黃芩苷的豚鼠致敏作用及其可能的作用機制

郜 娜，高 遠(yuǎn)，田鋒奇，喬海靈

(鄭州大學(xué)臨床藥理研究所，河南鄭州 450052)

黃芩苷的豚鼠致敏作用及其可能的作用機制

郜 娜，高 遠(yuǎn)，田鋒奇，喬海靈

(鄭州大學(xué)臨床藥理研究所，河南鄭州 450052)

目的 探討黃芩苷的致敏作用機制。方法 采用活性酯法制備黃芩苷全抗原,建立黃芩苷致豚鼠過敏性休克模型；采用被動皮膚過敏反應(yīng)(PCA)實驗分析豚鼠特異性抗體產(chǎn)生的規(guī)律性以及IgE和IgG抗體效價,采用ELISA測定豚鼠血清中黃芩苷特異性IgG抗體。結(jié)果 成功合成黃芩苷全抗原,黃芩苷與牛血清蛋白(BSA)和人血清白蛋白(HSA)的偶聯(lián)效率分別為9∶1和5∶1。成功建立黃芩苷致敏的豚鼠休克模型,并顯示典型的速發(fā)型過敏反應(yīng)特征。致敏豚鼠第一次致敏后第19天開始用PCA實驗檢測出抗黃芩苷抗體,第31天達(dá)高峰,之后逐漸降低。致敏豚鼠體內(nèi)同時存在IgE和IgG型特異性抗體,且兩抗體之間無明顯相關(guān)性。致敏豚鼠血清中黃芩苷特異性IgG抗體的陽性率為84%,致敏組肥大細(xì)胞脫顆粒率為(72.6± 11.4)%,顯著高于陰性對照組(26.8±6.9)%。致敏豚鼠離體回腸經(jīng)黃芩苷-HSA激發(fā)后收縮明顯。結(jié)論黃芩苷能夠?qū)е码嗍蟪霈F(xiàn)過敏反應(yīng),并與特異性IgE和IgG抗體有關(guān)。

黃芩苷；藥物過敏；抗體生成

黃芩苷(baicalin，BG)是由唇形科植物黃芩(Scutellaria baicalensis Georgi)的干燥根中提取的一種黃酮類化合物，在臨床上可廣泛用于治療心血管疾病和病毒性肝炎[1]?！吨袊幍洹肥蛰d的以BG為主要成分的中藥制劑有100余種，包括茵梔黃注射液、清開靈注射液和雙黃連注射液等[2]。雙黃連粉針劑自1992年被國家中醫(yī)藥管理局定為全國中醫(yī)院急診科首批必備中成藥以來，目前已成為中醫(yī)治療感染性疾病的首選藥物之一。隨著雙黃連的廣泛應(yīng)用，有關(guān)其引起的不良反應(yīng)特別是過敏反應(yīng)日益受到重視。宮濤等[3]報道，靜脈應(yīng)用雙黃連注射液和粉針劑致不良反應(yīng)的310例患者中，過敏反應(yīng)占75%，且均表現(xiàn)為典型的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)，具有突發(fā)突止的特點，其中過敏性休克占6%，來勢兇猛，與青霉素相似。李陽革等[4]報道，3096例雙黃連使用者中粉針劑和水針劑的不良反應(yīng)發(fā)生率分別為1.90%和4.22%，其中過敏反應(yīng)分別占61.5%和60.3%。童路[5]對106個不同生產(chǎn)批號和不同工藝生產(chǎn)的雙黃連制劑采用薄層層析技術(shù)檢測，結(jié)果顯示，只有不含BG批號的樣品無過敏反應(yīng)，提示BG可能是雙黃連所致過敏反應(yīng)的原因。

