色譜法鑒別加味三黃片中主要有效成分的方法及薄層掃描法測(cè)定三黃片中小檗堿的含量，本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)加味三黃片中主要有效成分小檗堿、黃芩苷、大黃素及大黃酚進(jìn)行了定性鑒別，并對(duì)其中主要成分之一小檗堿，采用了薄層掃描法對(duì)其進(jìn)行了定量分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果滿意，方法亦較為簡單，為該產(chǎn)品的質(zhì)量控制提供了一種較為可靠的依據(jù)；張尊聽等[4]以高效薄層色譜掃描法測(cè)定野葛根中游離葛根索及總葛根索含量；伍慶[5]用高效薄層色譜法建立了快速測(cè)定知母藥材中菝葜皂苷元的方法；米莉莉等[6]用高效薄層色譜掃描法對(duì)天然蟲草與人工蟲草菌絲體中核苷類有效成分進(jìn)行含量測(cè)定，同時(shí)建立了不同蟲草樣品的熒光淬滅薄層色譜指紋圖譜；梁小潔等[7]用高效薄層色譜法建立仙方玉容膏中黃芪甲苷含量的測(cè)定方法；梁乾德等[8]綜合運(yùn)用高效薄層色譜(HPTLC)、高效液相色譜(HPLC)、電噴霧離子化質(zhì)譜(ESI-MS)3種方法對(duì)四物湯的Cl，C2，C3部位及四味單藥相應(yīng)部位進(jìn)行分析和比較；Ohon T等[9]采用RPTLC,對(duì)人參、紅參中人參皂苷Rg1,龍膽、日本龍膽中龍膽苦苷,葛根中葛根素,梔子中梔子苷,五味子中五味子素,生姜中姜辣素進(jìn)行了鑒定。采RP218F254S薄層板,展開系統(tǒng)為:人參、紅參:硫酸鈉(1y20)2乙腈2甲醇(10B7B3)；龍膽、日本龍膽:水2乙腈(7B3)；葛根、梔子:硫酸鈉(1y20)2乙腈2甲醇(10B3B3)；五味子:正己烷222丁酮(3B1)；生姜:22丁酮2甲醇2水(1B1B1)。點(diǎn)樣量:10L,l上行展開約10cm人參、紅參噴硫酸后110e加熱5min顯色,其余紫外線254nm觀察熒光斑點(diǎn)。結(jié)果在上述展開系統(tǒng)條件下各藥材薄層斑點(diǎn)分離良好,且重現(xiàn)性好。

2 氣相色譜法及氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)

氣相色譜以氣體為流動(dòng)相,具有分離效能高,靈敏度高,用量少,分析速度快等優(yōu)點(diǎn),適合于植物的揮發(fā)油成分及其他易揮發(fā)性成分或可轉(zhuǎn)化為可揮發(fā)的成分測(cè)定。對(duì)于一些具有揮發(fā)性成分的中藥的鑒別,GC能發(fā)揮獨(dú)特的作用。中藥制劑在原料和工藝條件嚴(yán)格控制一致時(shí)，其成分組成也是比較穩(wěn)定的，也可用GC指紋圖譜進(jìn)行鑒別和質(zhì)量評(píng)定。馮毅凡等[10]采用氣相色譜法對(duì)華佗再造丸及其主要味藥進(jìn)行了指紋圖譜分析，并依據(jù)圖譜中各成分的含量對(duì)華佗再造丸的質(zhì)量優(yōu)劣進(jìn)行了評(píng)價(jià)。傅梅紅等[11]人用GC法測(cè)定蒼術(shù)藥材中有效成分β-桉葉醇的含量；肖雪梅[12]用氣相色譜法測(cè)定風(fēng)痛靈中丁香酚的含量；蘇薇薇等[13]對(duì)烏雞白鳳丸的氣相色譜指紋特征進(jìn)行了研究，認(rèn)為其可用于鑒別烏雞白鳳丸的真?zhèn)?；鄭少珠[14]采用氣相色譜法，以聯(lián)苯為內(nèi)標(biāo)，對(duì)莪術(shù)醇原料藥進(jìn)行了含量測(cè)定，此方法簡單，快速，靈敏；郭麗冰等[15]人用直接蒸餾-打孔樹脂濃縮-氣相色譜法，以正十七烷為內(nèi)標(biāo)物，對(duì)徐長卿中的丹皮酚進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果表明，在所測(cè)濃度范圍內(nèi)，峰面積與被測(cè)物濃度的線性關(guān)系良好，回收率較高。

