云南部分地區(qū)兩棲類寄生吸蟲初步調(diào)查

高培仁，張莉萍

(麗江師范高等專科學(xué)校 生命科學(xué)系，云南 麗江 674199)

吸蟲廣泛寄生于各種脊椎動(dòng)物及一些無脊椎動(dòng)物的體表、體腔及各器官中，到目前為止國內(nèi)已發(fā)現(xiàn)吸蟲102科500余種[1-2].但國內(nèi)對(duì)兩棲類寄生吸蟲的研究并不多，高瑩瑩等[3]對(duì)無指盤臭蛙體內(nèi)寄生雙睪蟲屬多盤吸蟲、寄生于鋸?fù)葮渫芏啾P吸蟲屬單殖吸蟲、滇蛙體內(nèi)寄生單殖吸蟲進(jìn)行了研究，并對(duì)所發(fā)現(xiàn)新種進(jìn)行了描述；高利賓[4]對(duì)海南、廣西、廣東、江西4省無尾兩棲類寄生的復(fù)殖吸蟲進(jìn)行了分類研究.由于云南省兩棲類寄生吸蟲調(diào)查研究工作較少，本研究以云南部分地區(qū)的兩棲類為研究對(duì)象，開展其寄生吸蟲的調(diào)查研究，為我省兩棲類寄生吸蟲研究積累基礎(chǔ)資料.

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

本研究于2008年6月至2012年7月期間，從云南部分地區(qū)共采到2目6科6屬9種兩棲動(dòng)物228只，用于解剖獲取寄生的吸蟲標(biāo)本，正、副模式標(biāo)本均保存在云南師范大學(xué)生命科學(xué)院.

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

吸蟲標(biāo)本獲取:將捕捉到的活蛙體用解剖針搗毀脊髓及腦，然后剪開其腹腔，取下膀胱、各段消化道分別放入盛有0.7%的生理鹽水的培養(yǎng)皿內(nèi)，剪開，用生理鹽水反復(fù)沖洗，解剖鏡下檢查，獲取吸蟲標(biāo)本.

麻醉：將吸蟲標(biāo)本用吸管或毛筆移入培養(yǎng)皿中，用生理鹽水洗凈后，傾去洗液，將蟲體放在自來水中，按蟲體大小、數(shù)量，滴加1～2滴薄荷酒精，封閉1～2 h.麻醉程度以觸及蟲體不收縮為準(zhǔn).

固定：麻醉后的蟲體視其大小，放于載玻片或蓋玻片上，在蟲體兩側(cè)各放1小條吸水紙，加載玻片或蓋玻片于其上，微壓，用白線困數(shù)繞，附上標(biāo)簽放于4%～5%的福爾馬林溶液中固定數(shù)小時(shí)，固定后的標(biāo)本轉(zhuǎn)浸入70%酒精中保存.

制片：

1) 染色.將保存于70%酒精中的吸蟲標(biāo)本，放在指管瓶中，吸去酒精，加硼砂洋紅染液染色，視蟲體大小染色時(shí)間為12～24 h.

2) 褪色.染色蟲體染色后用70%酸酒精(100 mL 70%酒精加鹽酸1 mL)褪色,褪色至適度，立即用70%酒精沖洗2～3次.褪色不宜過淺.

3) 脫水.將已用70%酒精沖洗過的吸蟲標(biāo)本，分別用80%、90%、95%、100%①、100%②酒精浸泡1～2 h(蟲體小則30 min～1 h即可).

4) 透明.當(dāng)吸蟲材料脫水至100%②酒精階段后，用吸管吸去無水酒精，將蟲體置入丁香油中透明6～12 h.

5) 封片.先滴1小滴中性樹膠或加拿大樹膠于載玻片中央，迅速用小毛筆或小鋼絲圈將蟲體從丁香油中取出，置于樹膠滴上，慢慢沿樹膠的一側(cè)蓋上蓋玻片(避免產(chǎn)生氣泡)，貼上標(biāo)簽，制成封片標(biāo)本用于鏡檢.