本研究室曾收集了10余例雙黃連過敏患者的血清(自述曾有雙黃連過敏史)，并發(fā)現(xiàn)其血清中BG特異性IgE和IgG抗體均高于正常對照組(無過敏史的正常受試者)，推測BG可能是雙黃連導(dǎo)致過敏的主要因素。本研究建立BG致過敏性休克豚鼠模型；采用ELISA測定致敏豚鼠血清中特異性IgG抗體；采用被動皮膚過敏反應(yīng)(passive cutaneous anaphylaxis，PCA)實驗、肥大細(xì)胞脫顆粒和豚鼠離體回腸運動實驗分析BG致過敏作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物、藥物、試劑和儀器

白色皮毛健康豚鼠，體質(zhì)量為180～220 g，雌雄各半，動物合格證號:0006831，由河南省實驗動物中心提供。BG由中國藥品生物制品檢定所提供。牛血清蛋白(bovine serum albumin，BSA)、人血清白蛋白(human serum albumin，HSA)及卵清蛋白(ovalbumin，OVA)均購自美國Sigma公司。UV-200分光光度計:日本島津公司；PM-10AD倒置顯微鏡:日本Olympus公司；JZ-BK肌肉張力換能器:貝科測控設(shè)備有限公司；Sunrise酶標(biāo)儀:奧地利Tecan公司。

1.2 BG與蛋白偶聯(lián)物的制備和鑒定

采用活性酯法制備BG與BSA和HSA的偶聯(lián)物，BG-BSA和BG-HSA包括BG的活化和活化酯與蛋白的偶聯(lián)等[6]。采用紫外分析法鑒定偶聯(lián)物的合成及測定偶聯(lián)率[7]。

1.3 豚鼠過敏性休克模型的制備[8]

(1)致敏:豚鼠30只，雌雄各半，隨機均分為模型組、陰性對照組和陽性對照組。模型組第1天ip給予0.2%BG-BSA和等體積弗氏佐劑共1 mL(混勻)，第3和第5天ip給予0.5 mL 0.2%BG-BSA，共致敏3次。陰性對照組用0.2%BSA代替BG-BSA。陽性對照組隔日注射0.5 mL(1 mg)0.2%OVA溶液，共3次。

(2)激發(fā):3組豚鼠均于首次致敏后第31天進(jìn)行激發(fā)，誘發(fā)過敏反應(yīng)。模型組和陰性對照組分別耳緣靜脈注射0.5 mL 0.2%BG-HSA，陽性對照組耳緣靜脈注射0.5 mL 0.2%OVA，觀察豚鼠一般情況和死亡率，并取材備檢，包括肝組織和肺組織。組織用常規(guī)4%甲醛固定，脫水，石蠟包埋后切片，HE染色，鏡下觀察組織病理變化。

1.4 PCA實驗分析BG致敏豚鼠特異性抗體產(chǎn)生的規(guī)律[9]

取豚鼠6只，雌雄各半，按1.3方法給予0.2% BG-BSA致敏(不激發(fā))。首次致敏為第1天，分別于第19，23，27，31，35和50天心臟取血2 mL，制備血清－20℃保存?zhèn)溆谩⑸鲜鲅宸謩e用生理鹽水稀釋成合適的稀釋度，另取正常豚鼠背部皮內(nèi)注射稀釋的血清。48 h后耳緣靜脈注射與致敏劑量相同的激發(fā)抗原BG-HSA加等量的1%伊文思藍(lán)染料，30 min后測量皮膚藍(lán)斑直徑，大于5 mm為陽性。皮膚藍(lán)斑陽性時血清的最大稀釋倍數(shù)即抗體滴度表示BG特異性抗體水平，以6只豚鼠抗體滴度的中位數(shù)表示。

