系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清基質(zhì)金屬蛋白酶水平變化

張　穎，蔣中才

(四川省綿陽(yáng)市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川綿陽(yáng) 621000)

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是一種多發(fā)于青年女性的病因未明的自身免疫性結(jié)締組織病。其發(fā)病機(jī)制是機(jī)體對(duì)自身抗原的免疫耐受缺失，從而導(dǎo)致淋巴細(xì)胞大量活化和增生，自身抗體大量產(chǎn)生和炎性介質(zhì)的大量釋放，最終摧毀多個(gè)靶器官[1]。

基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)是一組在細(xì)胞外基質(zhì)(extra cellular matrix，ECM)代謝過程中起主要作用的鋅、鈣離子依賴的蛋白水解酶家族。MMP以無活性的酶原形式分泌，激活后可裂解一種或多種細(xì)胞外基質(zhì)成分，參與人體正常生理過程中ECM的修復(fù)和重構(gòu)。某些MMP表達(dá)及分泌異常所引起的組織炎性損傷可能與疾病的病情和預(yù)后密切相關(guān)[2-6]。因此推測(cè)，MMP作為一類炎性介質(zhì)可能參與了SLE的發(fā)病和組織損傷。本研究通過探討SLE患者血清中MMP-3和MMP-9水平變化與SLE的相關(guān)性，了解MMP和SLE的關(guān)系，進(jìn)一步探求SLE發(fā)病機(jī)制，尋求SLE診斷、預(yù)后評(píng)價(jià)或新的治療靶分子。

材料和方法

對(duì)象及分組

2012年3月至2013年3月四川省綿陽(yáng)市第三人民醫(yī)院腎病風(fēng)濕科門診及住院SLE患者，診斷均符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)1997年修訂的SLE分類標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)SLE疾病活動(dòng)性指數(shù)評(píng)分[7-8]，參照殷文浩等[9]標(biāo)準(zhǔn)將納入患者分為SLE活動(dòng)期組與SLE非活動(dòng)期組。根據(jù)有無累及神經(jīng)系統(tǒng)、腎臟及關(guān)節(jié)分為不同病損組，將同時(shí)無神經(jīng)系統(tǒng)、腎臟及關(guān)節(jié)炎者定義為無器官損害組。對(duì)照組均來自本院同期門診健康體檢者。受試者均排除自身免疫性疾病，且無心、肺、肝和腎損傷。

試劑和儀器

儀器：美國(guó)BECKMAN ACCESS特定蛋白分析儀，BD680酶標(biāo)儀(美國(guó)Bio-Red公司)，熒光顯微鏡(日本OLYMPUS BX-51)，S002型恒溫水浴箱(北京長(zhǎng)源實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠)，TGL-16B高速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)，微量加樣器(Eppendorf 10～1 000 μl)。

試劑：MMP-3，MMP-9檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)R&D Systems公司，采用ABC-ELISA法?？闺p鏈DNA抗體檢測(cè)試劑盒購(gòu)自德國(guó)歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷有限公司，采用綠蠅短膜蟲間接免疫熒光法。

方法

清晨空腹抽取SLE患者及健康體檢者靜脈血約3 ml，4 000 r/min離心5 min，分離血清，避免溶血。按試劑說明書檢測(cè)樣本MMP-3、MMP-9、雙鏈DNA，補(bǔ)體C3等。將血清MMP-3和MMP-9水平分為5個(gè)等級(jí)(根據(jù)結(jié)果極差人工分級(jí))，分析該兩項(xiàng)水平變化與SLE疾病活動(dòng)的相關(guān)性。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均通過SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行處理。經(jīng)過SPSS正態(tài)性檢驗(yàn)，樣本近似正態(tài)分布，統(tǒng)計(jì)量采用(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)表示，均數(shù)比較用t檢驗(yàn)、方差分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。MMP-3和MMP-9水平與SLE活動(dòng)期組病例數(shù)進(jìn)行Cochran Armitage趨勢(shì)χ2檢驗(yàn)。

結(jié)　　果

一般資料

共納入SLE組患者85例，女79例，男6例；年齡17～65歲，平均37.1歲；病程1個(gè)月～14年，平均35.1個(gè)月。將其中臨床資料相對(duì)充分的59例患者分為SLE活動(dòng)期組22例，SLE非活動(dòng)期組37例。對(duì)照組30例，女28例，男2例；年齡21～69歲，平均39.4歲。SLE組和對(duì)照組在性別及年齡構(gòu)成上差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

血清MMP-3和MMP-9水平

SLE患者血清MMP-3水平顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，血清MMP-9水平顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。

SLE活動(dòng)期組和SLE非活動(dòng)期組血清MMP-3水平均高于對(duì)照組(P<0.01)；SLE活動(dòng)期組血清MMP-9水平低于SLE非活動(dòng)期組和對(duì)照組(P<0.05，P<0.01)。其余各組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)(表1)。

SLE活動(dòng)期組血清MMP-3和MMP-9水平

Cochran Armitage趨勢(shì)χ2檢驗(yàn)顯示，血清MMP-3水平與SLE活動(dòng)期患者比例無明顯相關(guān)(χ2=1.089，P>0.05)(表2)；而隨著血清MMP-9水平降低，SLE活動(dòng)期患者比例升高(χ2=9.614，P<0.01)(表3)。