氣-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)更增強(qiáng)了其定性功能,不僅能區(qū)分不同中藥中揮發(fā)性成分的差別,還可闡明被檢成分的結(jié)構(gòu)。GC和GC/MS用于中藥指紋圖譜研究時(shí),含揮發(fā)性成分中藥取樣的代表性、合理性對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性影響尤為顯著，歐陽臻等[16]人用氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(GC-MS)分析不同產(chǎn)地17個(gè)茅蒼術(shù)樣品，研究茅蒼術(shù)揮發(fā)油的指紋圖譜，計(jì)算結(jié)果表明不同產(chǎn)地茅蒼術(shù)與道地的相比差異明顯，為茅蒼術(shù)的內(nèi)在質(zhì)量評(píng)價(jià)和鑒定提供特征性數(shù)據(jù)，為道地茅蒼術(shù)的質(zhì)量鑒別和評(píng)價(jià)及與偽品及混淆品的區(qū)別提供了依據(jù)；吳玫涵等[17]用氣相色譜一質(zhì)譜法對(duì)10種不同產(chǎn)地的小茴香揮發(fā)油進(jìn)行化學(xué)成分的分折，共鑒定出20種化合物，結(jié)果表明不同產(chǎn)地小茴香的總離子流圖有較大共同點(diǎn)，但亦存在不同之處，各組分的相對(duì)百分含量不盡相同，此項(xiàng)研究為今后小茴香藥材及其有關(guān)制劑的質(zhì)量控制奠定了基礎(chǔ)，為今后小茴香藥材建立定性指紋圖譜提供了依據(jù)，為揮發(fā)油類成分的分析和研究提供了可行的方法；廖遠(yuǎn)熹等[18]人運(yùn)用靜態(tài)頂空-毛細(xì)管氣相色譜法對(duì)6種不同產(chǎn)地柴胡的揮發(fā)性成分進(jìn)行檢測(cè)，并運(yùn)用檢索和保留指數(shù)相結(jié)合的手段對(duì)檢出的揮發(fā)性成分進(jìn)行定性，6種柴胡中定性相對(duì)含量大于0.2%的揮發(fā)性成分60種，其中揮發(fā)性成分中脂肪醛類物質(zhì)的含量最大，占總揮發(fā)性物質(zhì)的25%～44%；郭方遒等[19]人采用頂空固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜法(HS-SPME-GC-MS)對(duì)白術(shù)中的揮發(fā)性成分進(jìn)行了分離鑒定了，并與采用傳統(tǒng)的水蒸氣蒸餾法(SD-GC-MS)提取的揮發(fā)性成分進(jìn)行了比較，結(jié)果采用HS-SPME-GC-MS鑒定出了41組分，采用SD-GC-MS鑒定出了31種組分，表明HS-SPME-GC-MS方法作為一種簡單快速便利的手段非常適合用于白術(shù)中揮發(fā)性物質(zhì)的提取和分析；周長新等[20]人運(yùn)用GC-MS測(cè)定當(dāng)歸揮發(fā)油中藁本內(nèi)酯的含量，建立GC-MS選擇離子檢測(cè)外標(biāo)定量方法，此方法靈敏、快速、準(zhǔn)確，可供當(dāng)歸揮發(fā)油質(zhì)量控制及藁本內(nèi)酯的含量測(cè)定；王發(fā)松等[21]人采用GC-MS技術(shù)分析荊條葉揮發(fā)油中的化學(xué)組成，結(jié)果從荊條葉中共分離出了36種組分，確定了29種成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)和相對(duì)含量；GC-MS的二維數(shù)據(jù)可用于定性和定量測(cè)定五味子藥材中的揮發(fā)性成分；還有人采用內(nèi)標(biāo)法測(cè)定萊菔子、北葶藶子等中藥中的總異氰酸酯含量；劉敬蘭[22]采用衍生化毛細(xì)管氣相色譜法分離測(cè)定山梨醇和甘露醇，用苯基氰丙基聚硅氧烷(BPX-X)毛細(xì)管色譜柱程序升溫法對(duì)山梨醇和甘露醇的乙酰酯進(jìn)行了很好的分離，并用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量分析。