1.5 PCA實驗鑒定BG致敏豚鼠特異性抗體的類型并測定IgG和IgE抗體效價[10]

取19只豚鼠，按1.3方法給予0.2%BG-BSA致敏(不激發(fā))。于第31天心臟取血，并分離血清。每只豚鼠取0.3 mL置56℃恒溫水浴1 h，此為滅活血清；剩余0.3 mL血清為非滅活血清。另取9只正常豚鼠分為 3組，每組3只，背部備皮。第 1和第2組沿脊柱兩側(cè)皮內(nèi)注射滅活血清，第3組注射非滅活血清。第1組于3 h后每只豚鼠耳緣靜脈注射0.2%BG-HSA加等體積1%伊文思藍(lán)共1 mL，第2組和第3組于72 h后每只豚鼠耳緣靜脈注射0.2%BG-HSA加等體積1%伊文思藍(lán)共1 mL。注射后觀察30 min，觀察背部皮膚是否出現(xiàn)藍(lán)斑。背部皮膚出現(xiàn)藍(lán)斑為PCA陽性。給予滅活血清的第1組豚鼠PCA陽性表明BG致敏豚鼠血清存在IgG抗體，給予非滅活血清的豚鼠PCA陽性表明BG致敏豚鼠血清存在IgE抗體。

1.6 ELISA檢測BG致敏豚鼠血清特異性IgG抗體的陽性率

取60只正常豚鼠，制備血清。用ELISA檢測致敏豚鼠(1.5中所得致敏豚鼠血清)和正常豚鼠血清特異性IgG抗體[11]，IgG抗體水平以492 nm處吸光度(A)值表示。根據(jù)60只正常豚鼠血清IgG抗體濃度，按單側(cè)99%的可信區(qū)間確定正常值范圍。陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)為2.303 s，即如果IgG抗體＋2.303 s，即判斷為BG致敏豚鼠血清特異性IgG抗體陽性。

1.7 豚鼠腹腔肥大細(xì)胞被動脫顆粒實驗

取24只豚鼠平均分為模型組、陽性對照組和陰性對照組，按1.3方法給予0.2%BG-BSA，0.2%BSA或者0.2%OVA致敏(不激發(fā))。于第31天心臟取血，并分離血清。參考文獻(xiàn)[12]方法將致敏豚鼠血清400 μL與懸浮培養(yǎng)的正常豚鼠腹腔肥大細(xì)胞 (peritoneal mast cells，PMC)37℃共孵育2 h，4℃終止反應(yīng)，用冷臺氏液洗滌，去上清。模型組和陰性對照組分別加入300 μL 0.2%BG-HSA，陽性對照組加入300 μL 0.2%OVA，孵育30 min，4℃終止反應(yīng)，用冷臺氏液洗滌，收集細(xì)胞。中性紅染色，高倍鏡下計數(shù)具有明顯脫顆粒的肥大細(xì)胞數(shù)。肥大細(xì)胞脫顆粒率(%)＝脫顆粒肥大細(xì)胞數(shù)/肥大細(xì)胞總數(shù)×100%。

1.8 豚鼠離體回腸平滑肌過敏性收縮實驗[13]

取18只豚鼠平均分為模型組、陽性對照組和陰性對照組，按1.3方法給予0.2%BG-BSA，0.2% BSA或者0.2%OVA致敏(不激發(fā))。于第30天禁食12 h，取出回腸。模型組加入0.2%的BG-HSA 0.5 mL，或者先加入0.01%的苯海拉明0.1 mL，再加入0.2%的BG-HSA 0.5 mL；陰性對照組加入0.2%的BG-HSA 0.5 mL；陽性對照組加入0.01%的組胺0.1 mL。加入相應(yīng)藥物后觀察3 min，觀察回腸是否收縮，分析BG是否可能通過釋放組胺致敏。

1.9 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 BG與蛋白偶聯(lián)物的鑒定

制備不同濃度的BG標(biāo)準(zhǔn)液并測定其在274 nm的A值，并以A274nm值對BG濃度作回歸分析，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:c(mg·L－1)＝16.71×A274nm＋1.03。