表1　SLE活動(dòng)期與非活動(dòng)期患者血清基質(zhì)金屬蛋白酶-3和基質(zhì)金屬蛋白酶-9水平

SLE：系統(tǒng)性紅斑狼瘡；與對(duì)照組相比，*P<0.05，#P<0.01；與SLE非活動(dòng)期相比，△P<0.05

表2　血清基質(zhì)金屬蛋白酶-3與SLE活動(dòng)期組患者比例的關(guān)系

SLE：系統(tǒng)性紅斑狼瘡

表3　血清基質(zhì)金屬蛋白酶-9與SLE活動(dòng)期組患者比例的關(guān)系

SLE：系統(tǒng)性紅斑狼瘡

SLE不同病損患者血清MMP-3和MMP-9水平

85例SLE患者，無器官損害組22例，神經(jīng)系統(tǒng)損害組17例，腎臟損害組27例，關(guān)節(jié)炎組19例。血清MMP-3水平各組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)；神經(jīng)系統(tǒng)損害、腎損害和關(guān)節(jié)炎組患者血清MMP-9水平均低于無器官損害組(均P<0.05)(表4)。

討　　論

MMP-3又稱為基質(zhì)溶解素-1，相對(duì)分子質(zhì)量為54000，是一種有著廣泛底物的金屬蛋白酶。除了可以降解幾乎所有的ECM外，還可去除Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型原膠原N、C末端肽，起原膠原肽酶的作用和激活MMP-1，8，9[10]。MMP-3主要由成纖維細(xì)胞，巨噬細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞等產(chǎn)生。有研究表明，MMP-3參與SLE的病理生理[11-13]，其在SLE中的作用和意義尚不明確，比較傾向于其降解ECM，造成細(xì)胞外基質(zhì)松解，便于免疫復(fù)合物沉積，刺激了局部炎癥反應(yīng)的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，SLE患者組血清MMP-3明顯高于對(duì)照組，提示MMP-3可能參與了SLE的發(fā)病過程。

已有大量研究表明[14-17]，MMP-3可能與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、腎小球腎炎及腦卒中等發(fā)病有關(guān)。關(guān)節(jié)痛和狼瘡腎炎是SLE最常見的臨床表現(xiàn)，腦卒中也是SLE患者死亡的一個(gè)重要原因，然而SLE患者受累關(guān)節(jié)和腎臟的病理表現(xiàn)不同于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和慢性腎小球腎炎[18]。本研究根據(jù)不同病損情況將SLE患者分組比較血清MMP-3水平，但并未發(fā)現(xiàn)MMP-3明顯變化。筆者推測(cè)MMP-3在SLE并發(fā)癥中的病理機(jī)制可能是不同的，有待進(jìn)一步研究。

表4　不同病損系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清基質(zhì)金屬蛋白酶-3和基質(zhì)金屬蛋白酶-9水平

與無器官損害組相比，*P<0.05

MMP-9是MMP家族中分子結(jié)構(gòu)最復(fù)雜的成員之一，是炎性反應(yīng)重要的“調(diào)節(jié)劑”。MMP-9又稱為Ⅳ型膠原酶或明膠酶B，主要有中性粒細(xì)胞和活化的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生。MMP-9與其他金屬蛋白酶一樣，以水溶性酶原形式分泌至胞外。通常情況下，MMP-9分泌維持在較低水平，分泌出的MMP-9與ECM各種成分結(jié)合儲(chǔ)存在ECM中，需在ECM中激活才具酶活性[19]。近年來，MMP-9與SLE疾病相關(guān)性研究發(fā)現(xiàn)，MMP-9的表達(dá)可影響炎性細(xì)胞因子的分泌和活性，輔助T細(xì)胞及Thl/Th2類細(xì)胞因子失衡，從而誘導(dǎo)和影響SLE疾病的發(fā)生及發(fā)展[20-21]。然而，MMP-9血清水平變化爭(zhēng)議較大。Ainiala等[22]研究認(rèn)為，SLE患者血清MMP-9水平總體并不升高，病情活動(dòng)時(shí)有所下降。Faber-Elmann等[23]報(bào)道，SLE組血清MMP-9水平明顯高于對(duì)照組，68%SLE患者血清MMP-9呈高水平，高水平的MMP-9與盤狀紅斑、雷諾現(xiàn)象、肺炎、口腔潰瘍、抗心磷脂抗體相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，SLE非活動(dòng)期患者與對(duì)照組血清MMP-9水平無明顯差異；而SLE活動(dòng)期患者血清MMP-9水平明顯低于非活動(dòng)期患者和對(duì)照組，且隨著其水平降低，SLE活動(dòng)期患者比例。提示隨著血清MMP-9水平降低，SLE患者病情活動(dòng)風(fēng)險(xiǎn)增大。Ikeda等[24]在SLE患者動(dòng)脈粥樣硬化風(fēng)險(xiǎn)研究中也得到了相似結(jié)果。另外，本研究顯示SLE患者伴有腎臟損害、中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害和關(guān)節(jié)組織損傷時(shí)時(shí)，MMP-9水平也明顯低于無器官?zèng)]有系統(tǒng)損害的患者，提示MMP-9可能與SLE的進(jìn)行性臟器損害有關(guān)。

綜上所述，血清MMP-3可能參與了SLE的發(fā)病，其水平下降可能與狼瘡病情改善有關(guān)，可作為治療后病情好轉(zhuǎn)的信號(hào)。而血清MMP-9水平和疾病活動(dòng)或進(jìn)行性臟器損害有關(guān)，有望作為評(píng)判SLE疾病活動(dòng)和預(yù)后的指標(biāo)。

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