“半蔞貝蘞及攻烏”反藥組合對(duì)制川烏鎮(zhèn)痛作用的影響*

賴曉藝，莊朋偉，盧志強(qiáng)，李麗娟，張騰，王萍，賈佳明，張艷軍

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，天津 300193；2.天津市中藥藥理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300193）

“半蔞貝蘞及攻烏”反藥組合對(duì)制川烏鎮(zhèn)痛作用的影響*

賴曉藝1，2，莊朋偉1，2，盧志強(qiáng)1，2，李麗娟1，2，張騰1，2，王萍1，2，賈佳明1，2，張艷軍1，2

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，天津 300193；2.天津市中藥藥理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300193）

[目的]考察“半蔞貝蘞及攻烏”反藥組合對(duì)制川烏鎮(zhèn)痛效果的影響。[方法]采用輻射熱刺激甩尾法檢測(cè)給藥前及給藥后不同時(shí)間點(diǎn)小鼠的痛閾值，明確“半蔞貝蘞及攻烏”各單味藥的鎮(zhèn)痛效果；在此基礎(chǔ)上，將制川烏與各單藥以1∶1配伍，考察反藥組合對(duì)制川烏鎮(zhèn)痛效果的影響。[結(jié)果]制川烏在含生藥4 g/kg劑量下，15 min時(shí)鎮(zhèn)痛效果最佳，與給藥前相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；法半夏、瓜蔞、白及單獨(dú)使用有一定的鎮(zhèn)痛作用，與給藥前相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但起效時(shí)間晚于制川烏；川貝母、白蘞鎮(zhèn)痛作用與給藥前相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；法半夏、川貝母、白及與制川烏配伍后可使制川烏的鎮(zhèn)痛起效時(shí)間延后；瓜蔞與制川烏配伍使鎮(zhèn)痛作用起效時(shí)間提前，并可持續(xù)一定時(shí)間（約30 min）；白蘞與制川烏配伍后可顯著降低制川烏的鎮(zhèn)痛效果。[結(jié)論]降低烏頭的鎮(zhèn)痛作用或延遲起效時(shí)間可能是“半蔞貝蘞及攻烏”反藥組合相反的具體表現(xiàn)之一。

制川烏；配伍；甩尾法；鎮(zhèn)痛

川烏為毛茛科植物烏頭（Aconitum Carmichaeli Debx．）的干燥母根，味苦、辛，大熱，有大毒，善祛風(fēng)除濕、溫經(jīng)散寒、行瘀止痛，廣泛用于風(fēng)濕麻痹、關(guān)節(jié)疼痛、心腹冷痛、寒病作痛等癥[1]。傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為川烏不可以與半夏、瓜蔞、貝母、白蘞、白及同用[2]，認(rèn)為反藥組合使用可能增加川烏的毒性或是降低川烏的藥效[3]，但目前關(guān)于減效的說法尚缺乏系統(tǒng)的研究。因此，對(duì)“半蔞貝蘞及攻烏”反藥組合對(duì)制川烏鎮(zhèn)痛作用的影響進(jìn)行了研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥物的制備將藥材粉碎成粗顆粒，稱取一定量的制川烏（四川江油），法半夏（江蘇泰州），瓜蔞（江蘇洪澤），川貝母（四川康定），白蘞（安徽六安），白及（貴州凱里），制川烏與各單藥1∶1配伍（上述各藥經(jīng)本校中藥鑒定教研室鑒定均符合飲片標(biāo)準(zhǔn)）。蒸餾水浸泡1 h，回流提取2次，第1次為10倍量蒸餾水煎煮1.5h，第2次為8倍量蒸餾水煎煮1.5 h，8層紗布過濾，合并2次濾液，60℃左右減壓蒸餾，濃縮至浸膏狀，置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器XR-YLS-12A型鼠尾光照痛測(cè)痛儀（上海欣軟信息科技有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ICR小鼠，SPF級(jí)，體質(zhì)量18～22 g，雌雄各半。購于北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證編號(hào)：SCXK（京）2009－0004。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組及劑量ICR小鼠，采用分層隨機(jī)分組方法隨機(jī)分組，每組10只，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水12 h。實(shí)驗(yàn)分為制川烏低劑量組（含生藥0.4g/kg）、制川烏中劑量組（含生藥2 g/kg）、制川烏高劑量組（含生藥4 g/kg）、法半夏組、制川烏配伍法半夏1∶1組、瓜蔞組、制川烏配伍瓜蔞1∶1組、川貝母組、制川烏配伍川貝母1∶1組、白蘞組、制川烏配伍白蘞1∶1組、白及組、制川烏配伍白及1∶1組。