如圖1顯示，BSA溶液(200 mg·L－1)(圖1A)和BG標(biāo)準(zhǔn)品溶液(28 mg·L－1)(圖1B)分別在274和280 nm處有最大吸收，而偶聯(lián)物BG-BSA (200 mg·L－1)(圖1C)與 BSA濃度相同時，在280 nm處的吸收值明顯增強，說明BG與BSA偶聯(lián)成功。偶聯(lián)物BG-BSA(200 mg·L－1)在280 nm處吸收值為A1＝0.679，BSA(200 mg·L－1)的吸收值為A2＝0.023，A1－A2則是BG在此波長處的貢獻(xiàn)。帶入上述標(biāo)準(zhǔn)曲線可得出偶聯(lián)物中對應(yīng)BG的濃度為11.99 mg·L－1，即可計算出偶聯(lián)效率大約為9∶1。同理得出BG與HSA的偶聯(lián)效率為5∶1。

Fig.1 UV scanning spectrum of bovine serum aIbumin (BSA，200 mg·L－1)(A)，baicaIin(BG，28 mg·L－1) (B)and BG-BSA(200 mg·L－1)(C).

2.2 BG-BSA致過敏性休克豚鼠一般情況肺及肝病理改變

激發(fā)后，模型組豚鼠表現(xiàn)為躁動不安、呼吸困難、口鼻流涎、四肢軟弱和全身抽搐等癥狀，2 min內(nèi)9只死亡，1只隨后恢復(fù)正常(死亡率90%)；陽性對照組很快出現(xiàn)上述類似過敏癥狀，2 min內(nèi)全部死亡；陰性對照組，無上述類似過敏癥狀，無死亡。

Fig.2 PathoIogicaI changes in Iung tissue of guinea pigs with anaphyIaxis sensitized by BG-BSA(HE× 400).The guinea pigs in negative control and model groups were sensitized by 0.5 mL 0.2%BSA and 0.2%BG-BSA(ip)，respectively，on the 1st，3rd and 5th days.The guinea pigs of the two groups were stimulated by 0.2%BG-HSA 0.5 mL on the 31st day. A:negative control group；B:model group.The arrows show fusion and expansion of pulmonary alveoli(■)，degeneration and necrosis(↑)，alveolar wall thickening(?)and inflammatory cell infiltration(→).

肺組織病理觀察結(jié)果如圖2所示。陰性對照組肺組織正常，壁較薄，無血管炎等病理變化(圖2A)；模型組(圖2B)顯示肺泡融合擴張，組織壞死，肺水腫合并肺氣腫，肺泡壁增厚等變態(tài)反應(yīng)常見的病變。肝組織病理觀察結(jié)果如圖3所示。模型組(圖3B)與陰性對照組(圖3A)相比，肝水腫更為明顯，并伴有炎癥細(xì)胞浸潤和血管擴張充血。陽性對照組肺組織和肝組織病理變化與模型組相似(圖略)。

Fig.3 PathoIogicaI changes in Iiver tissue of guinea pigs with anaphyIaxis induced by BG-BSA(HE×400). See Fig.2 for the treatment of guinea pigs.A:negative control group；B:model group.The arrows show hepatic edema(■) accompanied by inflammatory cell infiltration(→)，vascular dilation and congestion(↑).

2.3 BG致敏豚鼠血清特異性IgE和IgG抗體

2.3.1 抗體產(chǎn)生的規(guī)律性

如圖4所示，豚鼠致敏后第19天開始檢測出抗體，第31天抗體滴度達(dá)到峰值，隨后逐漸下降，其中第27～35天維持較高水平。提示后續(xù)豚鼠肥大細(xì)胞脫顆粒實驗所用血清在初次致敏后第31天收集較為合理，離體回腸收縮實驗在初次致敏后第31天進(jìn)行比較合適。

Fig.4 Time course of anti-BG antibody formation of guinea pigs with anaphyIaxis induced by BG-BSA.The guinea pigs were sensitized by 0.5 mL 0.2%BG-BSA(ip)on the 1st，3rd and 5th days.The anti-BG antibody in serum was determined by passive cutaneous anaphylaxis assay on the 19th，23rd，27th，31st，35th and 50th days.Median，n＝6.

