IgA腎病病理與臨床指標及轉化生長因子β1和Smad7蛋白的相關因素分析

郭鵬威 楊發(fā)奮 王潔 林栩 黃鵬 湯春榮

右江民族醫(yī)學院附屬醫(yī)院腎內科，廣西百色 53300

IgA腎病病理與臨床指標及轉化生長因子β1和Smad7蛋白的相關因素分析

郭鵬威 楊發(fā)奮 王潔 林栩 黃鵬 湯春榮

右江民族醫(yī)學院附屬醫(yī)院腎內科，廣西百色 53300

目的對IgA腎病進行病理學分型及其臨床指標之間的關系進行探討和分析，并觀察轉化生長因子β1和Smad7蛋白的不同表達，旨在對發(fā)病機制等因素進行探討。方法 選取該院收治的100例原發(fā)性IgA腎病患者，收集并研究患者臨床資料，參照IgA腎病分型對所有患者的腎活檢標本進行評分并比較各病理及分型見常見指標的差異。通過使用免疫熒光雙套染法并結合激光共聚焦顯微鏡檢測IgA免疫復合物在不同腎病腎小球的沉積量，比較并分析其相關因素。此外，采用化學二步法檢測轉化生長因子β1和Smad7蛋白的表達，并比較不同表達情況與腎小球沉積量的關系。結果 IgA腎病腎組織除E0/1外，其余臨床指標之間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；血清IgA濃度組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），腎組織IgA沉積量差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；轉化生長因子β1和Smad7蛋白表達差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結論 IgA腎病病理可以反映病變指標；血清濃度高低并不一定能決定IgA腎病是否發(fā)作，但沉積的IgA復合物可能過量聚積造成腎小球硬化；轉化生長因子β1和Smad7蛋白很可能是過量聚積的重要原因并造成腎小球硬化。

IgA腎病病理；臨床指標；轉化生長因β1；Smad7蛋白

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.2 排除標準

①患者患有狼瘡腎炎、乙肝相關性腎炎等繼發(fā)性腎?。虎诨颊呋加心I小管間質病變或動脈病變等[1-2]；③患者每例腎穿組織內腎小球數量≥8個，且新月體占55%以下；④臨床24 h檢測患者尿蛋白定量超過0.5 g/d；⑤臨床估計患者eGFR超過30 mL/min（1.73 m2）。

1.3 方法

收集100例患者臨床資料，估算患者腎小球濾過率（eGFR）和平均動脈壓（MAP）。對所有患者進行腎病理學檢查。

1.3.1 光鏡 對患者進行穿刺處理以獲得患者腎組織，以福爾馬林固定并用石蠟進行包埋，將其處理成為厚度大約為4 μm的切片，并對切片分別進行PAS、Msson、HE和PASM染色。腎組織病理指標應當包括球性硬化、新月體、內皮細胞增生、壞死等方面。

1.3.2 電鏡 使用濃度為2.5%～3%的戊二醛 （稀戊二醛溶液：國藥準字H44021172）初固定腎穿組織，之后用1%濃度的鋨酸（CAS號20816-12-0）后固定，對其按照常規(guī)方式進行制片，將其處理成為1 μm厚度的切片并用醋酸鈾-檸檬酸鉛 （醋酸鈾：CAS號541-09-3；檸檬酸鉛：CAS號512-26-5）染色。在電鏡下觀察腎小球基底膜厚度變化及其結構變化，細胞器變化及上皮細胞足突的形態(tài)特征等。

1.3.3 腎組織病理學觀察及分型 在光鏡視野下，根據IgA腎病的牛津分型，分別對M0/1、S0/1、E0/1、T0/1/2進行評分并整理組合，見表1。

表1 I gA腎病分型中不同病理參數及其意義

通過使用規(guī)定的PAS染色切片對系膜細胞增生進行評分，將符合條件的小球數量記錄為X。并將所有小球評分分值相加的總數記為Y。Y/X所得即為系膜細胞增生的評分。

標準明確規(guī)定了尼龍絹袋集卵孵化法檢測人體糞便中日本血吸蟲毛蚴的技術規(guī)范，適用于各級疾病預防控制機構和醫(yī)療機構對日本血吸蟲毛蚴的檢測。引用《病原微生物實驗室生物安全通用準則（WS 233—2017）》。

表2 100例IgA腎病病理與臨床指數差異

表2 100例IgA腎病病理與臨床指數差異

病理參數MAP（mmHg）P EGFR（mL/min/1.73 m2）P 24 hpb（g/d） P M0（n=40）M1（n=60）S0（n=46）S1（n=54）E0（n=43）E1（n=57）T0（n=60）T1（n=27）T2（n=13）97±19 95±18 95±12 102±14 99±12 98±20 92±18 101±18 109±22 P＞0.05P＞0.05P＜0.05 P＞0.05P＜0.05P＞0.05 P＞0.05P＞0.05P＞0.05 P＜0.001 100.9±43.9 101.6±60.3 104.8±59.9 98.0±48.2 99.7±48.4 101.2±57.9 115.1±51.3 101.4±45.1 46.5±38.9 P＜0.001 1.8±2.4 2.9±3.7 2.0±2.5 2.3±3.1 2.4±1.9 2.2±2.8 2.0±3.1 1.8±1.9 3.4±3.9 P＜0.05

