Sysmex XE-5000全自動血細(xì)胞分析儀檢測體液標(biāo)本性能評價(jià)研究

馬 科，張婭娟，馮 博，左路廣，詹明華

·質(zhì)控與安全·

Sysmex XE-5000全自動血細(xì)胞分析儀檢測體液標(biāo)本性能評價(jià)研究

馬 科，張婭娟，馮 博，左路廣，詹明華

目的：評測Sysmex XE-5000全自動血細(xì)胞分析儀日常檢測體液標(biāo)本的能力。方法：在體液模式下檢測腦脊液、胸水、腹水標(biāo)本，對Sysmex XE-5000本底計(jì)數(shù)、精密度、攜帶污染率、線性等參數(shù)以及與手工計(jì)數(shù)法比對進(jìn)行評價(jià)研究。結(jié)果：Sysmex XE-5000檢測體液標(biāo)本的本底計(jì)數(shù)符合廠商要求；精密度高（CV%＜20%）；攜帶污染率低于0．5%；線性良好（0．95＜a＜1．05，相關(guān)系數(shù)r＞0．99），與手工計(jì)數(shù)法有著良好的相關(guān)性（r＞0．90）。結(jié)論：Sysmex XE-5000全自動血細(xì)胞分析儀檢測體液標(biāo)本性能良好，適用于日常臨床體液標(biāo)本的檢測。

全自動血細(xì)胞分析儀；體液檢測；性能評價(jià)

0 引言

臨床常規(guī)檢測的體液主要有腦脊液、胸水、腹水、關(guān)節(jié)穿刺液等，對這些體液標(biāo)本成分進(jìn)行分析，會在患者健康狀況評估、疾病診斷、治療及預(yù)后、發(fā)病機(jī)制的研究等方面發(fā)揮重要的作用。如分類計(jì)數(shù)穿刺液中的白血胞可以幫助區(qū)分炎性或非炎性關(guān)節(jié)腫脹；計(jì)數(shù)腦脊液中的白細(xì)胞、紅細(xì)胞可輔助診斷腦膜炎、腦出血、腦腫瘤；檢測胸腹水鑒別其為滲出液還是漏出液可指導(dǎo)臨床用藥，輔助診斷肝硬化、肝癌等疾病[1-3]。綜上，建立一套快速、準(zhǔn)確檢測體液標(biāo)本的系統(tǒng)顯得尤為重要。傳統(tǒng)計(jì)數(shù)體液標(biāo)本的金標(biāo)準(zhǔn)方法為在顯微鏡下手工計(jì)數(shù)，但此方法存在一些缺陷，主要有：（1）標(biāo)本所含細(xì)胞數(shù)量過多時(shí)需稀釋后計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性降低，容易產(chǎn)生較大偏差。（2）檢測費(fèi)時(shí)，從標(biāo)本送檢到發(fā)出報(bào)告所需時(shí)間過長。（3）對操作人員的技術(shù)水平要求高，經(jīng)驗(yàn)豐富與不豐富的檢驗(yàn)人員所發(fā)報(bào)告差異較大。（4）不能24 h待檢，對于急診標(biāo)本隨時(shí)送檢的要求不能滿足[4]。隨著流式細(xì)胞術(shù)的廣泛應(yīng)用，臨床上開始嘗試使用一些尿液或血液分析儀檢測體液標(biāo)本，使用的儀器主要有Advia 120、Advia 2120、Syemex uf-1000i、Syemex XE-2100、Syemex XE-5000、Mindray BC-6800、Abbott Cell-Dyn Sapphire等[5-6]，這些儀器可以彌補(bǔ)手工計(jì)數(shù)法檢測體液的缺陷，具有檢測準(zhǔn)確、重復(fù)性好、檢測速度快、費(fèi)用低等優(yōu)勢。本研究使用Syemex XE-5000血細(xì)胞分析儀檢測體液標(biāo)本，評價(jià)其檢測腦脊液、胸水、腹水的能力，同時(shí)與手工計(jì)數(shù)法做比對，探討Syemex XE-5000日常檢測體液標(biāo)本的可行性。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院2013年8～10月住院及門診患者體液標(biāo)本，所有患者均知情同意，符合本院醫(yī)學(xué)倫理委員會標(biāo)準(zhǔn)。標(biāo)本容器為EDTA-K2抗凝管。