2.3.2 特異性抗體的種類

PCA實驗結(jié)果表明，給正常豚鼠注射BG致敏豚鼠的滅活血清，3 h后耳緣靜脈再注射與致敏劑量相同的激發(fā)抗原BG-HSA加等量的1%伊文思藍(lán)染料，30 min內(nèi)正常豚鼠皮膚局部均出現(xiàn)藍(lán)斑，PCA反應(yīng)呈陽性；而正常豚鼠注射BG致敏豚鼠滅活血清72 h后，耳緣靜脈再注射BG-HSA加等量的1%伊文思藍(lán)染料，豚鼠皮膚均無藍(lán)斑出現(xiàn)，PCA反應(yīng)呈陰性；上述結(jié)果表明，BG致敏豚鼠血清中存在IgG抗體。給正常豚鼠注射BG致敏豚鼠的非滅活血清，72 h后耳緣靜脈再注射與致敏劑量相同的激發(fā)抗原BG-HSA加等量的1%伊文思藍(lán)染料，30 min內(nèi)正常豚鼠皮膚局部亦可出現(xiàn)藍(lán)斑，PCA反應(yīng)呈陽性，說明BG致敏豚鼠血清中存在特異性IgE抗體。

2.3.3 血清特異性IgE和IgG抗體陽性率和相關(guān)性

采用ELISA方法檢測了19只致敏豚鼠和60只正常豚鼠血清中BG特異性IgG抗體。結(jié)果表明，致敏組BG特異性IgG抗體(A492nm＝1.06±0.17)顯著高于正常對照組(A492nm＝0.68±0.09)(P＜0.01)，BG致敏豚鼠血清特異性IgG抗體陽性率為84%。

采用PCA實驗測定上述19只致敏豚鼠BG特異性IgG和IgE抗體效價，滴度分別為32和64(中位數(shù))。相關(guān)性分析顯示，ELISA所測BG特異性IgG水平與PCA所測IgG效價之間存在明顯相關(guān)性(P＜0.05)；而由PCA所測致敏豚鼠BG特異性IgG和IgE抗體效價之間無明顯相關(guān)性。說明IgE和IgG抗體可能分別參與了BG致敏反應(yīng)的發(fā)生和發(fā)展。

2.4 BG的變應(yīng)原性

2.4.1 BG致PMC脫顆粒

正常豚鼠PMC與BG致敏模型組(圖5B)和陽性對照組豚鼠血清孵育后，鏡檢有大量胞膜不完整的肥大細(xì)胞，顆粒脫出胞外，脫顆粒率分別為(72.6± 11.4)%(n＝8)和(68.8±11.0)%(n＝8)，均顯著高于陰性對照組(圖5A)(26.8±6.9)%(n＝8)(P＜0.01)。

Fig.5 Effect of serum of guinea pigs with anaphyIaxis induced by BG-BSA on degranuIation of peritoneaI mast ceIIs(PMCs)of normaI guinea pigs(×400).The guinea pigs in negative control and model groups were sensitized by 0.5 mL 0.2%BSA and 0.2%BG-BSA(ip)，respectively，on the 1st，3rd and 5th days.The sera of guinea pigs were separated on the 31st day，and then incubated with PMCs of normal guinea pigs at 37℃for 2 h.The PMCs with degranulation were observed and counted under a high power microscope.A:negative control group；B:model group.The arrows show the PMCs with degranulation.

