乳癌組織肝癌缺失基因-3的表達(dá)及其臨床意義

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(威海市立醫(yī)院甲狀腺乳腺外科，山東 威海 264200)

乳癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率占全身惡性腫瘤的7%～10%[1]。肝癌缺失基因-3(DLC-3)是新近發(fā)現(xiàn)的與腫瘤密切相關(guān)的基因，它通過(guò)提高內(nèi)源性GTP酶的活性，參與細(xì)胞的增殖、生長(zhǎng)和遷移過(guò)程[2-3]。DLC-3基因在乳癌組織中的表達(dá)情況目前尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)檢測(cè)DLC-3在乳癌組織中的表達(dá)水平，分析其與腫瘤臨床病理特征的關(guān)系，以初步了解DLC-3在乳癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

2012年12月—2013年10月，收集在我科經(jīng)手術(shù)治療切除的原發(fā)性乳癌標(biāo)本62例、癌旁組織(距腫瘤邊緣大于5 cm)23例、乳房腺病組織20例。62例乳癌病人均為女性，年齡28～72歲。組織學(xué)類型：浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌51例，浸潤(rùn)性小葉癌11例。組織學(xué)分級(jí)：Ⅰ級(jí)16例，Ⅱ級(jí)25例，Ⅲ級(jí)21例。依據(jù)美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)(AJCC)乳癌TNM分期(第7版)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期，其中Ⅰ、Ⅱ期34例，Ⅲ、Ⅳ期28 例。有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者30例，無(wú)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者32例。所有病人術(shù)前均未接受放、化療。

1.2 免疫組化檢測(cè)

所有組織標(biāo)本均常規(guī)固定包埋，4 μm厚切片，經(jīng)脫蠟、水化后，DLC-3標(biāo)記采用免疫組化SP法染色，EDTA高壓鍋熱修復(fù)；其余標(biāo)記采用免疫組化Envision二步法染色，PBS高壓鍋熱修復(fù)。DAB顯色，蘇木精復(fù)染。用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，用已知陽(yáng)性標(biāo)本切片作為陽(yáng)性對(duì)照。鼠抗人單克隆抗體DLC-3(1∶150)購(gòu)自美國(guó)Abcam公司。

1.3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

DLC-3陽(yáng)性染色為棕黃色顆粒定位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)。由兩位病理學(xué)專家雙盲法觀察切片，采用半定量方法判斷結(jié)果，≤4分為陰性(-)，>4分為陽(yáng)性(+)[4]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 17.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有顯著性。

2 結(jié) 果

2.1 DLC-3在乳癌組織、癌旁組織和乳房腺病組織中的表達(dá)

DLC-3主要表達(dá)于細(xì)胞核中，部分表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，以黃色、棕黃色著色為主。乳癌組織、癌旁組織及乳房腺病組織中DLC-3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為17.74%(11/62)、43.48%(10/23)、60.00%(12/20)，DLC-3蛋白在乳癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于其在癌旁組織和乳房腺病組織中的陽(yáng)性表達(dá)率，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=18.356，P<0.01)。

2.2 乳癌組織DLC-3蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

乳癌組織DLC-3蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、人表皮生長(zhǎng)因子受體2(Her-2)表達(dá)有關(guān)(χ2=3.930～5.984，P<0.05)，而與病人年齡、病理類型、腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)、雌激素受體(ER)表達(dá)無(wú)關(guān)(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 乳癌組織DLC-3表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性(例)

3 討 論

業(yè)已證實(shí)，腫瘤發(fā)生發(fā)展是多步驟、多因素參與過(guò)程，其中抑癌基因功能喪失是癌變事件的中心環(huán)節(jié)[5-6]。DLC-3是新近發(fā)現(xiàn)與腫瘤密切相關(guān)的潛在抑癌基因，位于人染色體13Xq13(STARD-GAP3)區(qū)域，全長(zhǎng)3 800 bp，由14個(gè)外顯子組成，以產(chǎn)生約長(zhǎng)6 300 bp的轉(zhuǎn)錄物為主。研究顯示，DLC-3依靠張力蛋白的輔助，募集到黏著斑，并通過(guò)RhoGAP抑制RhoGTP酶的活性，從而影響肌動(dòng)蛋白應(yīng)力纖維的構(gòu)建和黏著斑轉(zhuǎn)換，對(duì)細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞增殖和遷移進(jìn)行調(diào)控[2，7]。DLC-3基因失活可引起RhoGTP酶活性增加，過(guò)度表達(dá)的RhoGTP酶導(dǎo)致細(xì)胞功能異常，促進(jìn)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化[8]。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，轉(zhuǎn)染DLC-3表達(dá)載體的人前列腺癌細(xì)胞在細(xì)胞增殖、克隆形成和增長(zhǎng)方面受到明顯抑制，表明DLC-3可能對(duì)前列腺癌生長(zhǎng)具有抑制作用[2]。

DURKIN等[9]利用微陣列技術(shù)比較分析癌組織與正常組織DLC-3表達(dá)情況，結(jié)果顯示，DLC-3 mRNA在腎癌、肺癌、卵巢癌組織中表達(dá)下調(diào)。定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)結(jié)果顯示，前列腺癌組織中DLC-3的表達(dá)明顯低于正常前列腺組織[10]。但DLC-3在乳癌組織中表達(dá)的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究應(yīng)用免疫組化方法對(duì)62例乳癌進(jìn)行檢測(cè)，DLC-3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為17.74%，顯著低于癌旁組織和乳房腺病組織。說(shuō)明DLC-3基因在正常乳房組織和乳房良性增生性組織中普遍表達(dá)，而在乳癌組織中其表達(dá)明顯下調(diào)或表達(dá)缺失。進(jìn)一步對(duì)DLC-3基因表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，DLC-3蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、Her-2表達(dá)均有明顯相關(guān)性，而與病人年齡、腫瘤大小、病理類型、組織學(xué)分級(jí)及ER表達(dá)無(wú)關(guān)。病理分期越晚，DLC-3表達(dá)下調(diào)越明顯；伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病人DLC-3表達(dá)缺失的發(fā)生概率明顯低于不伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病人；Her-2表達(dá)與DLC-3表達(dá)缺失亦存在顯著相關(guān)性。眾所周知，病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Her-2表達(dá)是影響乳癌預(yù)后的重要因素，而本研究中DLC-3的表達(dá)恰好與這三者有密切關(guān)系，提示DLC-3基因在乳癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。DLC-3基因在乳癌中表達(dá)降低或不表達(dá)可能是由于表觀遺傳學(xué)機(jī)制引起，如啟動(dòng)子DNA甲基化和組蛋白乙酰化，利用逆轉(zhuǎn)甲基化藥物或分子干預(yù)手段可對(duì)其具體下調(diào)機(jī)制進(jìn)行更進(jìn)一步研究[2]。

綜上所述，DLC-3在乳癌中低表達(dá)或表達(dá)缺失，且其表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、Her-2表達(dá)存在相關(guān)性，提示DLC-3可能參與了乳癌的發(fā)生發(fā)展。本研究?jī)H就DLC-3在乳癌組織中的表達(dá)做初步探討，其表達(dá)缺失的原因及其在乳癌中的具體作用機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

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