旋毛蟲肌幼蟲活性鑒別的探討

都景芳，劉璋楠，傅 皓，秦嘯鳴，宋 輝，王國英＊

（1.河南大學(xué)醫(yī)學(xué)院 細(xì)胞與分子免疫學(xué)實驗室，河南 開封 475004；2.河南大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，河南 開封 475004）

旋毛蟲肌幼蟲活性鑒別的探討

都景芳1，劉璋楠2，傅 皓2，秦嘯鳴2，宋 輝2，王國英1＊

（1.河南大學(xué)醫(yī)學(xué)院 細(xì)胞與分子免疫學(xué)實驗室，河南 開封 475004；2.河南大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，河南 開封 475004）

目的通過調(diào)節(jié)溫度鑒別旋毛蟲肌幼蟲的活性。方法人工消化法收集純凈的肌幼蟲，將肌幼蟲分別置于3種溫度下，觀察肌幼蟲的形態(tài)特點。結(jié)果4℃時，活肌幼蟲蟲體蜷曲呈螺旋狀，活動力弱；37℃時，活肌幼蟲蟲體呈屈曲樣運動，運動活潑；將肌幼蟲置100℃溫度時，幼蟲致死，幼蟲蟲體呈C字形或蟲體內(nèi)部結(jié)構(gòu)崩解。結(jié)論旋毛蟲肌幼蟲的活蟲在4℃時蟲體蜷曲，37℃時蟲體運動活潑；死亡蟲體呈C字形或蟲體內(nèi)部結(jié)構(gòu)崩解。

旋毛蟲；肌幼蟲；活性；鑒別

在實驗教學(xué)和科研中，常用人工消化法［1］收集旋毛蟲肌幼蟲，檢出肌幼蟲的數(shù)量可以作為宿主感染的指標(biāo)，收集的肌幼蟲也可制作抗原和作為新的感染源［2－4］。由于活肌幼蟲才能滿足制作抗原和作為新感染源的要求，因此在教學(xué)及科研中需要對旋毛蟲肌幼蟲的活性進行鑒別。有文獻(xiàn)［5］報道，用0.3g／L亞甲藍(lán)、亞甲藍(lán)—伊紅—硼砂染液和10g／L中性紅3種染液能使死亡旋毛蟲肌幼蟲在1min內(nèi)著色，活蟲則不著色，3種染液能快速鑒別旋毛蟲肌幼蟲的死活。但若制作抗原和作為新感染源，旋毛蟲肌幼蟲不能進行染色。我們嘗試僅用控制溫度的方法快速鑒別肌幼蟲的死活，方法簡單快捷，旨在便于實驗教學(xué)和科研。

1 材料和方法

1.1 旋毛蟲蟲種

引自河南省疾病預(yù)防控制中心，用小白鼠傳代保種的旋毛蟲（Trichinella spiralis）。實驗前以肌幼蟲轉(zhuǎn)種小白鼠備用。

1.2 肌幼蟲收集

將感染30d的小白鼠處死，去頭、皮、尾、4爪及內(nèi)臟，留取全部肌肉。在培養(yǎng)皿中將其剪碎后放入500mL燒杯中，加入人工消化液（胃蛋白酶1g，鹽酸1mL，蒸餾水99mL），置于恒溫磁力攪拌器上，37℃攪拌2h，待肌肉完全消化后，經(jīng)過濾、自然沉淀，用無菌生理鹽水漂洗3～4次，即可收集到純凈的肌幼蟲。

1.3 旋毛蟲肌幼蟲活性觀察

將收集的純凈肌幼蟲移入盛有1mL生理鹽水的試管中，置于4℃、30min，取出鏡下觀察；將收集的純凈幼蟲移入盛有1ml生理鹽水的試管中，置于37℃、30min，取出鏡下觀察。

1.4 旋毛蟲肌幼蟲死亡觀察

將收集的純凈肌幼蟲移入盛有1mL生理鹽水的試管中，置于100℃水浴3min，取出鏡下觀察。

2 結(jié)果

2.1 4℃時旋毛蟲肌幼蟲活性觀察

在4℃溫度下，活肌幼蟲蟲體蜷曲呈螺旋狀，活力弱，幾乎不伸曲；若蟲體呈C字形或內(nèi)部結(jié)構(gòu)崩解則為死亡肌幼蟲。見圖1。

2.2 37℃時旋毛蟲肌幼蟲活性觀察

在37℃溫度下，活肌幼蟲蟲體呈屈曲樣運動，運動活潑；若蟲體靜止不動且呈C字形或內(nèi)部結(jié)構(gòu)崩解則為死亡肌幼蟲。見圖2。

圖1 4℃時旋毛蟲肌幼蟲形態(tài)