2.4.2 BG致離體回腸收縮

于第1次致敏后第31天，分離BG致敏模型組、陰性對照組和陽性對照組豚鼠回腸。BG致敏模型組離體回腸經(jīng)0.2%BG-HSA攻擊后腸管收縮明顯增強(圖6A)；但預(yù)先加入苯海拉明，再加入0.2%的BG-HSA攻擊后腸管無明顯收縮(圖略)；提示BG可能引起組胺釋放，導(dǎo)致過敏反應(yīng)。陽性對照組加入組胺后腸管收縮明顯增強(圖6B)，進(jìn)一步驗證此推測。陰性對照組加入0.2%BG-HSA，離體回腸收縮不明顯(圖略)。

Fig.6 Effect of BG on iIeum contraction of guinea pigs with anaphyIaxis induced by BG-BSA.See Fig.5 for the treatment.The ileum was separated on the 31st day after the first sensitization.A:model group；B:positive control group.

3 討論

BG為小分子物質(zhì)，自身無免疫原性，需與大分子物質(zhì)如蛋白質(zhì)結(jié)合成完全抗原才能獲得免疫原性。對于BG在人體中會通過何種途徑形成完全抗原，至今未見相關(guān)報道。體外實驗最常用的方法是將其與載體偶聯(lián)獲得人工抗原，常用來作為合成人工抗原的載體有BSA、人血清蛋白及人工合成的多聚賴氨酸等。對于免疫動物來說，并不是載體蛋白連接的小分子越多越好，而是一定數(shù)量的小分子對免疫動物產(chǎn)生抗體來說是最理想的，如使用BSA作載體蛋白，酶分子結(jié)合 8～25個小分子較為合適[14]。本研究在體外使BG與大分子物質(zhì)BSA偶聯(lián)，成為完全抗原，成功建立了BG變應(yīng)原致豚鼠過敏反應(yīng)的豚鼠模型，為進(jìn)一步論證BG的過敏原本質(zhì)及其致敏作用的機制研究奠定了基礎(chǔ)。在建立動物變態(tài)反應(yīng)模型時，免疫抗原和激發(fā)抗原通常不用同一種蛋白偶聯(lián)，從而減少抗體對免疫原的非特異性結(jié)合，提高分析的特異性和靈敏度。

本研究結(jié)果表明，BG-BSA致敏的豚鼠激發(fā)后，迅速發(fā)生呼吸困難、翻滾臥倒、小便失禁直到呼吸停止死亡等休克癥狀。病理觀察結(jié)果表明，BG所致過敏反應(yīng)的病理改變主要表現(xiàn)為炎癥細(xì)胞浸潤和血管炎癥，同時具有毛細(xì)管擴張和通透性增加所致組織水腫等過敏反應(yīng)的基本病理改變，顯示典型的Ⅰ型超敏反應(yīng)特征[15]，這與一般Ⅰ型超敏反應(yīng)由于肥大細(xì)胞脫顆粒后釋放血管活性物質(zhì)及一些酶類，從而引起平滑肌收縮、黏液分泌、血壓降低及組織損傷相吻合。致敏后的豚鼠肥大細(xì)胞、離體回腸、同種動物皮膚激發(fā)后，由于抗原與附著于肥大細(xì)胞表面的IgE抗體相互作用，經(jīng)過一系列生化反應(yīng)之后而釋放過敏介質(zhì)導(dǎo)致肥大細(xì)胞脫顆粒、離體回腸收縮、皮膚藍(lán)斑反應(yīng)。