1.3.4 免疫熒光檢查 選取腎穿新鮮的組織并進行冰凍切片，采用厚度約為2～3 μm的免疫熒光進行染色，并使用FITC分別采用直接免疫熒光染色和簡潔熒光法進行標記和檢測。在顯微鏡下對其進行熒光觀察。采用化學二步法檢測轉化生長因子β1和Smad7蛋白的表達，并比較不同表達情況與腎小球沉積量的關系。

1.4 統(tǒng)計方法

該觀察數據統(tǒng)計應用SPSS 17.0軟件對數據進行分析，計量資料以均數±標準差形式表示，組間應用t檢驗進行比較。

2 結果

IgA腎病腎組織除E0/1外，其余臨床指標之間均差異有統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表2。

血清IgA濃度組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），腎組織IgA沉積量差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），轉化生長因子β1和 Smad7蛋白表達組間比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 在病理參數內IgA血清濃度和沉積量差別

表3 在病理參數內IgA血清濃度和沉積量差別

病理參數 血清濃度P IgA沉積量 P M0（n=40）M1（n=60）S0（n=46）S1（n=54）E0（n=43）E1（n=57）T0（n=60）T1（n=27）T2（n=13）3.2±1.8 2.2±1.7 3.3±1.9 2.4±1.5 2.9±1.3 2.9±1.2 2.9±1.9 3.2±1.7 2.6±1.7 P＞0.05P＜0.05 P＜0.05P＞0.05 P＞0.05P＞0.05 P＞0.05 14.8±16.4 16.4±14.2 15.8±16.4 16.0±14.4 14.6±17.6 15.9±11.3 15.7±16.8 16.1±10.9 13.5±16.7 P＞0.05

3 討論

IgAN組織學的病理變化多種多樣，在顯微鏡下，輕則腎小球、腎小管正常；重則腎小球嚴重病變，形成各類新月體；晚期患者多為腎小球硬化、腎小管萎縮或發(fā)生間質纖維化。自從Berger在1968年第一次報道IgAN后，臨床上出現(xiàn)過許多種分類、分型標準，但由于這些標準大多缺乏病理參數系統(tǒng)定義，同時并不具備重復檢測性，因此多數教授并沒有接受這些分類[1]。

該次研究選用了國際腎臟病理協(xié)會在2004年組織制定的I gAN牛津病理分型，其具有良好的重復性和可預測性，加上選用最為被廣泛接受的MAO、eGFR等指標，通過單變量分析法對不同系膜細胞增生進行評分，以此來判定其相關性。先前學者對血清IgA濃度、腎組織IgA沉積量和IgA腎病關系的看法各不相同[2-4]。該次研究中單變量分析結果表明不同系膜細胞增生評分、腎小管萎縮評分、腎小球節(jié)段性硬化評分等對于血清IgA濃度產生的差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。而對于腎組織IgA免疫復合物沉積量和IgA腎病之間的關系探討，以往學者通常是采用半定量法。而該次研究中則通過借助激光共聚焦顯微鏡可以定量不同熒光標記物來研究腎病IgA沉積量和各病理參數之間的關系[5-7]。

此外，對于轉化生長因子-β1、Smad蛋白在IgA腎病中的表達及其意義，從該次研究中看來，Smad7蛋白的表達和系膜細胞增生評分呈現(xiàn)出正相關的趨勢，Smad7的高表達很可能會改變轉化生長因子-β1內的病理生理平衡。同時還發(fā)現(xiàn)，轉化生長因子-β1的表達和IgA沉積量存在一定關聯(lián)且Smad7蛋白的表達和轉化生長因子-β1也存在一定相關性。通過本次研究，我們認為IgA腎病患者沉積的IgA免疫復合物很可能會造成轉化生長因子-β1蛋白表達的提高，且Smad7很可能參與到了病變腎小球細胞外基質的過量積聚中去。這些研究結果與以前的研究是一致的[8-10]。

綜上所述，通過對血清IgA濃度、沉積量和IgAN之間的關系進行探討和分析，以及觀察轉化生長因子β1和Smad7蛋白在不同IgA腎小球內的表達及其與沉積量之間的關系發(fā)現(xiàn)，IgA腎病病理可以反映病變指標；血清濃度高低并不一定能決定IgA腎病是否發(fā)作，但沉積的IgA復合物可能過量聚積造成腎小球硬化；轉化生長因子β1和Smad7蛋白很可能是過量聚積的重要原因并造成腎小球硬化。

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R69

A

1674-0742（2014）11（b）－0044-03

郭鵬威（1979.7-），男，廣西扶綏人，研究生，主治醫(yī)師，研究方向：腎小球疾病，血液凈化。