中藥逆轉(zhuǎn)大腸癌多藥耐藥作用研究進(jìn)展

魏亞楠，陳 琳（指導(dǎo)），左文娟，李霖茂

（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)2011級(jí)碩士研究生，廣西 南寧530001；2.廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院體檢中心，廣西 南寧530021；3.廣西醫(yī)科大學(xué)2011級(jí)碩士研究生，廣西 南寧530021）

我國(guó)大腸癌的發(fā)病率逐年攀升，在一些省份已居惡性腫瘤第2位［1］，目前治療仍以手術(shù)為主，手術(shù)后及失去手術(shù)機(jī)會(huì)或轉(zhuǎn)移性大腸癌采用化療、放療等綜合治療，但化療的最大障礙是大腸癌細(xì)胞的多藥耐藥性。多藥耐藥（multidrug resistance，MDR）是指腫瘤細(xì)胞接觸某種化療藥物后，不僅對(duì)該藥物產(chǎn)生耐藥性，而且對(duì)另一些未曾接觸、與之化學(xué)結(jié)構(gòu)和作用機(jī)制完全不同的藥物也產(chǎn)生交叉耐。對(duì)正常組織細(xì)胞而言，多藥耐藥是一種生理防御機(jī)制，但對(duì)腫瘤組織則是化療失敗的主要原因。因此，研究中藥有效成分逆轉(zhuǎn)大腸癌多藥耐藥作用，對(duì)于提高大腸癌的化療效果、改善患者生活質(zhì)量有重要意義。

1 大腸癌多藥耐藥機(jī)制

1.1 膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白

目前已知的膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白主要包括p-糖蛋白（permeability glycoprotein，P-gp）、多藥耐藥相關(guān)蛋白（multidrug resistanceassociated protein，MRP）、肺耐藥蛋白（lung resistance protein，LRP）和乳腺癌耐藥蛋白（breast cancer resistance protein，BCRP）等［2］。它們一方面通過將藥物泵出細(xì)胞，降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度限制腫瘤細(xì)胞的殺滅；另一方面可能是通過調(diào)節(jié)囊泡和核質(zhì)的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)，將化療藥物貯存于囊泡，并減少化療藥物在核與胞質(zhì)間的比例而導(dǎo)致耐藥［3］；還可以通過抑制腫瘤細(xì)胞多種形式凋亡的發(fā)生、影響細(xì)胞內(nèi)pH值、膜的通透性及藥物內(nèi)流等而產(chǎn)生MDR［4］。

1.2 酶系統(tǒng)

在大腸癌耐藥細(xì)胞的胞質(zhì)、胞核中，存在一些與耐藥產(chǎn)生有關(guān)的酶，主要包括谷胱甘肽-S轉(zhuǎn)移酶（gluta thione S-transferase，GST）、拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ（topoisomerase，TopoⅡ）、蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）等。

1.3 凋亡抑制

隨著細(xì)胞凋亡研究深入，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡與細(xì)胞多藥耐藥性之間存在不同程度的內(nèi)在聯(lián)系，而Bcl-2是一種新型的耐藥基因，其導(dǎo)致耐藥的主要機(jī)制是通過抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡途徑完成的，此外抑癌基因P53可以導(dǎo)致腫瘤耐藥［5］。

1.4 轉(zhuǎn)錄因子的激活

抗腫瘤藥物在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)也激活一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB，NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)與κB位點(diǎn)結(jié)合，從而促進(jìn)mdr1基因的表達(dá)［6］。缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）作為缺氧誘導(dǎo)的重要轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，通過轉(zhuǎn)錄激活多種因子參與細(xì)胞的血管生成、無(wú)氧代謝、化療的MDR、放療的抵抗以及腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移［7］。

2 中藥逆轉(zhuǎn)大腸癌MDR研究

2.1 單味中藥及其有效成分

姜黃素。姜黃（curcuma）為姜科姜黃屬多年生草本植物姜黃（curcuma longa L）的干燥根莖，其主要有效成分姜黃素（curcumin）是一種植物多酚［8］。研究發(fā)現(xiàn)，姜黃素在血管內(nèi)皮細(xì)胞中可以通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子AP-1、NF-KB及Egr-1抑制VEGF的表達(dá)及HIF-1α的表達(dá)，由于P53可以通過泛素一蛋白酶體通路（UPP）抑制HIF-1的表達(dá)，而姜黃素可以上調(diào)P53表達(dá)，并且還可以增加其穩(wěn)定性，這樣姜黃素可能通過P53抑制VEGF及HIF-1僅的表達(dá)，逆轉(zhuǎn)HIF-1α及VEGF介導(dǎo)多藥耐藥［9］。楊春梅等［10］研究發(fā)現(xiàn)姜黃素對(duì)人結(jié)腸癌多藥耐藥細(xì)胞株HIF-8／5-FU具有耐藥逆轉(zhuǎn)作用，其逆轉(zhuǎn)作用機(jī)制可能是通過解除耐藥細(xì)胞對(duì)Caspase一3的抑制，誘導(dǎo)更多的耐藥細(xì)胞凋亡而實(shí)現(xiàn)的。