IgE與組織有較強的親和力，致敏肥大細(xì)胞后可介導(dǎo)24～72 h的PCA反應(yīng)，IgE不耐熱，56℃1 h可改變其Fc段的構(gòu)型而失去其致敏肥大細(xì)胞的作用。IgG雖然也能與肥大細(xì)胞結(jié)合，與IgE有類似的作用，但其在細(xì)胞上持續(xù)存在的時間卻十分短暫，一般情況下不超過4 h，大約在注射10 h內(nèi)從局部皮膚消失。但是lgG耐熱，56℃1 h不能改變其致敏肥大細(xì)胞的活性。據(jù)此，本研究用加熱滅活后的血清致敏3 h后激發(fā)PCA反應(yīng)陽性，72 h后激發(fā)PCA反應(yīng)陰性，而同時注入體內(nèi)的非滅活血清72 h后激發(fā)PCA則是陽性藍(lán)斑反應(yīng)，這說明致敏豚鼠體內(nèi)同時存在lgG和IgE型特異性抗體，IgG和IgE在過敏反應(yīng)發(fā)生過程中均發(fā)揮重要作用。

同種動物PCA實驗證實了BG-BSA致敏豚鼠血清中同時存在特異性的IgE和IgG抗體，但所測得的IgE與lgG兩抗體效價之間無明顯相關(guān)性。由此推測，IgE和IgG抗體可能分別參與了BG致敏反應(yīng)的發(fā)生和發(fā)展，與本研究室報道的青霉素過敏反應(yīng)特異性IgG與IgE之間無明顯相關(guān)性相一致[11]。

綜上所述，BG能夠?qū)е码嗍蟪霈F(xiàn)過敏反應(yīng)，且與IgE和IgG抗體均有關(guān)。

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(本文編輯:齊春會)

向2014年為本刊審稿的編委和專家表示衷心的感謝!

(以漢語拼音為序)

伯曉晨

蔡寶昌

曹濟民

曹志然

柴振海

常 艷

陳春英

陳建國

陳景元

陳 立

陳 龍

陳 勤

陳樞青

陳曉光

陳曉明

陳笑艷

程 寧

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朱心強

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莊志雄

鄒 偉

鄒仲敏

左建平

Sensitization of baicaIin in guinea pigs and its possibIe mechanism

GAO Na，GAO Yuan，TIAN Feng-qi，QIAO Hai-ling
(Institute of Clinical Pharmacology，Zhengzhou University，Zhengzhou 450052，China)

OBJECTIVE To elucidate the sensitization mechanism of baicalin in guinea pigs. METHODS Baicalin antigens were prepared by activated ester method.A guinea pig model of allergic shock induced by the coupling was established.Passive cutaneous anaphylaxis(PCA)was used to analyze the regularity of the specific antibody.The IgG antibodies of baicalin in serum among 19 sensitized guinea pigs were determined by ELISA.RESULTS UV scanning spectrum couplings occurred between baicalin and protein(bovine serum albumin and human serum albumin).The conjugation ratio was 9∶1 and 5∶1，respectively.The guinea pig model of allergic shock was successfully established and suggested that the antigen induced a typical immediate hypersensitivity response.The antibody could be determined on the 19th day and reached the maximum on the 31st day and then degraded gradually.Both specific IgE and IgG existed in the sensitized serum，but there was no correlation between IgG and IgE.The positive rate of specific IgG antibody to baicalin was 84%.The degranulation rate of peritoneal mast cells was (72.6±11.4)%and higher than that incubated with plasma from control(26.8±6.9)%(P＜0.05).Isolated ileum from sensitized guinea pigs contracted conspicuously after being challenged by baicalin-human serum albumin.CONCLUSION Baicalin can induce allergic reaction in guinea pigs and the reaction is correlated with IgE and IgG production.

baicalin；drug hypersensitivity；antibody formation

QIAO Hai-ling，E-mail:qiaohl＠zzu.edu.cn，Tel:(0371)66658363

R285，R967

:A

:1000-3002(2014)06-0857-06

10.3867/j.issn.1000-3002.2014.06.007

2014-05-20 接受日期:2014-10-27)

郜 娜(1975－)，女，博士，主要從事藥物過敏和藥動學(xué)研究，E-mail:gaonawei＠zzu.edu.cn，Tel: (0371)66658363

喬海靈，E-mail:qiaohl＠zzu.edu.cn，Tel: (0371)66658363