廣東省各年齡段婦女人乳頭瘤病毒感染率及型別分布情況

陳亮 黃健初 姜碧 姚倩瑜 吳劍英

廣東省各年齡段婦女人乳頭瘤病毒感染率及型別分布情況

陳亮 黃健初 姜碧 姚倩瑜 吳劍英

目的 檢測分析廣東省各年齡段婦女人乳頭瘤病毒感染率及型別的分布情況，為個體化治療以及疫苗的開發(fā)及注射指導方面提供流行病學資料。方法 利用ILLumina公司新一代HPV DNA測序技術對廣東省十個城市18～74歲年齡段婦女共78410人進行HPV的檢測，并對HPV陽性者進行HPV的型別測定，統(tǒng)計分析各年齡組HPV的感染率及型別分布情況。結果 受檢者共78410人，其中陽性者5693人，陽性率7.26%，各年齡段感染率依次為8.18%、6.49%、7.44%、7.91%、10.73%、8.16%，各年齡組除總體的 3個主要感染型別 16、52、58型外，還出現(xiàn) 6、66、18和 31型。結論 各年齡段HPV感染率無明顯統(tǒng)計學差異，但有年齡傾向性；不同年齡段的主要感染型別具有一定的差異性。

人乳頭瘤病毒；基因型別；感染率；宮頸癌

宮頸癌是嚴重危害婦女健康的惡性腫瘤之一，居世界女性癌癥死亡率的第2位，僅次于乳腺癌。宮頸癌是一種感染性疾病，研究表明，人乳頭瘤病毒HPV持續(xù)感染是其主要病因[1-2]。人乳頭瘤病毒（HPV）是雙鏈DNA病毒，其亞型多達100多種，其中低危型有 6、11、42、43、44 等；高危型有 16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68 等型別。近年來發(fā)現(xiàn)年齡與HPV感染及宮頸癌的發(fā)生有著密切的聯(lián)系[3]，由于基因的多態(tài)性原因，本研究主要是通過大人群的篩查，了解廣東省各年齡段婦女的HPV感染型別的分布情況，為宮頸疾病治療效果的檢測以及HPV特異性基因疫苗的研發(fā)與推廣提供流行病學資料。

1 資料與方法

1.1 一般資料 分別在廣東省東莞、廣州，珠海、清遠、汕頭、深圳、韶關、湛江、佛山、惠州十個城市隨機抽取18～74歲年齡段婦女共78410人進行宮頸脫落細胞的采集。

1.2 方法

1.2.1 宮頸脫落細胞的采集 （1）放置窺陰器，觀察宮頸口，如有血液或者黏液，用無菌棉簽拭凈；（2）將專用的宮頸刷置于宮頸口，插入子宮頸內(nèi)，直到只有刷頭最后面的刷毛暴露在子宮頸外口為止；（3）抵住刷把，慢慢將宮頸刷以同一方向轉動3～5圈；（4）打開細胞保存液管，將細胞刷浸入保存液中，沿刷柄折痕處折斷，擰緊瓶蓋。

1.2.2 HPV DNA檢測及分型測定 采用ILLumina公司的新一代測序技術(NGS,Next Generation Sequencing),即高通量測序技術是一種基于邊合成邊測序技術的新型測序方法，通過利用單分子陣列實現(xiàn)在小型芯片（Flow Cell）上進行橋式聚合酶鏈反應（PCR）反應。主要流程：（1）待檢測DNA文庫的構建，通過PCR擴增，芯片捕獲，DNA打斷等方式獲取所需檢測DNA片段；（2）芯片制備和上機測序；（3）邊合成邊測序，向反應體系中同時添加DNA聚合酶，接頭引物和帶有堿基特異熒光標記的4種dNTP。用激光激發(fā)熒光信號，用光學設備完成熒光信號的記錄，并通過計算機分析轉化為測序結果；（4）信號記錄完后，加入試劑，淬滅熒光信號，隨后加入第2個核苷酸，如此重復，直到每條模版序列都完全被聚合為雙鏈。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS10.0軟件進行數(shù)據(jù)處理。計數(shù)資料組間比較行χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義.

2 結果

2.1 各年齡段與HPV感染關系 參檢的總人數(shù)為78361例，最小年齡18歲，最大年齡74歲，分6個年齡組，18～24歲共2517人，25～34歲共 27750人，35～44歲共 35681人，45～54歲共11264人，55～64歲共1100人，65～74歲共98人，總共6個年齡組，其中第1年齡組HPV檢出陽性例數(shù)206人；陽性率為8.18%，第2年齡組檢出陽性例數(shù)1801人；陽性率為6.49%，第3年齡組檢出陽性例數(shù)2655人；陽性率為7.44%，第4年齡組檢出陽性例數(shù)891人；陽性率為7.91%，第5年齡組檢出陽性例數(shù)118人；陽性率最高為10.73%，第6年齡組檢出陽性例數(shù)8人；陽性率8.16%。經(jīng)統(tǒng)計學χ2檢驗，各年齡段HPV陽性率差異無統(tǒng)計學意義。

2.2 各年齡組中HPV型別的分布情況 將每個分組前4個主要感染型別進行匯總后得如下結果：18～24年齡組是16、52、58、6型；25～34 歲年齡組是 16、52、58、18 型；35～44歲年齡組是16、52、58、18 型；45～54 歲年齡組是 16、52、58、18 型；55～64 歲年齡組是 16、52、58、18 型；65～74 歲年齡組是 31、66、16、52 型。