1.2 儀器與試劑

Sysmex XE-5000血細(xì)胞分析儀，原裝配套試劑和校準(zhǔn)品，e-CHECK（XE）高值、中值質(zhì)控品；OLYMPUS CX-41雙目顯微鏡；標(biāo)準(zhǔn)牛鮑計(jì)數(shù)板、BASO染液。

1.3 檢測方法

1.3.1 Syemex XE-5000檢測

儀器按要求進(jìn)行日常保養(yǎng)及維護(hù)，檢測前對儀器進(jìn)行校準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)期間每天采用e-CHECK高、中值質(zhì)控物對儀器進(jìn)行監(jiān)測，確保儀器處于正常工作狀態(tài)，且性能符合規(guī)定要求。所有標(biāo)本檢測前輕輕顛倒混勻6～8次，采用開蓋方式測量。依據(jù)Sysmex XE-5000操作指南，應(yīng)用體液模式進(jìn)行本底計(jì)數(shù)、精密度、攜帶污染率、線性分析、比對實(shí)驗(yàn)。儀器采用DIFF通道使用半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合核酸熒光染色技術(shù)的原理計(jì)數(shù)白細(xì)胞總數(shù)，并將白細(xì)胞分為單核細(xì)胞（MN）和多核細(xì)胞（PMN）2類；紅細(xì)胞計(jì)數(shù)采用鞘液電阻抗法[7-8]。

1.3.2 手工計(jì)數(shù)檢測

采用標(biāo)準(zhǔn)牛鮑計(jì)數(shù)板，按照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第三版）》中的體液檢查方法進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。由2名具有多年臨床檢驗(yàn)工作經(jīng)驗(yàn)的檢驗(yàn)人員分別計(jì)數(shù)細(xì)胞，取其平均值作為最終計(jì)數(shù)結(jié)果。將體液離心推片，經(jīng)BASO染液染色，進(jìn)行白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。

Syemex XE-5000檢測和手工計(jì)數(shù)檢測均在標(biāo)本留取后1 h內(nèi)完成。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用IBM SPSS Statistics 19和Microsoft Excel 2007進(jìn)行記錄、統(tǒng)計(jì)分析。

2 實(shí)驗(yàn)過程

2.1 本底計(jì)數(shù)

用Sysmex XE-5000稀釋液作為樣本，在體液模式下連續(xù)測定3次，取3次測試結(jié)果中各項(xiàng)目最大值作為檢測結(jié)果。儀器生產(chǎn)廠商制定的標(biāo)準(zhǔn)為：白細(xì)胞≤1×106/L，紅細(xì)胞≤3×109/L。

2.2 精密度檢測

取胸水、腹水中白細(xì)胞、紅細(xì)胞數(shù)量高、中、低值不同的標(biāo)本各1份，腦脊液低值標(biāo)本1份。高值標(biāo)本白細(xì)胞＞10 000×106/L，紅細(xì)胞＞100×109/L；中值標(biāo)本白細(xì)胞＞1 000×106/L，紅細(xì)胞＞20×109/L；低值標(biāo)本白細(xì)胞＜100×106/L，紅細(xì)胞＜20×109/L。由于受腦脊液標(biāo)本限制，滿足高、中值要求的標(biāo)本留取量不足2 mL，實(shí)驗(yàn)中腦脊液為低值標(biāo)本。將標(biāo)本輕輕顛倒混勻6～8次，在體液模式下連續(xù)測定11次，取后10次測定結(jié)果，記錄數(shù)據(jù)計(jì)算白細(xì)胞、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（高、中、低值）的均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)（CV%）。

2.3 攜帶污染率

取白細(xì)胞、紅細(xì)胞高值標(biāo)本（實(shí)驗(yàn)選用胸水）和白細(xì)胞、紅細(xì)胞低值標(biāo)本（實(shí)驗(yàn)選用腦脊液）各1份，混勻標(biāo)本，在體液模式下連續(xù)測定3次胸水標(biāo)本，依次記錄為H1、H2、H3，再連續(xù)測定3次腦脊液標(biāo)本，依次記錄為L1、L2、L3，計(jì)算白細(xì)胞、紅細(xì)胞攜帶污染率。攜帶污染率計(jì)算公式為：攜帶污染率（%）=|L1－L3|/（H3－L3）×100%。