1.3 測(cè)量與繪圖

將所制封片拿到顯微鏡下觀察、測(cè)量，并在顯微投影儀上繪圖,鑒定.

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 云南部分地區(qū)兩棲類宿主及其寄生吸蟲情況

在采集到的兩棲動(dòng)物中192只蛙體內(nèi)檢獲吸蟲13種，其中單殖目吸蟲1科1屬3種，復(fù)殖目吸蟲5科6屬10種.因缺少相關(guān)資料，所查獲的其中5種吸蟲暫未定名，有待進(jìn)一步鑒定并定名.宿主、采集地、寄生吸蟲及寄生部位如表1所示.

表1 云南部分地區(qū)兩棲類宿主及其寄生吸蟲

續(xù)表

宿主采集地檢測(cè)數(shù)量寄生吸蟲寄生部位云南雙團(tuán)棘胸蛙Paa Yunnanensis祿豐一平浪刁翎山、一平浪樟木箐通海秀山22擬發(fā)狀屬吸蟲未定名種Gorgoderidae sp.innon.膀胱無指盤臭蛙R.grahami Boulenger祿豐一平浪12重盤科重盤屬吸蟲未定種ⅠDiplodiscus spⅠ innon.直腸、小腸日本林蛙昭覺亞種R.japonica chaochiaoensis Liu昆明;祿豐一平浪87重盤科重盤屬吸蟲未定種ⅡDiplodiscus sp Ⅱ innon.小腸華西大蟾蜍Bufo b.cmdrensi昆明6——寬頭大角蟾Megophrys hasselti昆明8——華西雨蛙Hyla a.annectans祿豐9——多疣狹口蛙Kaloula Verrrucosa武定6——藍(lán)尾蠑螈Cynops cyanurus武定獅山7——

2.2 滇蛙、云南雙團(tuán)棘胸蛙、無指盤臭蛙、日本林蛙昭覺亞種吸蟲的感染率、豐度和感染度

從不同地區(qū)采集的4種蛙類吸蟲的感染率、豐度和感染度見表2.

表2 4種蛙類吸蟲的感染率、豐度和感染度

2.3 未定名種形態(tài)特征描述

1) 擬發(fā)狀屬吸蟲未定名種(Gorgoderidaesp.innon.).蟲體披針形，腹吸盤處最寬，后端稍狹，蟲體較大，體長(zhǎng)2.45～4.45 mm,體寬為前睪附近或體前端腹吸盤附近，為0.428 4～0.863 1 mm(見圖1).體寬與體長(zhǎng)之比為1∶(5.155 8～6.000).口吸盤位于身體前端，近圓形，大小(0.233 1～0.441 0) mm×(0.252 0～0.396 9) mm，腹吸盤位于近體前部1/3處的腹面，圓盤形，大小(0.476 5～1.052 0)mm×(0.554 4～0.888 3) mm，口吸盤大小與腹吸盤大小之比為1∶(4.68～5.15).食道長(zhǎng)(0.063 0～0.100 8) mm，腸管距末端距離(0.239 4～0.504 0) mm.睪丸2個(gè)，位于至蟲體前端約2/3處，前后排列，近圓形或橢圓形，前睪大小(0.201 6～0.478 8) mm×(0.252 0～0.302 4) mm，后睪大小(0.207 9～0.386 9) mm×(0.211 2～0.327 6) mm.前睪距卵巢0.025 2～0.075 6 mm；后睪距末端(0.522 9～1.134 0) mm.口吸盤距腹吸盤(0.189 0～0.308 9) mm.

卵巢近卵圓形，位于腹吸盤下部附近，靠近體右側(cè)或左側(cè)，大小為(0.239 4～0.289 8) mm×(0.131 2～0.321 3) mm.卵黃腺集中，2個(gè)，左右排列于卵巢上部附近，橢圓形或卵圓形，右側(cè)卵黃腺大小(0.126 0～0.201 6 mm×(0.107 1～0.126 0) mm，左側(cè)卵黃腺大小(0.157 5～0.195 3) mm×(0.100 6～0.176 7) mm.子宮盤曲于腹吸盤之后，直至末端，充滿整個(gè)腹腔，內(nèi)充滿卵，卵橢圓形，大小(0.022 5～0.041 82) mm×(0.015 0～0.027 5) mm.生殖孔開口于食道與腸管分叉以上，口吸盤下緣附近，受精囊囊狀位于腹吸盤上部附近、腸管分支以下，大小(0.075 6～0.163 8) mm×(0.088 2～0.252) mm(見圖2).

