土鱉蟲藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高

水彩紅 曹 紅

（中國人民解放軍總后勤部衛(wèi)生部藥品儀器檢驗所，北京 100071）

土鱉蟲藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高

水彩紅 曹 紅

（中國人民解放軍總后勤部衛(wèi)生部藥品儀器檢驗所，北京 100071）

目的對土鱉蟲藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行方法提高。方法采用薄層色譜法對土鱉蟲中所含四種主要的氨基酸精氨酸、甘氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸進(jìn)行定性鑒別；采用高效液相色譜法測定該藥材中尿囊素的含量，色譜柱為Agilent ZORBAX NH2（150 mm×4.6 mm；5μm）；流動相：乙腈-水（96∶4）；檢測波長：205 nm；柱溫：40 ℃；結(jié)果薄層色譜法可鑒別出該藥材中的精氨酸、甘氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸，薄層色譜斑點清晰。尿囊素在0.01402～0.4206 μm范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好（r＝0.9999）；樣品的平均加樣回收率為：99.76%，RSD為1.02%，（n=6）。結(jié)論此方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，能有效控制土鱉蟲藥材的質(zhì)量。

土鱉蟲；TLC；HPLC；氨基酸；尿囊素

土鱉蟲是傳統(tǒng)的活血化瘀及治療外傷的中藥。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有破瘀血、續(xù)筋接骨的功效，主要用于治療筋骨折傷、血瘀經(jīng)閉等病癥。據(jù)文獻(xiàn)報道，土鱉蟲中所含的蛋白質(zhì)、氨基酸是活血化瘀的有效成分；尿囊素具有鎮(zhèn)靜作用，且外用能促進(jìn)皮膚潰瘍面和傷口愈合及生肌作用[1，2]。本文通過薄層色譜法，對土鱉蟲中的主要氨基酸進(jìn)行定性鑒別；采用高效液相色譜法對土鱉蟲中的尿囊素進(jìn)行含量測定，以提高藥材質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

METTLER XS 205DU電子天平；Agilent-1200高效液相色譜儀；KQ-300E型超聲波清洗器。

1.2 對照品與試藥

對照品：精氨酸對照品（批號110872-201207）、甘氨酸對照品（批號110735-200102）、纈氨酸對照品（批號110874-201207）、苯丙氨酸對照品（批號111615-200301）、尿囊素對照品。試藥：土鱉蟲藥材，北京綠野藥業(yè)有限公司（批號：10072506、10072507），藥店自購?fù)流M蟲藥材1批（產(chǎn)地河北，批號10061201）硅膠G薄層板：青島海洋化工。乙腈為色譜純；水為重蒸水；其他試劑均為分析純。

2 薄層色譜鑒別

2.1 對照品溶液的制備

取精氨酸、甘氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸對照品，加甲醇制成每1 mL各含0.5 mg的混合溶液，作為對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備

取1 g本品粉末，加50 mL50%的甲醇，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加1 mL甲醇使溶解，作為供試品溶液。

2.3 展開劑與顯色條件

吸取供試品溶液和對照品溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上。以正丁醇-冰醋酸-水（3∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，在105 ℃加熱直至出現(xiàn)清晰的斑點。

2.4 結(jié)果

供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，見圖1。

3 含量測定

3.1 色譜分析條件

色譜柱Agilent ZORBAX NH2（150 mm×4.6 mm；5 μm）；流動相為乙腈-水（96∶4）；檢測波長為205 nm；流速為1.0 mL/min；柱溫40 ℃。

圖1 薄層色譜

3.2 供試品溶液的制備

精密稱取0.3 g土鱉蟲藥材粉末，置具塞錐形瓶中，精密稱定，加入濃度為30%的甲醇25 mL，做30 min超聲處理，自然冷卻后重新稱重，減失的重量用30%的甲醇補(bǔ)足，搖勻，過濾，取續(xù)濾液即可。

3.3 專屬性試驗

分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液與空白溶劑各5 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果空白溶劑在與尿囊素對照品相同保留時間處，無明顯色譜峰，對測定無干擾。

3.4 樣品溶液穩(wěn)定性試驗

將待測樣品溶液，分別在0、2、5、8、12 h測定，結(jié)果表明，樣品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定，尿囊素峰面積RSD為1.33%。