3 毛細(xì)管電泳法

近兩年,CE以極快的速度發(fā)展,目前已深入到化學(xué)研究所涉獵的幾乎所有領(lǐng)域毛細(xì)管電泳由于定量分析的重現(xiàn)性等問題，在中藥成分的含量測(cè)定方面有一定的局限性，但其極高的分離效能，使其很適合于中藥指紋圖譜的測(cè)定。林炳承[23]對(duì)CE的近期理論及應(yīng)用研究作了總結(jié),并且對(duì)CE在中國的發(fā)展作了綜合評(píng)述。劉志松等[24]綜述了CE在藥物分析中的應(yīng)用。此外,CE對(duì)單細(xì)胞的分析,CE對(duì)手性物質(zhì)的分離,CE對(duì)DNA多態(tài)性電負(fù)性,CE在臨床診斷上的應(yīng)用也有專門論述。在分離模式方面,對(duì)毛細(xì)管電色譜、毛細(xì)管離子電泳、親和毛細(xì)管電泳、毛細(xì)管等電聚焦及非水毛細(xì)管電泳分別有綜述?！渡V》講座欄目近兩年的主要內(nèi)容大多與CE有關(guān),在此欄目中王義明等對(duì)CE的原理和應(yīng)用進(jìn)行了系列講座,內(nèi)容括:CE柱技術(shù)、CE在氨基酸、肽及蛋白質(zhì)分析中的應(yīng)用及其在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用。對(duì)CE的應(yīng)用研究主要集中在蛋白質(zhì)分離、體液分析、藥物分析、天然植物的分離分析以及對(duì)手性大分子、多價(jià)態(tài)無機(jī)小離子的分離方面。王青虎等[25]人采用高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定小白蒿中5種黃酮類化合物的含量，并對(duì)不同采集時(shí)間小白蒿和不同部位中5種黃酮類化合物的含量進(jìn)行比較，結(jié)果表明小白蒿的花中的黃酮類化合物的量高于葉和莖；并綜合分析得出小白蒿的采集時(shí)間應(yīng)為6月中旬到7月末。孫新建等[26]人采用高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定地稔中沒食子酸的含量，建立測(cè)定地稔中的有效成分沒食子酸含量的高效毛細(xì)管電泳法。方法:采用內(nèi)標(biāo)法,選取苯甲酸鈉為內(nèi)標(biāo),未涂層熔融石英毛細(xì)管柱(57cmX7μm,有效長度50cm)為分離通道,以12mmol/L硼砂-甲醇(85∶15)為電泳介質(zhì),分離電壓25KV,檢測(cè)波長215nm,結(jié)果在上述條件下,沒食子酸在15min內(nèi)得到很好的分離,在2.37～47.40μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,平均加樣回收率為98.5%(r=0.9998)。從而表明該方法簡便快速、結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好,可用于地稔及其制劑的質(zhì)量控制。鄭暢等[27]人采用非共價(jià)涂層毛細(xì)管電泳法測(cè)定黃連及其炮制品中3種生物堿的含量，他們應(yīng)用聚凝胺-聚丙乙烯磺酸鈉涂層毛細(xì)管柱(33cmX50μm ID.,有效長度為24.7cm),運(yùn)行緩沖液為500mmol/L Tris-甲醇(體積比為70∶30)緩沖溶液(8mol/L,磷酸調(diào)節(jié)pH7.5),分離電壓為22KV,檢測(cè)波長為230nm,溫度為20℃,壓力自動(dòng)進(jìn)樣(5000PaX6s),陰極檢測(cè)。結(jié)果在所選電泳條件下，黃連中的生物堿組分在4.5min內(nèi)得到良好分離，鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀和鹽酸藥根堿的線性關(guān)系良好，加樣回收率較高，表明該方法可用于黃連藥材中生物堿的分析測(cè)定。