黃連素。黃連素（berberine）是從黃連、黃柏、三棵針、唐松草等植物中提取的季胺類化合物，臨床常作為抗腸道細(xì)菌感染類藥物應(yīng)用。近年來在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究及臨床療效觀察中發(fā)現(xiàn)黃連素在臨床上還有許多新用途，特別是心內(nèi)科、腫瘤科、器官移植方面的研究應(yīng)用有新的發(fā)現(xiàn)［11］。Lin等［12］用極低劑量（0.32μmol）的黃連素處理大腸癌細(xì)胞株COLO205、CT26兩株細(xì)胞并用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)能提高多藥耐藥載體蛋白p－糖蛋白的表達(dá)。進(jìn)一步研究用32μmol的黃連素預(yù)處理24h結(jié)腸癌細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞增殖凋亡方面和形態(tài)學(xué)方面明顯優(yōu)于紫杉醇組，且黃連素能使腫瘤細(xì)胞停滯于G2/M期并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。伍奕等［13］以人結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT-8/VCR為觀察對(duì)象，選用無(wú)干預(yù)措施、不同濃度黃連素處理（實(shí)驗(yàn)組）、維拉帕米處理組（陽(yáng)性對(duì)照組）3種處理方法，用MTT法測(cè)定不同濃度的長(zhǎng)春新堿對(duì)3組細(xì)胞的抑制率，并計(jì)算耐藥逆轉(zhuǎn)倍數(shù)。采用微孔板熒光分光廣度計(jì)測(cè)定3種處理方法細(xì)胞種羅丹明123的熒光強(qiáng)度。結(jié)果證實(shí)黃連素可影響P-pg的蛋白表達(dá)水平，是一種有效果的多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑。

五味子乙素。五味子乙素（Schiscandrin B，SchB）系木蘭科植物五味子的干燥成熟果實(shí)的提取物，具有逆轉(zhuǎn)多藥耐藥的作用，SchB能降低肝細(xì)胞轉(zhuǎn)氨酶活性、抑制脂質(zhì)過氧化，具有抗氧化、護(hù)肝等功效［14，15］。徐秋玲等［16］以耐奧沙利鉑結(jié)腸癌細(xì)胞株THC-8307/OXA為研究對(duì)象，SchB和OXA聯(lián)合應(yīng)用，通過MTT法和Westernblot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，SchB可以降低乳腺癌耐藥蛋白BCRP在THC-8307/OXA中的表達(dá)，而且SchB降低BCRP在耐藥細(xì)胞中的表達(dá)與SchB劑量成正相關(guān)。說明SchB能夠提高OXA藥物敏感性，不僅具有化療藥物增敏作用，還可促進(jìn)化療藥物的抗腫瘤活性。

苦參素。苦參為豆科植物，其主要成分為苦參素?？鄥⑺厥且活惡锌鄥⒋螇A15酮基本結(jié)構(gòu)的化合物，其中氧化苦參堿含量在98%以上。苦參素主要通過抑制腫瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、阻斷細(xì)胞周期、抑制端粒酶活性、抗侵潤(rùn)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、抑制腫瘤新生血管形成起到抗腫瘤作用［17，18］。莫雋全等［19］研究顯示不同體積分?jǐn)?shù)的巖舒注射液（復(fù)方苦參注射液）含藥血清對(duì)人結(jié)腸癌耐長(zhǎng)春新堿細(xì)胞HIF-8/VCR的增殖存在一定的抑制作用，并且10%巖舒注射液含藥血清能逆轉(zhuǎn)HIF-8/VCR對(duì)VCR的耐藥性，且與維拉帕米組的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），對(duì)耐藥的人大腸癌細(xì)胞株顯現(xiàn)出了較好的逆轉(zhuǎn)作用。而經(jīng)巖舒藥物血清作用后的耐藥細(xì)胞株HIF-8/VCR的P-gp的表達(dá)顯著降低，也說明巖舒逆轉(zhuǎn)人大腸癌多藥耐藥機(jī)制是通過下調(diào)P-gp的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的。