2.4 線性分析

取新鮮高值標(biāo)本1份，用Sysmex XE-5000稀釋液按10%、20%、40%、60%、80%的比例稀釋。將標(biāo)本混勻，體液模式下對高值標(biāo)本及每個(gè)稀釋度標(biāo)本連續(xù)測定3次，分別記錄各濃度白細(xì)胞、紅細(xì)胞數(shù)平均值。將平均值作為實(shí)測值，與稀釋濃度理論值作比較，進(jìn)行線性回歸分析。

2.5 Sysmex XE-5000檢測與手工計(jì)數(shù)檢測比對

臨床抽取33份體液標(biāo)本，其中胸水15份，腹水8份，腦脊液10份。每份標(biāo)本取2．0 mL，裝入EDTAK2抗凝管，輕輕顛倒混勻6～8次，分成2份分別用Sysmex XE-5000和手工計(jì)數(shù)檢測，檢測在1 h內(nèi)完成。Sysmex XE-5000檢測記錄白細(xì)胞、紅細(xì)胞細(xì)胞總數(shù)和白細(xì)胞分類MN、PMN數(shù)值。手工計(jì)數(shù)法檢測由2名具有多年臨床檢驗(yàn)工作經(jīng)驗(yàn)的檢驗(yàn)人員分別計(jì)數(shù)紅細(xì)胞、白細(xì)胞總數(shù)，取其平均值作為最終計(jì)數(shù)結(jié)果。將標(biāo)本離心推片，經(jīng)BASO染液染色后進(jìn)行白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。將Sysmex XE-5000和手工計(jì)數(shù)測得的白細(xì)胞、紅細(xì)胞、MN和PMN數(shù)值進(jìn)行線性回歸分析及配對t檢驗(yàn)分析。

3 結(jié)果

3.1 本底計(jì)數(shù)

儀器本底計(jì)數(shù)結(jié)果：白細(xì)胞=0×106/L、紅細(xì)胞= 0×109/L，由結(jié)果可知Sysmex XE-5000血細(xì)胞分析儀本底計(jì)數(shù)符合Sysmex廠商制定的標(biāo)準(zhǔn)（白細(xì)胞≤1×106/L、紅細(xì)胞≤3×109/L）。

3.2 精密度檢測

結(jié)果顯示，3種體液標(biāo)本高、中、低值計(jì)算的CV%值均低于20%標(biāo)準(zhǔn)，見表1。

表1 白細(xì)胞、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)精密度檢測結(jié)果

3.3 攜帶污染率

攜帶污染率檢測結(jié)果見表2。結(jié)果顯示，白細(xì)胞攜帶污染率為0．008%，紅細(xì)胞攜帶污染率為0%，小于儀器設(shè)定的要求（攜帶污染率＜0．5%）。由此可知儀器攜帶污染率符合標(biāo)準(zhǔn)。

表2 攜帶污染率檢測結(jié)果

3.4 線性分析

Sysmex XE-5000血細(xì)胞分析儀線性分析試驗(yàn)檢測結(jié)果顯示線性良好，如圖1、2所示。

圖1WBC線性分析

圖2 RBC線性分析

3.5 Sysmex XE-5000與手工計(jì)數(shù)檢測比對

運(yùn)用線性回歸、配對t檢驗(yàn)方法從白細(xì)胞、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，MN、PMN分類4個(gè)方面對Sysmex XE-5000與手工計(jì)數(shù)檢測做比對分析，Sysmex XE-5000與手工計(jì)數(shù)檢測具有良好的相關(guān)性（r＞0．90），2種方法檢測標(biāo)本無顯著性差異（P＞0．05），如圖3所示、見表3。