從以上描述可以看出，該吸蟲具2個(gè)前后排列的睪丸，睪丸不分葉，呈橢圓或近圓形；卵黃腺2個(gè)，不分葉，卵圓形；食管短，無咽.以上與擬發(fā)狀屬(Gorgoderina looss 1902)特征相符，為擬發(fā)狀屬吸蟲.

復(fù)殖目發(fā)狀科擬發(fā)狀屬吸蟲主要寄生于無尾和有尾類兩棲動(dòng)物膀胱內(nèi)，目前在全球已發(fā)現(xiàn)約52種，近一半的種類主要分布于北美和南美地區(qū)[5-6].擬發(fā)狀屬吸蟲未定名種與本屬Gorgoderinaattenuata(Stafford 1902) Stafford 1905、G. Vitelliloba(Olsson 1876) looss 1902、G. Simplex looss 1902和G. megacetabularis n. sp.(2005)等非常相似，但尚有諸多不同：①擬發(fā)狀屬吸蟲未定名種睪丸規(guī)則，呈橢圓形或近圓形，而其余本屬吸蟲的睪丸不規(guī)則；擬發(fā)狀屬吸蟲未定名種卵黃腺無分枝，規(guī)則，近卵圓形，而其余種類卵黃腺不規(guī)則，有分枝；②口腹吸盤比值不同，擬發(fā)狀屬吸蟲未定名種腹吸盤較發(fā)達(dá)，其口腹吸盤的比值高達(dá)1∶4.68～5.15，其它同屬種類比值為1∶0.6～3.7；③生殖孔開口位置不同.擬發(fā)狀屬吸蟲未定名種生殖孔開口于食道與腸管分叉以上，口吸盤下緣附近，與同屬種開口于食管與腸管分枝與下合附近不同.由于以上的諸多不同，故將本吸蟲確定為擬發(fā)狀吸蟲屬一新種.

2) 重盤科重盤屬吸蟲未定種Ⅰ.蟲體圓柱形，體長(zhǎng)(1.990 8～2.293 2) mm，體寬(0.957 6～1.121 4) mm(見圖3).體寬最大處位于赤道附近， 體寬與體長(zhǎng)之比為1∶(2.045～2.1) mm.口吸盤位于前端，近圓盤狀，大小(0.315～0.435) mm×(0.189～0.454) mm.口吸盤縱長(zhǎng)與體長(zhǎng)之比為1∶5.0.腹吸盤位于身體末端，圓盤狀，大小(0.49～0.63) mm×(0.256～0.866) mm.口吸盤與腹吸盤之比為1∶2.67.腹吸盤大小與體長(zhǎng)之比為1∶4.2.食道長(zhǎng)0.315 mm，食道球大，大小(0.226 8～0.403 2) mm×(0.134 9～0.239) mm.兩腸粗而彎曲，經(jīng)4～6個(gè)彎曲至赤道板下2/3.睪丸位于身體中部，一個(gè)，圓形，大小0.321 3 mm×0.315 mm.卵黃腺40～42個(gè)，大小(0.044～0.126) mm×(0.053 5～0.151 2) mm，分布在赤道上下方腸管兩側(cè)，從食管至腹吸盤間.