圖2 37℃時旋毛蟲肌幼蟲形態(tài)

2.3 100℃時旋毛蟲肌幼蟲活性觀察

在100℃溫度時，肌幼蟲死亡，肌幼蟲蟲體呈C字形或蟲體內(nèi)部結(jié)構(gòu)崩。見圖3。

圖3 100℃時旋毛蟲肌幼蟲死亡形態(tài)

3 討論

經(jīng)觀察發(fā)現(xiàn)，通過調(diào)節(jié)溫度活肌幼蟲和死亡肌幼蟲的形態(tài)有非常明顯的區(qū)別：活肌幼蟲在4℃時蟲體蜷曲呈螺旋狀；在37℃時蟲體呈屈曲樣運動，運動活潑；而死亡幼蟲蟲體呈C字形或內(nèi)部結(jié)構(gòu)崩解。

觀察旋毛蟲肌幼蟲活性，用我們介紹的方法同染色法相比較，有以下優(yōu)點：①費用低，不需要使用染料和配制染液，用生理鹽水即可；②只需調(diào)節(jié)溫度，操作簡單；③能滿足制作抗原和作為新感染源的要求；④蟲體輪廓清晰、真實，用于實驗教學(xué)活體觀察，直觀、生動，教學(xué)效果較好。因此，在科研和實驗教學(xué)中，用該法觀察旋毛蟲肌幼蟲活性既簡便快捷又實用。

［1］王國英.旋毛蟲肌幼蟲體外生存狀況實驗研究［J］.中國血吸蟲病防治雜志，2009，21（2）：133－135.

［2］毛立群，唐潔，楊靜，等.旋毛蟲成蟲抗原和肌幼蟲抗原保護性免疫的比較研究［J］.細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2009，25（3）：208－210.

［3］楊曉紅，趙華明，湯兆強，等.肌幼蟲可溶性抗原免疫小鼠抗旋毛蟲感染作用［J］.中國公共衛(wèi)生，2008，24（12）：1481－1482.

［4］崔晶，王潔，王中全，等.旋毛蟲對昆明小鼠最小感染劑量的實驗研究［J］.中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志，2008，26（1）：73－74.

［5］沈玉娟，常正山，張永年.旋毛蟲死活快速鑒別的實驗研究［J］.中國獸醫(yī)寄生蟲病，2003，11（4）：21－22.

［責(zé)任編輯 姬 荷］

Experimental study on the activity in vitro of muscle larvae of Trichinella spiralis

DU Jingfang1，LIU Zhangnan2，F(xiàn)U Hao2，QIN Xiaoming2，SONG Hui 2，WANG Guoying1＊（1.Laboratory of Cellular andmolecular Immunology，Medical College，Henan University，Kaifeng，Henan 475004，China ；2.Medical College Henan of University，Kaifeng，Henan 475004，China）

ObjectiveTo find a new method that for motion the activity in vitro of muscle larvae of Trichinella spiralis by controlling the temperature.MethodsThe muscle larvae were collected by the artificial digestion protocol.The body characteristics of muscle larvae were observed under different temperature conditions.ResultsThe motion of the muscle larvae was characteristically spiral like at 4℃but they were more active at 37℃.The muscle larvae were killed in 100℃ water，their shape became“C”like and their internal fine structure became disordered.ConclusionThe live muscle larvae's movement was spiral like at 4℃and their activity was greater at 37℃.The dead muscle larvae were“C”shaped and their internal structure was disrupted.

Trichinella spiralis；muscle larvae；activity；identift

R383.1

A

1672－7606（2014）02－0097－02

2014－02－10

河南省教育科學(xué)“十二五”規(guī)劃2013年度立項課題 〔（2013）－JKGHC－0166〕。

都景芳（1963－），女，河南鞏義人，實驗師，從事實驗技術(shù)與實驗教學(xué)工作。

＊通訊作者：王國英（1962－），女，山西運城人，碩士，高級實驗師，從事寄生蟲免疫及寄生蟲病流行病學(xué)的教學(xué)和科研工作。