穿琥寧。穿琥寧（Androg rapholid，AG）是從中藥穿心蓮葉中提取的有效成分穿心蓮內(nèi)酯與琥珀酸酐所得的脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯單鉀鹽。穿心蓮及其提取物有一定的抗腫瘤作用。布立民等［20］報(bào)道穿琥寧在與丁酸鈉聯(lián)合應(yīng)用時(shí)能增強(qiáng)丁酸鈉對(duì)大腸癌HIF-8細(xì)胞的細(xì)胞毒性，而單獨(dú)應(yīng)用則無(wú)明顯抑制作用。韓英等［21］觀察不同劑量的化療藥物單用及聯(lián)合穿琥寧對(duì)HCT-8/5-Fu耐藥細(xì)胞作用，發(fā)現(xiàn)大劑量的穿琥寧對(duì)HCT-8/5-Fu耐藥細(xì)胞有輕度抑制作用，而中、低濃度對(duì)其細(xì)胞生長(zhǎng)無(wú)明顯抑制作用。但穿琥寧與化療藥物聯(lián)合應(yīng)用，卻可增加化藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。此外，MTT法也證實(shí)中濃度穿琥寧可增加5-Fu、ADM和DDP對(duì)HCT-8/5-Fu耐藥細(xì)胞的抑制率，推測(cè)其機(jī)制是對(duì)P-170糖蛋白功能的影響。

2.2 中藥復(fù)方

復(fù)方三根制劑。復(fù)方三根制劑由虎杖根、藤梨根、水楊梅根、黨參、白術(shù)、茯苓、山楂、甘草等組成。細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)等實(shí)驗(yàn)研究表明，復(fù)方三根制劑對(duì)大鼠胃癌癌前病變有阻斷作用，對(duì)惡性腫瘤術(shù)后的抗復(fù)發(fā)、抗轉(zhuǎn)移有一定作用，能改善癥狀，延長(zhǎng)存活期、增強(qiáng)機(jī)體、抗病能力、提高生存質(zhì)量，對(duì)惡性腫瘤的化療有一定的減毒增效作用。復(fù)方三根制劑可部分恢復(fù)K562/ADR和K562/VCR耐藥細(xì)胞對(duì)ADR的敏感性，而對(duì)VCR抗藥性的逆轉(zhuǎn)作用不明顯；可增加K562/ADR和K562/VCR耐藥細(xì)胞內(nèi)ADR的積聚，并對(duì)外排ADR有一定影響。能增加耐藥細(xì)胞內(nèi)ADR的積聚，減少ADR的外排，部分逆轉(zhuǎn)K562/ADR和K562/VCR兩株細(xì)胞的多藥耐藥［22，23］。

至真方。至真方系已故國(guó)醫(yī)大師張鏡人教授治療胃腸腫瘤的經(jīng)驗(yàn)方，由黃芪、女貞子、薏苡仁、制香附、穿山甲、野葡萄藤、藤梨根等組成，已經(jīng)應(yīng)用臨床多年，輔助治療大腸癌能提高化療效果，減少不良反應(yīng)，改善生活質(zhì)量，延長(zhǎng)生存期。陳志霞等［24］采用MTT法觀察不同體積分?jǐn)?shù)含藥血清對(duì)HCT-8/VCR細(xì)胞的影響，結(jié)果其對(duì)HCT-8/VCR細(xì)胞存在一定的增殖抑制作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)10%至真方含藥血清可以逆轉(zhuǎn)人大腸癌耐藥細(xì)胞株HCT-8/VCR對(duì)VCR的耐藥性。而流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定結(jié)果顯示人大腸癌敏感細(xì)胞株P(guān)-gp呈現(xiàn)出較低的表達(dá)，耐藥細(xì)胞株HCT-8/VCR則呈現(xiàn)出較高的表達(dá)，而經(jīng)至真方藥物血清作用后HCT-8/VCR細(xì)胞株的P-gp的表達(dá)顯著降低，提示至真方能下調(diào)P-gp的表達(dá)，這可能是其逆轉(zhuǎn)人大腸癌多藥耐藥的作用機(jī)制之一。