3.5 精密度試驗（重復(fù)性試驗）

取同一批次（10072506）的土鱉蟲藥材，提取方法相同，按上述色譜條件，重復(fù)測定樣品6次，結(jié)果土鱉蟲藥材中尿囊素的平均含量為：1.033 mg/g，RSD=1.28%（n=6）。表明此法重復(fù)性良好。

3.6 線性關(guān)系的考察

精密量取尿囊素對照品溶液（0.2804 mg/mL）0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、3.0 mL，至10 mL量瓶中，加30%甲醇稀釋至刻度，配制成不同濃度的對照品溶液，依次注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：Y=5.36 X–0.5581，相關(guān)系數(shù)r=0.9999（n=6）。結(jié)果表明尿囊素在0.01402～0.4206 μm范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

3.7 準(zhǔn)確度試驗（加樣回收率試驗）

精密稱取已知含量的土鱉蟲藥材（批號：10072506，尿囊素含量為：1.033 mg/g）的樣品0.15 g（共測定6份），分別精確加入尿囊素對照品適量，按“3.3”項下方法制備供試品溶液，測定其含量，并計算回收率，尿囊素的回收率為99.76%，RSD為1.02%。結(jié)果表明本測定方法的回收率良好。

3.8 樣品測定

按上述方法，對收集到的土鱉蟲藥材進(jìn)行尿囊素的含量測定，結(jié)果為：藥店自購：批號為10061201，測定的尿囊素為0.983 mg/g。北京綠野藥業(yè)有限公司：批號為10072506，測定的尿囊素為1.033 mg/ g，批號為10072507，測定的尿囊素為1.005mg/g。

4 討 論

4.1 《中國藥典》2010年版一部中土鱉蟲藥材僅有對照藥材的薄層色譜鑒別，本文建立了土鱉蟲藥材中氨基酸的薄層色譜鑒別，同時采用高效液相色譜法對土鱉蟲中的尿囊素進(jìn)行含量測定，以更好的控制藥材質(zhì)量。

4.2 展開系統(tǒng)的選擇

曾選用正丁醇-乙醇-冰醋酸-水（4∶1∶1∶2）、正丁醇-冰醋酸-水（5∶1∶5）、正丁醇-冰醋酸-水（3∶1∶1）等溶液為展開劑。經(jīng)試驗，本文選用的展開系統(tǒng)各斑點分離效果好，顯色清晰，方法重現(xiàn)性較好，能確證土鱉蟲藥材中氨基酸的特征。

4.3 檢測波長的選擇

對尿囊素在200～400 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，吸收值最大值在205 nm處，靈敏度最高，故選擇其為測定波長。

4.4 含量測定項下供試品溶液提取溶媒的選擇：分別選取甲醇濃度為30%、50%及70%作為提取溶媒進(jìn)行比較，結(jié)果顯示提取較完全的是30%甲醇。

4.5 供試品溶液提取方法的選擇：我們仔細(xì)考察了超聲和加熱回流的時間，實驗結(jié)果表明：超聲處理30 min尿囊素提取效率較高，且操作簡便。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010.

[2] 景晶,曹紅.HPLC法測定土鱉蟲中尿嘧啶和尿囊素的含量[J].藥學(xué)實踐雜志,2010,28(2):134-136.

表3 兩組治療前后肺功指標(biāo)比較

沐舒坦主要活性成分是鹽酸氨溴索，能作用于分泌細(xì)胞，使?jié){液分泌增加加強(qiáng)纖毛的擺動，促進(jìn)痰液排出；降低痰黏稠度、稀釋痰液，使其易于咳出，降低肺泡表面張力，促進(jìn)肺表面活性物質(zhì)的合成和分泌，從而促進(jìn)肺成熟[4]，促進(jìn)纖毛運(yùn)動，使受損的纖毛運(yùn)動加強(qiáng)，進(jìn)而維護(hù)上呼吸道的自凈機(jī)制[5]；沐舒坦能刺激肺泡n型細(xì)胞合成和分泌肺泡表面活性物質(zhì)，防止肺泡委陷和肺不張，協(xié)助無纖毛區(qū)痰液的運(yùn)送，還可清除氧自由基進(jìn)而防止肺損傷[6]。當(dāng)表面活性物質(zhì)達(dá)到一定濃度時還有抗炎作用；抑制炎性介質(zhì)的釋放；對肺有高度親和力、吸收快，在肺組織中濃度高。沐舒坦作為化痰止咳的輔助藥已廣泛用于臨床，本組結(jié)果亦說明沐舒坦具有稀釋痰液、促進(jìn)黏液排除作用及溶解分泌物的特性，對治療呼吸道感染療效確切[7]。