3 討論

3.1 各年齡組感染情況 本研究中，受檢者最小年齡18歲，最大74歲，感染率最低在25～34歲年齡組6.49%，最高在55～64歲年齡組，為10.73%，HPV人群感染率1.4%～25.6%[4]，本研究所得感染率與歐美一致，其中35～44歲年齡組受檢人數(shù)最多共35681人，感染率7.44%，感染率最高的55～64歲年齡組，人數(shù)共1100人，感染率10.73%，分析其高感染率的原因可能有兩點：（1）55～64歲年齡段受檢人數(shù)只有1100人，樣本量過少，不具有代表性；（2）另一種可能是55歲左右年紀的女性多處于絕經(jīng)期，由于激素分泌和宮頸鱗狀細胞層薄等原因，從而導致該年齡段的HPV感染率偏高。本研究結果顯示，各年齡組HPV感染率差異無統(tǒng)計學意義，但有年齡的傾向性，感染率隨年齡增長逐漸增高，這也說明人體隨著自身年齡的增長，自身清除HPV的能力逐漸降低，而且隨著年齡增大，宮頸癌的發(fā)病率明顯增高，所以對于30歲以上婦女，發(fā)現(xiàn)HPV的感染應該更加引起重視及需要進一步處理[5-9]。

3.2 各年齡組HPV感染型別的分布情況 通過本次調(diào)查，除65～74歲年齡組外，各年齡段HPV感染型別居首位是16型，這與國外報道的歐美HPV16型是主要感染型別[10-11]是一致的，除65～74歲年齡組外，各年齡組前3位主要感染型是一致的，均為16、52、58型，但在第4位HPV感染型別中，25～34歲、35～44歲、45～54歲以及55～64歲4個年齡段為18型，而18～24歲是6型，65～74歲是58型。經(jīng)過分析，隨著年齡增大，HPV18型感染概率增高，相關資料顯示隨著年紀增長，宮頸癌的發(fā)病率也增高，其高發(fā)年齡段在45～54歲，基于這一點，我們以18～24歲年齡段與45～54歲年齡段作比較發(fā)現(xiàn)，在兩個年齡組里，前3種感染型別是一致的，在第4種HPV型別中18～25歲是6型，45～54歲是18型。相關文獻報道[8]，這兩個年齡組的宮頸癌發(fā)病率是有差異的，所以我們設想可能是18型導致兩個年齡段宮頸癌發(fā)病率出現(xiàn)差異的主要原因，這也進一步說明18型是導致宮頸癌發(fā)生的一個重要型別[12]。同時，本研究對25～34歲、35～44歲、45～54歲以及55～64歲年齡組做比較，其各年齡組前4位感染型別是一致的，但各組的宮頸癌的發(fā)病率是不同的[8]，分析除隨年齡增大，自身清除病毒能力下降這一因素外，可能與HPV多重感染有關。65～74歲年齡組前四位感染型別分別是31、66、16、52型，與其余各年齡組差別較大，分析可能原因有：（1）樣本量過少，結果不具有代表意義；（2）該年齡組處于絕經(jīng)期，激素水平與自身代謝水平的改變，從而導致感染型別的差異。對于該年齡組的這種感染型別的差異值得引起重視及研究。綜合以上分析，可以說明，HPV16、HPV18型是進一步分析研究HPV感染與宮頸癌發(fā)生機制的突破口，同時也需對HPV多重感染與宮頸癌的發(fā)生之間的相關性做進一步研究。

3.3 HPV感染型別與疫苗的研發(fā) 宮頸癌是一種感染性疾病，只有從根本上杜絕HPV的感染，才能大大降低宮頸癌的發(fā)病率。所以最理想的防治模式是以一級預防為主，二級預防為輔。美國FDA與2006年批準Cardasil HPV預防性疫苗上市，標志著宮頸癌的防治已開始進入一級預防為主，二級預防為輔的模式。但該疫苗有地區(qū)的局限性，疫苗只是針對該地區(qū)的幾種常見型別，本次研究中，除65～74歲年齡段外，各年齡組HPV感染型別前3位的均為16、52、58型。國內(nèi)吳玉萍等[11]報道山西省宮頸癌患者主要感染HPV型別前4種分別為16、58、33、31型。歐美在婦女人群中主要常見感染型別分別是16、18、58型[4]，但在非洲西部HPV45常見，以上數(shù)據(jù)都進一步說明常見HPV感染型別是具有地區(qū)差異性的。因此，大型人群的流行病學資料對于HPV特異性疫苗的研發(fā)與推廣是必須的。

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Objective To detect human papillomavirus infection distribution and types of Guangdong province women of all ages,to provide epidemiological data for individual treatment and the development of vaccines and injection guidance. Methods ILLumina's next-generation HPV DNA sequencing technology was used,city, ten women aged 18-74 were 78 410 people in Guangdong province were test for HPV and HPV-positive for HPV type were determined, HPV infection and type distribution of all ages group were statistical analyzed. Results Subjects were 78,410 people, of which 5693 positive, the positive rate was 7.26%, prevalence of all ages were 8.18%, 6.49%, 7.44%, 7.91%, 10.73%, 8.16%, in each age group In addition to the three general types 16,52,58 type primary infection, but also the emergence of 6,66,18 and 31 type. Conclusion HPV infection of all ages is no signifi cant difference, but there is the age tendentious; different ages of primary infection type has some differences.

Human papillomavirus; Genotype; Infection; Cervical cancer

10.3969/j.issn.1009-4393.2014.3.016

廣東 523000 廣東省東莞市計劃生育服務中心 （陳亮 黃健初 姜碧 姚倩瑜 吳劍英）