腸胃清方。腸胃清方由黃芪、黨參、白術(shù)、八月札、野葡萄藤、紅藤等組成，具有益氣健脾、理氣解毒功效，具有改善癥狀、提高生活質(zhì)量的作用。鮑文磊等［25］采用MTT法測(cè)定腸胃清方的血清藥理學(xué)作用，發(fā)現(xiàn)腸胃清方可以逆轉(zhuǎn)人大腸癌耐藥細(xì)胞株HCT-8/VCR對(duì)VCR及DDP的耐藥性，而流式測(cè)定結(jié)果顯示人大腸癌敏感細(xì)胞株P(guān)-gp呈現(xiàn)出較低的表達(dá)，耐藥細(xì)胞株HCT-8/VCR則呈現(xiàn)出較高的表達(dá)，提示HCT-8/VCR細(xì)胞株的多藥耐藥性可能與其P-gp的高表達(dá)有關(guān)，而經(jīng)腸胃清藥物血清作用后HCT-8/VCR細(xì)胞株的P-gp的表達(dá)顯著降低，這可能是其逆轉(zhuǎn)人大腸癌多藥耐藥的作用機(jī)制之一。許建華等［26］利用人大腸癌耐長(zhǎng)春新堿細(xì)胞株HCT-8/VCR制備裸鼠移植瘤供瘤鼠，利用化療藥物聯(lián)合腸胃清后，其抑制裸鼠體內(nèi)耐藥皮下移植瘤的作用明顯得到增強(qiáng)，其增效作用與增加瘤體內(nèi)的藥物濃度、阻滯細(xì)胞周期、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)。

扶正固本方。扶正固本方是由黃芪、黨參、黃精、黃芩、仙鶴草等組成，有補(bǔ)肺固衛(wèi)、健脾益氣功效。陳育忠等［27］研究證實(shí)，扶正固本方增強(qiáng)化療作用與MDR-1 mRNA的表達(dá)和功能間存在相關(guān)性。與體外試驗(yàn)相比，扶正固本方較易誘導(dǎo)原位移植于裸小鼠的大腸癌降低多藥耐藥，表明內(nèi)微環(huán)境及某些因子對(duì)大腸癌耐藥性的產(chǎn)生具有協(xié)同作用。

3 小 結(jié)

隨著腫瘤內(nèi)科學(xué)及分子生物學(xué)的發(fā)展，大腸癌細(xì)胞多藥耐藥的分子機(jī)制不斷清晰，其逆轉(zhuǎn)的研究也在不斷地深入。中藥對(duì)大腸癌多藥耐藥的逆轉(zhuǎn)有多靶位、多機(jī)制且毒副作用少的優(yōu)點(diǎn)，并且在逆轉(zhuǎn)耐藥的同時(shí)有殺傷腫瘤細(xì)胞、調(diào)節(jié)和提高機(jī)體免疫功能的多重功效。不過，目前中藥逆轉(zhuǎn)大腸癌MDR的研究現(xiàn)主要以體外實(shí)驗(yàn)為主，對(duì)于中藥逆轉(zhuǎn)大腸癌MDR的相關(guān)機(jī)制及是否能應(yīng)用臨床等諸多問題尚待研究。

［1］蔡宏，莫善兢.重視大腸癌的早期診斷［J］.中華全科醫(yī)師雜志，2005，4（6）：332-335.

［2］Chang X B.A molecular understanding of ATP-dependent solute transport by multidrug resistanceassociated protein MRP1［J］.Cancer Metastasis Rev，2007，26（1）：15-37.

［3］Vollmar F，H acker C，Zahedi RP，et al.Ass embl y of nu clear pore compl exes m ediated by maj or vaul t prot ein［J］.J Cell Sci，2009，122（6）：780-786.

［4］秦鳳霞，霍介格，王小寧，等.中藥逆轉(zhuǎn)胃癌多藥耐藥作用的研究進(jìn)展［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2011，26（7）：1571-1573.

［5］張曙光，孫穎，王娟，等.Bcl-2基因與大腸癌［J］.中國(guó)美容醫(yī)學(xué)，2012，21（11）：62-63.

［6］Choi BH，Kim CG，Lim Y，et al.Curcum in down- regulates the multidrug-resistance mdr1b gene by inhibiting the PI3K/ Akt /NFκB pathway［J］.Cancer Let t，2008，25（1）：111-118.

［7］謝磊，黃鋼.腫瘤多藥耐藥（MDR）和抗凋亡之間的關(guān)系［J］.復(fù)旦學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2012，39（4）：428-432.