普米克令舒是新合成的腎上腺糖皮質(zhì)激素，成分為布地奈德，對氣道的解痙作用是氫化可的松的600倍，是地塞米松的20倍。布地奈德的抗炎強(qiáng)度是二丙酸倍氯米松的2倍，且與之相比具有較少的全身作用；皮質(zhì)激素的吸入療法由于用量少，藥物不需經(jīng)血液循環(huán)而直接作用于靶器官，因此療效好而不良反應(yīng)少。布地奈德混懸液（普米克令舒）是目前唯一可霧化給藥的吸入型皮質(zhì)激素，吸入后部分被吸收至全身，但首次即有85% ～90%的藥物經(jīng)肝臟降解，所形成的代謝產(chǎn)物活性極低，因此安全可靠。普米克令舒是新合成的腎上腺皮質(zhì)激素，具有抑制細(xì)胞生長因子和趨化因子釋放作用從而使血液中嗜堿粒細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，尤其是黏膜上的肥大細(xì)胞顯著減少，對中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞趨化因子有明顯抑制作用，從而減少中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞向炎癥部位游走和聚集，可直接收縮血管，從而降低血管通透性和黏膜水腫，阻止變態(tài)反應(yīng)遞質(zhì)的釋放和降低各種變態(tài)反應(yīng)遞質(zhì)的活性，能有效清除呼吸道炎癥。高壓空氣泵是以產(chǎn)生的壓縮空氣為動力，噴出的霧化顆粒直徑＜5 pm，可以使藥物最有效地沉積在呼吸道，不需用力吸氣即可達(dá)到療效，因而采用了醫(yī)用壓縮霧化機(jī)這一氣泵驅(qū)動裝置，進(jìn)行被動吸入治療。通氣道高反應(yīng)性及肺功能損害，主要表現(xiàn)為小氣道阻力增加、阻塞性氣功能障礙。在呼吸功能測定中多項指標(biāo)，其中FEV1（L）、FEV1/FVC（%）、FEV1/預(yù)計值（%）是反映肺功能的最主要指標(biāo)，治療組經(jīng)霧化吸人沐舒坦后，氣道阻塞減輕，F(xiàn)EV1（L）、FEV1/FVC（%）、FEV1/預(yù)計值（%）明顯升高，氧分壓與二氧化碳分壓也得到明顯改善，與對照組單純霧化吸入相比，改善更明顯，此結(jié)果可解釋為急性期治療組顯效率明顯高于對照組，在喘憋、肺部哮鳴音、咳嗽癥狀改善方面優(yōu)于對照組。故采用鹽酸氨溴索與普米克令舒壓縮霧化吸入治療支氣管炎，諸如肺部哮鳴音、喘憋、咳嗽改善方面較好。臨床療效也有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），可以縮短支氣管炎的病程。在肺功能方面有明顯改善。同時氧分壓與二氧化碳分壓也得到明顯改善，此結(jié)果可解釋治療組顯效率明顯高于對照組。胸部手術(shù)后患者并發(fā)肺部感染較為常見，多因術(shù)后置胸腔閉式引流，胸部手術(shù)創(chuàng)傷使胸廓活動受限，術(shù)口疼痛使患者不能有效的排痰等因素引起。尤其是心肺功能不全的老年患者、長期吸煙者和慢性支氣管炎患者的發(fā)生率更高。

本試驗結(jié)果表明，鹽酸氨溴索、普米克令舒的聯(lián)合應(yīng)用，在老年肺炎患者霧化吸入時有協(xié)同作用，可降低氣道阻力，改善肺通氣功能，增加其抗炎活性，臨床效果顯著，且糖皮質(zhì)激素的吸入其不良反應(yīng)遠(yuǎn)低于全身激素治療，在給藥途徑簡捷的同時，提高了患者的依從性，是老年肺炎治療值得推薦的方法。

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R282.74

B

1671-8194（2014）11-0069-02