2.2 給藥及檢測(cè)按照設(shè)計(jì)的給藥劑量對(duì)小鼠灌胃給藥，給藥體積為0.02 mL/g，檢測(cè)給藥前及給藥后5、15、30、60、120 min的痛閾值，計(jì)算痛閾提高百分率。具體實(shí)驗(yàn)方法參照中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)輻射熱刺激法略加改進(jìn)[4]：將小鼠置于自制的圓筒內(nèi)，使其不能自由活動(dòng)，鼠尾由筒后的圓孔穿出，讓其自由下垂，待動(dòng)物保持安靜后開始實(shí)驗(yàn)。測(cè)痛時(shí)透光漏斗外部緊貼鼠尾下部1/3處，借電子秒表記錄從照射開始至出現(xiàn)甩尾時(shí)作為痛閾值。實(shí)驗(yàn)選擇22 V、280 W、16 mm的照射條件，每只小鼠測(cè)定2次，取其平均值作為痛閾值[5-7]，且選用5 s左右甩尾的小鼠，小于3 s或大于10 s的小鼠表示反應(yīng)過敏或遲鈍，舍棄不用；給藥后，若照射12.5 s仍不甩尾時(shí)，即停止照射，以免燙傷，并以12.5 s計(jì)。

2.3 統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組內(nèi)比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，組間比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 制川烏鎮(zhèn)痛作用結(jié)果制川烏在含生藥0.4g/kg的給藥劑量下，給藥前后小鼠的痛閾值無顯著性變化；在含生藥2 g/kg的給藥劑量下，鎮(zhèn)痛效果在30 min左右可達(dá)到最大值，與給藥前相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在含生藥4 g/kg的給藥劑量下，能迅速起效，15 min可達(dá)到最大值，與給藥前相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與中劑量組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，隨后藥效逐漸降低，在2 h內(nèi)鎮(zhèn)痛作用逐漸消失，結(jié)果見圖1、表1。

3.2 制川烏與法半夏配伍鎮(zhèn)痛作用結(jié)果制川烏與法半夏配伍可顯著降低制川烏的鎮(zhèn)痛效果，并能延遲制川烏的起效時(shí)間，30 min可達(dá)到最大值，與給藥前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；法半夏在含生藥4 g/kg的給藥劑量下，30 min時(shí)鎮(zhèn)痛效果最佳，與給藥前相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見圖2、表2。

3.3 制川烏與瓜蔞配伍鎮(zhèn)痛作用結(jié)果制川烏與瓜蔞配伍在15 min可顯著降低制川烏的鎮(zhèn)痛效果，但可使鎮(zhèn)痛效果提前達(dá)到最大值，5 min時(shí)鎮(zhèn)痛效果最佳，與給藥前相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并持續(xù)一段時(shí)間（30 min左右）；瓜蔞在含生藥4 g/kg的給藥劑量下，在30 min時(shí)鎮(zhèn)痛作用可達(dá)最大值，與給藥前相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見圖3、表3。

3.4 制川烏與川貝母配伍鎮(zhèn)痛作用結(jié)果制川烏與川貝母配伍可延遲制川烏鎮(zhèn)痛作用達(dá)峰時(shí)間，30 min時(shí)鎮(zhèn)痛效果最佳，與給藥前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；川貝母在含生藥4 g/kg的給藥劑量下，給藥后2 h內(nèi)鎮(zhèn)痛作用與給藥前相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見圖4、表4。

3.5 制川烏與白蘞配伍鎮(zhèn)痛作用結(jié)果制川烏與白蘞配伍在15 min時(shí)可顯著降低制川烏的鎮(zhèn)痛效果；白蘞在含生藥4 g/kg的給藥劑量下，給藥后2 h內(nèi)鎮(zhèn)痛作用與給藥前相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見圖5、表5。

3.6 制川烏與白及配伍鎮(zhèn)痛作用結(jié)果制川烏與白及配伍后藥效達(dá)峰時(shí)間明顯延后，60 min時(shí)達(dá)到最大值，與給藥前相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；白及在含生藥4 g/kg的給藥劑量下，在15～60 min表現(xiàn)出穩(wěn)定而持久的鎮(zhèn)痛作用，與給藥前相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見圖6、表6。