4 討論

圖3 Sysmex XE-5000與手工計(jì)數(shù)檢測WBC、MN、PMN、RBC比對結(jié)果

表3 Sysmex XE-5000與手工計(jì)數(shù)檢測體液均值比較

對患者胸水、腹水、腦脊液等體液標(biāo)本進(jìn)行準(zhǔn)確計(jì)數(shù)分類，在疾病診斷、治療及預(yù)后評估方面具有重要意義。目前，國內(nèi)多數(shù)臨床實(shí)驗(yàn)室依然采用手工顯微鏡計(jì)數(shù)體液細(xì)胞，但由于計(jì)數(shù)精密度不高、易產(chǎn)生較大誤差，且操作繁瑣、費(fèi)時(shí)費(fèi)力，不能滿足臨床要求。因此，用自動化儀器替代傳統(tǒng)的手工顯微鏡計(jì)數(shù)法符合現(xiàn)代臨床檢驗(yàn)工作的需要。本研究采用Sysmex XE-5000血細(xì)胞分析儀對體液標(biāo)本進(jìn)行檢測，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)Sysmex XE-5000對體液標(biāo)本檢測的本底計(jì)數(shù)、精密度、攜帶污染率和線性分析均在允許范圍內(nèi)，同時(shí)與手工計(jì)數(shù)法有著良好的相關(guān)性。相對于其他血細(xì)胞、尿液分析儀，Sysmex XE-5000計(jì)數(shù)體液細(xì)胞具有以下優(yōu)勢：（1）除了血液模式外，專門具有體液模式。（2）通過DIFF通道計(jì)數(shù)白細(xì)胞，結(jié)果更加準(zhǔn)確。（3）白細(xì)胞計(jì)數(shù)不包含間皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞。間皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞在胸腹水中含量較高，血細(xì)胞分析儀容易錯(cuò)誤計(jì)數(shù)成為白細(xì)胞。Sysmex XE-5000研究項(xiàng)目中可提供體液高熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)及比率等參數(shù)，高熒光細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞密切相關(guān)[9-10]，便于開展科研工作。（4）多數(shù)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀有檢測50×106/L白細(xì)胞低值限制[11-12]，對于細(xì)胞含量低的體液標(biāo)本，Sysmex XE-5000體液模式計(jì)數(shù)更加準(zhǔn)確。

5 結(jié)語

Sysmex XE-5000血細(xì)胞分析儀操作簡便、速度快、精密度高，且可避免因操作人員不同而導(dǎo)致的差異，可提高檢測效率，所需檢測標(biāo)本量小，只需150 μL的體液標(biāo)本，在日常工作中可以替代傳統(tǒng)手工計(jì)數(shù)法檢測體液標(biāo)本。但對于腦脊液等特殊標(biāo)本，多數(shù)標(biāo)本的白細(xì)胞數(shù)值通常小于50×106/L。從精密度實(shí)驗(yàn)中可知，檢測胸水、腹水、腦脊液低值標(biāo)本CV%雖在要求范圍內(nèi)，但已接近（CV=20%）上限；而腦脊液白細(xì)胞的參考值范圍為成人0～10×106/L，兒童0～15× 106/L，因此對于白細(xì)胞＜20×106/L的體液標(biāo)本[13]，Sysmex XE-5000并不能完全替代手工計(jì)數(shù)法檢測體液標(biāo)本，應(yīng)增加檢測次數(shù)取其測量平均值作為檢測結(jié)果，以減少測量誤差。

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（收稿：2014-02-20 修回：2014-06-12）

Evaluation of Sysmex XE-5000 fully automated hematological analyzer for body fluids

MA Ke,ZHANG Ya-juan,FENG Bo,ZUO Lu-guang,ZHAN Ming-hua
（The First Affiliated Hospital of Hebei North University,Zhangjiakou 075000,Hebei Province,China）

ObjectiveTo evaluate the function of Sysmex XE-5000 fully automated hematological analyzer in testing body fluids．MethodsUsing the BF mode to measure cerebrospinal fluid,pleural fluid and peritoneal fluid,blank test, precision,carryover,linearity and comparison were analyzed and the performance of Sysmex XE-5000 was evaluated．ResultsThe analyzer had the blank test coincident with the requirements of the instrument manufacturer,high precision (CV%＜20%),carryover lower than 0．5%,high linearity(0．95＜a＜1．05,and the correlation coefficient r＞0．99),and test results highly consistent with those by manual operation(r＞0．90)．ConclusionSysmex XE-5000 fully automated hematological analyzer can be widely used in clinical detection．[Chinese Medical Equipment Journal，2014，35（9）：90-93]

fully automated hematological analyzer;body fluid detection;performance evaluation

R318．6；TH776

A

1003-8868（2014）09-0090-04

10．7687/J．ISSN1003-8868．2014．09．090

河北省高等學(xué)?？茖W(xué)技術(shù)研究青年基金項(xiàng)目（Q2012141）

馬 科（1977—），男，主管檢驗(yàn)師，主要從事臨床檢驗(yàn)方面的研究工作，E-mail：mkzyj@sohu．com。

075000河北張家口，河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院（馬 科，張婭娟，馮 博，左路廣，詹明華）