3) 重盤科重盤屬吸蟲未定種Ⅱ.蟲體鐘乳形，前部稍窄，最寬部位位于赤道以下(見圖4).蟲體長(zhǎng)1.764 mm，寬1.146 6 mm，體寬與體長(zhǎng)之比為1∶1.54.口吸盤位于身體前端，大小0.151 2 mm ×0.403 2 mm，與體長(zhǎng)之比為1∶4.86.腹吸盤位于體末，直徑0.825 3 mm，與體長(zhǎng)之比為1∶2.1.腹吸盤內(nèi)腔直徑0.608 mm.食管長(zhǎng)0.189 mm，食管球膨大，大小0.252 mm×0.375 mm.腸支粗而長(zhǎng)，經(jīng)3～6個(gè)彎曲而達(dá)腹吸盤邊緣.睪丸位于身體中部，近圓形，大小0.151 2 mm×0.157 5 mm.卵黃腺發(fā)達(dá)，38～40個(gè)，大小(0.056～0.119 7) mm×(0.075 6～0.126) mm，分布于腸管兩側(cè)，從食管至腹吸盤.

3 討論

調(diào)查發(fā)現(xiàn)，采自祿豐一平浪刁翎山、祿豐一平浪樟木箐等林區(qū)及通海秀山的山谷溪流中的云南雙團(tuán)棘胸蛙，其吸蟲寄生率明顯高于其它3種蛙，均高達(dá)66.67%及以上，感染度1～11.這與其生活環(huán)境密切相關(guān)，由于其生活環(huán)境受人為因素影響較少，其生活環(huán)境接近自然狀態(tài)，寄生吸蟲發(fā)育階段的幼蟲更容易找到中間宿主而完成發(fā)育，最終感染終宿主.

調(diào)查結(jié)果顯示在所查獲吸蟲的4種蛙中寄生率均有一個(gè)趨勢(shì)，即在接近城鎮(zhèn)的環(huán)境中生活的蛙，其體內(nèi)寄生蟲寄生率遠(yuǎn)低于同類生活在山谷溪水中的蛙，生活于稻田內(nèi)的蛙體內(nèi)吸蟲的寄生率亦很低.這與其生活環(huán)境受人為因素、農(nóng)藥使用等因素影響，中間宿主被大量消滅，從而使吸蟲難以完成其發(fā)育，致使感染率降低.滇蛙的上述趨勢(shì)較為明顯，祿豐一平浪樟木箐采獲的蛙類，吸蟲感染率最高(達(dá)43.48%)，感染度1～48；武定采獲的滇蛙均采自縣城附近及武定獅山，寄生率20%，感染度1～44，遠(yuǎn)低于生活于祿豐一平浪樟木箐林區(qū)捕獲的同類蛙的感染率.此外，滇蛙體內(nèi)寄生的吸蟲種類較多，寄生情況亦較復(fù)雜，常見同一蛙體內(nèi)寄生多種吸蟲的現(xiàn)象，寄生部位為消化道及膀胱.

調(diào)查結(jié)果表明，云南雙團(tuán)棘胸蛙、無指盤臭蛙和日本林蛙昭覺亞種3種蛙類，其寄生吸蟲單一，分別只寄生復(fù)殖目(Digenea)發(fā)狀科(Gorgoderidae looss 1901)擬發(fā)狀屬吸蟲、重盤科重盤屬吸蟲各一種，發(fā)狀科擬發(fā)狀屬吸蟲僅寄生于云南雙團(tuán)棘胸蛙的膀胱內(nèi)，重盤科重盤屬吸蟲則寄生于無指盤臭蛙和日本林蛙昭覺亞種的直腸和小腸內(nèi).而滇蛙體內(nèi)寄生著單殖目(Monogenea)多盤科( Polystomatidae Gamble 1896)多盤吸蟲屬(Polystoma Zeder 1800)吸蟲3種及復(fù)殖目枝腺科(Lecithodendiidae Odlmer 1910)側(cè)殖屬(Pleurogenes Looss 1896)、擬側(cè)殖屬 (Pleurogenoides (Tra Vassos 1928)，孔腸科(Opecaelidue Ozaki 1925)斜孔吸蟲屬(Plagioporus ) 、斜睪科(Plagiorchiidae ward 1907)刻體屬(Glythelmins Stafford 1905)及重盤科(Diplodiscidae skrjabin 1949)重盤屬(Diplodiscus Diesing 1936)吸蟲10種，寄生部位為直腸、小腸和膀胱，寄生部位不同，寄生吸蟲形態(tài)差異較大.

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