［8］SHARMA RA，GESCHER AJ，STEWARD WP.Cureumin：the story so far［J］.Eur J Cancer，2005，41（13）：1955-1968.

［9］BAEMK，KIM SH，JEONG JW，et a1.Curcumin inhibits hypoxia-induced angiogenesis via down—regulation of HIF-1α［J］.Oncol Rep，2006，15（6）：1557-1562.

［10］楊春梅，崔曉博，羅強(qiáng)，等.姜黃素逆轉(zhuǎn)耐藥作用與Caspase-3關(guān)系研究［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2012，28（3）：355-357.

［11］楊萍.黃連素臨床應(yīng)用及研究的新進(jìn)展［J］.天津藥學(xué)，2011，23（3）：69-72.

［12］Lin HL，Liu TY，Wu CW，et al.Berberine modulate expression of mdr1 gene product and the responses of digestive track cancer cells to paclitaxel［J］.BrJ Cancer，1999，81（3）：416-422.

［13］伍奕，曾勇，梁松岳.黃連素逆轉(zhuǎn)結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT-8/VCR多藥耐藥及其與P-gp功能變化相關(guān)性的探索性研究［J］.中國(guó)醫(yī)藥指南，2010，8（21）：18-20.

［14］黃詒森，何燕，張均田.五味子三種成分的抗氧化作用［J］.中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，1990，4（4）：275-277.

［15］呂冬霞，崔健，劉月霞，等.五味子乙素聯(lián)合順鉑誘導(dǎo)H22肝癌移植瘤細(xì)胞凋亡過程中caspase-3，8，9表達(dá)的研究［J］.中國(guó)老年學(xué)雜志，2009，29（4）：416-418.

［16］徐秋玲，金秀東，郭冉，等.五味子乙素逆轉(zhuǎn)人結(jié)腸癌細(xì)胞多藥耐藥性［J］.中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng)，2011，17（12）：64-66.

［17］楊琴，呂書勤.苦參素抗消化道腫瘤作用實(shí)驗(yàn)研究與臨床研究進(jìn)展［J］.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2010，29（2）：109-110.

［18］葉友燊，李國(guó)煒，胡萍.苦參素的臨床及藥理研究進(jìn)展［J］.湖南中醫(yī)雜志，2007，23（3）：102-103.

［19］莫雋全，譚衛(wèi)民，莊思敏，等.巖舒對(duì)人大腸癌細(xì)胞株HCT-8/VCR多藥耐藥的逆轉(zhuǎn)作用及P糖蛋白表達(dá)的影響［J］.現(xiàn)代醫(yī)院，2012，12（10）：15-18.

［20］布立民，韓英，陳剛，等.丁酸鈉聯(lián)合穿琥寧對(duì)人大腸癌細(xì)胞HCT-8增生的影響［J］.世界華人消化雜志，2003，11（8）：1193-1196.

［21］韓英，布利民，紀(jì)欣，等.穿琥寧對(duì)大腸癌HCT-8/5-Fu耐藥細(xì)胞株逆轉(zhuǎn)作用的研究［J］.中國(guó)新藥雜志，2004，13（5）：404-407.

［22］潘云華，潘琦，王澤時(shí)，等.復(fù)方三根制劑對(duì)T739小鼠肺癌轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)研究［J］.浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2005，15（2）：76-78.

［23］謝長(zhǎng)生，周維順，馮正權(quán)，等.復(fù)方三根制劑對(duì)MDR細(xì)胞株K562/ADR和K562/VCR逆轉(zhuǎn)作用的研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2003，9（4）：27-30.

［24］陳志霞，孔令春，孫玉舫，等.至真方對(duì)人大腸癌細(xì)胞株HCT-8/VCR多藥耐藥的逆轉(zhuǎn)作用及P-gp表達(dá)的影響［J］.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2010，10（7）：1242-1246.

［25］鮑文磊，孫玨，范忠澤，等.腸胃清藥物血清對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT-8/V多藥耐藥的逆轉(zhuǎn)作用及機(jī)制研究［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2009，36（3）：464-466.

［26］許建華，鄧皖利，孫玨，等.腸胃清對(duì)人大腸癌細(xì)胞HCT-8/V皮下移植瘤長(zhǎng)春新堿耐藥的逆轉(zhuǎn)作用［J］.上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，23（2）：59-63.

［27］陳育忠，方詠，賈海升，等.扶正固本方對(duì)大腸癌耐藥基因MDR-1 mRNA表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究［J］.新中醫(yī)，2005，37（9）：92-93.