4 討論

圖1 制川烏鎮(zhèn)痛作用結(jié)果

圖2 制川烏與法半夏配伍鎮(zhèn)痛作用結(jié)果

圖3 制川烏與瓜蔞配伍鎮(zhèn)痛作用結(jié)果

圖4 制川烏與川貝母配伍鎮(zhèn)痛作用結(jié)果

圖5 制川烏與白蘞配伍鎮(zhèn)痛作用結(jié)果

圖6 制川烏與白及配伍鎮(zhèn)痛作用結(jié)果

表1 制川烏鎮(zhèn)痛作用結(jié)果（±s，n＝10）

表1 制川烏鎮(zhèn)痛作用結(jié)果（±s，n＝10）

注：與給藥前比較，*P＜0.05，**P＜0.01；高劑量組與中劑量組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

組別劑量（含生藥g/kg）藥前痛閾值（s）給藥后痛閾值（s）5 min15 min30 min60 min120 min低劑量0.45.21±0.955.31±1.195.42±0.835.47±1.105.31±1.045.16±1.22中劑量24.98±1.225.68±1.096.03±0.72*6.77±1.30**6.27±1.01*5.23±1.31高劑量45.08±1.676.86±1.21*△8.13±0.51**△△6.50±0.99*5.79±1.325.28±1.09

表2 制川烏與法半夏配伍鎮(zhèn)痛作用結(jié)果（±s，n＝10）

表2 制川烏與法半夏配伍鎮(zhèn)痛作用結(jié)果（±s，n＝10）

注：與給藥前比較，*P＜0.05，**P＜0.01；烏半組與制川烏組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

組別劑量（含生藥g/kg）藥前痛閾值（s）給藥后痛閾值（s）5 min15 min30 min60 min120 min制川烏45.08±1.676.86±1.21*8.13±2.11**6.50±0.99*5.79±1.325.28±1.09法半夏45.05±1.455.30±1.345.56±2.016.31±1.50*5.35±1.165.20±2.00烏半（1∶1）4∶45.11±1.565.88±0.99Δ6.03±1.85*ΔΔ7.61±1.87**6.39±2.14*5.62±1.36

表3 制川烏與瓜蔞配伍鎮(zhèn)痛作用結(jié)果（±s，n＝10）

表3 制川烏與瓜蔞配伍鎮(zhèn)痛作用結(jié)果（±s，n＝10）

注：與給藥前比較，*P＜0.05，**P＜0.01；烏瓜組與制川烏組比較，ΔP＜0.05。

組別劑量（含生藥g/kg）藥前痛閾值（s）給藥后痛閾值（s）5 min15 min30 min60 min120 min制川烏45.08±1.676.86±1.21*8.13±2.11**6.50±0.99*5.79±1.325.28±1.09瓜蔞45.10±2.015.61±0.696.53±1.32*8.72±1.86**6.32±1.64*5.46±2.10烏瓜（1∶1）4∶44.96±1.277.14±1.50**6.84±1.93*Δ6.75±1.47*5.85±1.535.46±1.82

表4 制川烏與川貝母配伍鎮(zhèn)痛作用結(jié)果（±s，n＝10）

表4 制川烏與川貝母配伍鎮(zhèn)痛作用結(jié)果（±s，n＝10）

注：與給藥前比較，*P＜0.05，**P＜0.01；烏貝組與制川烏組比較，ΔΔP＜0.01。

組別劑量（含生藥g/kg）藥前痛閾值（s）給藥后痛閾值（s）5 min15 min30 min60 min120 min制川烏45.08±1.676.86±1.21*8.13±2.11**6.50±0.99*5.79±1.325.28±1.09川貝母44.88±1.464.98±1.455.08±1.415.12±1.505.32±2.044.83±1.71烏貝（1∶1）4∶44.93±1.036.11±2.12*5.92±0.96*ΔΔ7.10±1.38**5.47±0.925.37±1.26

表5 制川烏與白蘞配伍鎮(zhèn)痛作用結(jié)果（±s，n＝10）

表5 制川烏與白蘞配伍鎮(zhèn)痛作用結(jié)果（±s，n＝10）

注：與給藥前比較，*P＜0.05，**P＜0.01；烏蘞組與制川烏組比較，ΔP＜0.05。

組別劑量（含生藥g/kg）藥前痛閾值（s）給藥后痛閾值（s）5 min15 min30 min60 min120 min制川烏45.08±1.676.86±1.21*8.13±2.11**6.50±0.99*5.79±1.325.28±1.09白蘞44.95±0.635.30±1.935.15±2.055.15±1.305.00±0.914.85±1.50烏蘞（1∶1）4∶45.11±1.226.39±1.74*6.59±1.65*Δ6.29±1.13*5.67±1.525.98±1.64

表6 制川烏與白及配伍鎮(zhèn)痛作用結(jié)果（±s，n＝10）

表6 制川烏與白及配伍鎮(zhèn)痛作用結(jié)果（±s，n＝10）

注：與給藥前比較，*P＜0.05，**P＜0.01；烏及組與制川烏組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。