4 高效液相色譜法

由于大部分中藥材中的活性成分為高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定性物質(zhì)，如生物堿類、皂苷類、黃酮類等，甚至為生物大分子，如多肽、多糖等，因此HPLC法已廣泛地應(yīng)用于中藥指紋圖譜的建立，這些指紋圖譜與定量分析指標(biāo)相結(jié)合可用于中藥材的鑒別、中藥質(zhì)量的控制及中藥質(zhì)量的評(píng)價(jià)等。通過HPLC指紋圖譜的獲取、驗(yàn)證和鑒別三個(gè)步驟，得出供鑒別用的對(duì)照指紋圖譜，進(jìn)而確定指標(biāo)成分峰、特征峰的相對(duì)保留時(shí)間及范圍，可用于中藥材和飲片的鑒別。采用HPLC法對(duì)中藥進(jìn)行定性鑒別、定量鑒別，并對(duì)其進(jìn)行指紋圖譜分析，這對(duì)中藥的質(zhì)量控制及安全用藥等方面具有重大的實(shí)際意義。

4.1 定性鑒別 中藥的品種、真?zhèn)舞b別是中藥質(zhì)量控制的首要任務(wù)之一。高效液相色譜HPLC法由于具有分離效能高、分析速度快、適用范圍廣、流動(dòng)相選擇范圍寬、靈敏度高、色譜柱可多次利用、流出組分可收集、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，目前已廣為普及用于中藥分析中。劉艷等[28]人采用HPLC法測(cè)定并比較不同產(chǎn)地楤木中楤木皂苷A的含量，表明該方法可用于楤木的質(zhì)量控制。楊蕾等[29]人運(yùn)用高效液相色譜(HPLC)梯度洗脫同時(shí)測(cè)定了長春花中的文多靈、長春質(zhì)堿和脫水長春堿等3種生物堿。其中色譜柱為Water5C18-MS(250mm×4.6mm)，流動(dòng)相為甲醇-1%二乙胺(磷酸調(diào)PH至7.3)系統(tǒng)，梯度洗脫，檢測(cè)波長為220nm，柱溫為25℃，結(jié)果表明用該法同時(shí)檢測(cè)了不同干旱條件處理下長春花樣品中的文多靈、長春質(zhì)堿和脫水長春堿，方法準(zhǔn)確、快速、簡便。邢俊波等[30]采用HPLC-UV-MS方法鑒別中藥制劑中可能添加的糖皮質(zhì)激素，方法采用高效液相色譜、質(zhì)譜法。SUPELCO Discovery C18(250mm×4.6mm,5μm)分析柱；乙腈-水為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長為243nm；流速1.0 mL/min；電噴霧離子源,采用質(zhì)譜多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)掃描方式，結(jié)果在該液相條件下,能同時(shí)有效分離6種糖皮質(zhì)激素。應(yīng)用該法鑒定了中藥制劑中的糖皮質(zhì)激素,通過液相色譜保留時(shí)間、相對(duì)分子質(zhì)量、二級(jí)質(zhì)譜碎片信息等方面信息,可確定樣品中含有氫化可的松、醋酸潑尼松龍。從而表明本測(cè)定方法簡便、靈敏,專屬性強(qiáng),可為中藥制劑中糖皮質(zhì)激素的檢測(cè)提供快捷有效的分析方法。楊勝丹等[31]人采用半制備高效液相色譜法分離純化川木通中齊墩果酸，純化齊墩果酸的制備色譜條件:半制備型色譜柱ZORBAX SB-C18(9.4mm×150mm,5μm),流動(dòng)相乙腈-水=87∶13,流速3 mL/min,柱溫室溫,檢測(cè)器VWD檢測(cè)器,波長210nm,進(jìn)樣量20μL。對(duì)制備出的餾分進(jìn)行定性分析，該法純化效果好、操作高效、快速。