組別劑量（含生藥g/kg）藥前痛閾值（s）給藥后痛閾值（s）5 min15 min30 min60 min120 min制川烏45.08±1.676.86±1.21*8.13±2.1**6.50±0.99*5.79±1.325.28±1.09白及44.94±0.795.53±1.447.11±1.93**6.87±1.66**7.01±0.91**5.78±0.73烏及（1∶1）4∶45.21±0.836.20±2.02*6.93±1.64*Δ7.45±1.82**7.87±0.84**ΔΔ5.68±0.86

“半蔞貝蘞及攻烏”屬于“十八反”的范疇，“十八反”是中醫(yī)藥界認(rèn)定的配伍禁忌，并被編成歌訣，廣為流傳。上至《神農(nóng)本草經(jīng)》，下至現(xiàn)在的《中藥學(xué)》、《方劑學(xué)》、《中國藥典》等著作都是言之鑿鑿[8]，然而，其相反的具體表現(xiàn)并不清楚。川烏在治療風(fēng)濕痹痛的諸多寒熱藥中的應(yīng)用比例較高，療效也很顯著[9]；現(xiàn)代藥理研究也證實(shí)，川烏具有顯著的鎮(zhèn)痛作用[10]。經(jīng)本課題組前期對(duì)川烏毒性的考察，制川烏含生藥4 g/kg的給藥劑量為安全劑量，無毒副作用，實(shí)驗(yàn)中為了更好的反映藥組合對(duì)制川烏鎮(zhèn)痛效果的影響，選擇該給藥劑量。本研究針對(duì)川烏鎮(zhèn)痛效果，探討了“半蔞貝蘞及攻烏”反藥組合對(duì)制川烏鎮(zhèn)痛效果的影響，結(jié)果表明川烏與各單藥配伍后鎮(zhèn)痛作用降低或起效時(shí)間延遲，與傳統(tǒng)“十八反”理論相符。

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Impact of contrary medicine combination on analgesia effect of processed Aconiti Radix before and after combination with Pinellia,Snakegourd Fruit,Fritillary,Ampelopsis Japonica Makino and Rhizoma Bletillae

LAI Xiao-yi1,2,ZHUANG Peng-wei1,2,LU Zhi-qiang1,2,LI Li-juan1,2,ZHANG Teng1,2, WANG Ping1,2,JIA Jia-ming1,2,ZHANG Yan-jun1,2
（1.College of TCM,Tianjin University of TCM,Tianjin 300193,China;2.Tianjin Key Laboratory of Pharmacology of Chinese Medicine,Tianjin 300193,China）

[Objective]To study the impact on analgesia of processed Aconiti Radix analgesia before and after combination with Pinellia,Snakegourd Fruit,Fritillary,Ampelopsis Japonica Makino and Rhizoma Bletillae. [Methods]Using the tail-flick method by radiant heat stimulation the pain threshold of the mice was detected at different time before and after oral administration.The analgesic effect of every single herb was cleared.On this basis,the Processed Aconite Radix was combined with every single herb at 1∶1 and then the impact of anti-drug combination on Processed Aconite Radix analgesic effect was detected.[Results]Processed Aconite Radix could significantly increase the pain threshold in mice at 15 min compared with that before administration under the dose of 4 g crude drug/kg;Pinellia,Snakegourd Fruit and Rhizoma Bletillae used alone had some analgesic effect.The difference was significant compared with that before administration,but the onset time was more delayed than Processed Aconite Radix;For Fritillaria,Ampelopsis Japonica Makino in analgesic effect.There was no significant difference compared with that before administration.Pinellia,Fritillaria and Rhizoma Bletillae could delay the onset time of Processed Aconite Radix and Snakegourd Fruit could make the onset time in advanced and sustainable for a certain period of time(about 30 min).Ampelopsis Japonica could significantly reduce the analgesic effect of Processed Aconite Radix.[Conclusion]Reducing the analgesic effect of Aconitum or delaying the onset time may be one of the specific performance of processed Aconite Radix after combination with Pinellia,Snakegourd Fruit, Fritillary,Ampelopsis Japonica Makino and Rhizoma Bletillae.

Processed Aconite Radix;compatibility;Tail-Flick method;analgesia

R285.5

A

1673-9043（2014）01-0032-04

10.11656/j.issn.1673-9043.2014.01.11

2013-09-08）

國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展規(guī)劃（973計(jì)劃）（2011CB 505300，2011CB505302）。

賴曉藝（1987-），女，碩士研究生，主要從事中藥藥理研究。

張艷軍，E-mail:zyjsunye@163.com。