4.2 定量鑒別 常規(guī)的中藥含量測(cè)定是對(duì)已知的有效成分或指標(biāo)性成分進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定的成分個(gè)數(shù)不多，常常是一到兩個(gè)成分。隨著中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求的提高和質(zhì)量控制技術(shù)的發(fā)展，所測(cè)定的成分也逐漸增多，尤其是中藥復(fù)方，往往要求測(cè)定多個(gè)成分。韓超[32]采用高效液相色譜法測(cè)定白花前胡提取物中白花前胡甲素的含量，該方法適用于白花前胡提取物的質(zhì)量控制。周武慶等[33]人采用反相高效液相色譜法測(cè)定酸棗仁顆粒中酸棗仁皂苷A與酸棗仁皂苷B的含量，采用Hypersil C18柱為分析柱，使用以乙腈和水為流動(dòng)相的二元梯度洗脫方法，檢測(cè)波長為201nm，流速為1mL/min。結(jié)果酸棗仁皂苷A在50.01～198.2μg/mL與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r=0.9998，n=5)，平均回收率為99.41%；酸棗仁皂苷B在66.25～209.0μg/mL與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r=0.9998，n=5)，平均回收率為99.34%。結(jié)論該法簡便、快速、重現(xiàn)性好，適用于酸棗仁顆粒中酸棗仁皂苷A與酸棗仁皂苷B的定量分析。趙文昌等[34]建立測(cè)定苦豆子總堿中槐定堿含量的反相高效液相色譜法。該方法采用Kromasil 100-5NH2色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)，流動(dòng)相為乙腈-磷酸水溶液(pH為2)-無水乙醇(80∶8∶10)，檢測(cè)波長205 nm，流速1.0mL/min，柱溫30℃。結(jié)果槐定堿進(jìn)樣量與峰面積的線性范圍為0.02～8.3μg(r=1.000)；平均加樣回收率為98.85%，RSD為3.13%(n=5)；苦豆子總堿中槐定堿的平均含量為42.7%。結(jié)論所采用的反相高效液相色譜法的含量測(cè)定方法靈敏度高，專屬性強(qiáng)，可用于苦豆子總堿中槐定堿的質(zhì)量控制。俞麗等[35]人運(yùn)用反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定不同產(chǎn)地龍膽中龍膽苦苷(GPS)和2'-(2,3-二羥基苯甲酰)-獐牙菜苷(DHBS)的含量，結(jié)果該方法準(zhǔn)確、簡便、重現(xiàn)性好龍膽的種間(四基源藥材)的龍膽苦苷和2'-(2,3-二羥基苯甲酰)-獐牙菜苷(DHBS)的含量有較大的差異。何昱等[36]人針對(duì)不同批次丹參采用高效液相色譜及紫外-可見光二極管陣列檢測(cè)器聯(lián)用技術(shù)(HPLC-DAD)，以乙腈-水(含0.026%磷酸)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，檢測(cè)波長270nm，柱溫24℃。結(jié)果10個(gè)批次丹參提取液中，原兒茶醛、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮IIA濃度在2一定范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，而其中原兒茶醛的含量為0.00124%～0.00205%，丹酚酸B的含量為7.26%～9.94%，隱丹參酮的含量為0.190%～0.568%，丹參酮IIA含量為0.512～1.252%。表明應(yīng)用HPLC-DAD法同時(shí)對(duì)丹參中原兒茶醛、丹酚酸B、隱丹參酮及丹參酮IIA的測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可同時(shí)將它們作為丹參的質(zhì)量控制指標(biāo)。

4.3 HPLC指紋圖譜分析 對(duì)中藥材或中成藥的某個(gè)有效成分或指標(biāo)成分進(jìn)行定性定量分析仍不能有效地控制中藥材或中成藥的質(zhì)量指紋圖譜作為一種新的分析方法正適用于這種要求和中藥的這些特點(diǎn)近年來指紋圖譜的運(yùn)用在國內(nèi)已經(jīng)引起了醫(yī)藥工作者極大關(guān)注已成為中藥現(xiàn)代化領(lǐng)域的一種新趨勢(shì)文獻(xiàn)，對(duì)指紋圖譜的定義是經(jīng)光譜或色譜測(cè)定得到的組分群體的特征圖譜或圖像中藥指紋圖譜是指某種或某產(chǎn)地中藥材經(jīng)適當(dāng)處理后采用一定的分析手段得到的能夠標(biāo)示該中藥材或中成藥特性的某類或數(shù)類成分的色譜或光譜的圖譜它具有特征性和穩(wěn)定性通過指紋圖譜的特征性能有效鑒別樣品的真?zhèn)位虍a(chǎn)地通過其主要特征峰的面積或比例的限定能有效控制樣品的質(zhì)量確保藥品質(zhì)量的相對(duì)穩(wěn)定對(duì)非單一成分藥物的質(zhì)量控制而言指紋圖譜能全面綜合地反應(yīng)和控制中藥或天然藥物質(zhì)量雖然它不能代替含量測(cè)定但比測(cè)定任何單一成分所提供的信息卻豐富和有用得。李麗等[37]人所采用的色譜條件能將防風(fēng)中各成分有效分離，全程分析時(shí)間70min，同時(shí)進(jìn)行了10批防風(fēng)飲片的HPLC指紋圖譜的鑒別。經(jīng)與對(duì)照品圖譜比較，在防風(fēng)飲片HPLC圖譜中共檢定出l1個(gè)化合物，為防風(fēng)飲片鑒別提供了新的方法。王巧等[38]用HPLC指紋圖譜對(duì)白芍與赤芍進(jìn)行了分析。根據(jù)白芍樣品的指紋圖譜，發(fā)現(xiàn)所有類別的白芍樣品的指紋圖譜具有基本相同的色譜峰數(shù)目，但各峰之間的面積比值差別較大。而從赤芍和川赤芍(Paeonia veitchii)根的指紋圖譜可知，兩者的化學(xué)成分具有較明顯的不同；另外，白芍和赤芍的化學(xué)成分區(qū)別明顯，芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷亞硫酸酯、苯甲酸和丹皮酚是兩者的最大差別，芍藥苷亞硫酸酯和丹皮酚分別是白芍和赤芍的獨(dú)有成分。萬建波等[39]人建立中藥三七的高效液相色譜特征譜，方法運(yùn)用加壓溶劑提取HPLC-DAD分析28個(gè)產(chǎn)地的三七藥材，所得的圖譜采用中國藥典委員會(huì)開發(fā)的“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(Version 2004A)”軟件進(jìn)行分析，結(jié)果28個(gè)三七樣品色譜圖中各色譜峰分離良好,從中確定了13個(gè)特征峰,其中8個(gè)主要色譜峰經(jīng)對(duì)照品確認(rèn)，所有藥材色譜圖與軟件生成的對(duì)照譜相似度為高，因此此該方法簡便、重現(xiàn)性好、具可操作性，可科學(xué)評(píng)價(jià)及有效控制三七藥材質(zhì)量。章弘揚(yáng)等建立了清開靈注射液HPLC-UV-MS/MS指紋圖譜，為中藥復(fù)雜體系的分析及其質(zhì)量控制提供了一種有效、可靠的模式。

5 結(jié)語

綜上所述，中藥質(zhì)量的研究正在朝著全面、綜合的方向發(fā)展，色譜技術(shù)以其高效的分離優(yōu)勢(shì)和多種檢測(cè)方法在中藥質(zhì)量研究中發(fā)揮著越來越重要的作用，而其中HPLC及其聯(lián)用技術(shù)在中藥的研究中起著至關(guān)重要的作用。中藥定性定量技術(shù)的發(fā)展是中藥現(xiàn)代化的核心內(nèi)容,也是中藥國際化的關(guān)鍵。我們應(yīng)該有組織地開展多學(xué)科合作，應(yīng)用新技術(shù)深入研究中藥的理化性質(zhì)和含量測(cè)定，建立提出和推廣自己的中藥國際標(biāo)準(zhǔn)，最終達(dá)到影響世界，實(shí)現(xiàn)雙向接軌的目標(biāo)。

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