免疫比濁法測(cè)定尿微量白蛋白的分析

李彧敏，張曉霞

（靈臺(tái)縣人民醫(yī)院，甘肅 靈臺(tái) 744400）

免疫比濁法測(cè)定尿微量白蛋白（UmALB）是近年來檢測(cè)腎臟病變的早期指標(biāo)，并能在某種程度上反映病變的嚴(yán)重程度，因此越來越受到臨床的重視。筆者對(duì)免疫比濁法測(cè)定尿微量白蛋白進(jìn)行了探索，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)本 2013年5月10日在我院門診進(jìn)行健康體檢的小學(xué)六年級(jí)一班學(xué)生和我院兒科住院患兒的新鮮隨機(jī)尿液。

1.1.2 儀器 CS800全自動(dòng)生化分析儀。

1.1.3 試劑 采用寧波瑞源生物科技有限公司生產(chǎn)的試劑。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本處理 新鮮隨機(jī)尿液標(biāo)本離心取上清液測(cè)定：穩(wěn)定性試驗(yàn)取新鮮尿液離心后上清液分裝于4℃和-20℃保存，測(cè)定時(shí)取出平衡至室溫后，離心取上清液測(cè)定。

1.2.2 測(cè)定條件設(shè)置 采用免疫比濁法，用試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品及試劑，按照試劑盒的要求設(shè)置參數(shù)：雙波長(zhǎng)，兩點(diǎn)終點(diǎn)法，定標(biāo)方式為logit log 5p，定標(biāo)液濃度分別為0.0，12.0，22.2，49.5，103.5，205.5mg/L，批號(hào)1335F。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

線性試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS1.0統(tǒng)計(jì)軟件拋物線擬合處理。

2 結(jié)果

2.1 線性試驗(yàn)

定標(biāo)后以標(biāo)準(zhǔn)物濃度為自變量X，吸光度為因變量Y（吸光度值×104），通過拋物線擬合尿微量白蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線，并與實(shí)際標(biāo)準(zhǔn)曲線比較。曲線方程為Y=1 052.10+124.639X-0.114 3X2，確定系數(shù)R2=1.000，P=0.000。因此可認(rèn)為擬合曲線與實(shí)際曲線符合性很好，檢出限為0～200mg/L。

2.2 重復(fù)性試驗(yàn)

2.2.1 批內(nèi)重復(fù)試驗(yàn) 取一新鮮尿液標(biāo)本連續(xù)測(cè)定尿微量白蛋白20次，計(jì)算變異系數(shù)，結(jié)果見表1。

2.2.2 批間重復(fù)試驗(yàn) 取一新鮮尿液標(biāo)本分裝成10份，同日分3批次測(cè)定（第一批3份，第二批3份，第三批4份），每份標(biāo)本均測(cè)定尿微量白蛋白兩次，取平均值計(jì)算變異系數(shù)，結(jié)果見表1。

表1 尿微量白蛋白重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果（mg/L）

2.3 回收試驗(yàn)

取一新鮮尿液標(biāo)本連續(xù)測(cè)定3次尿微量白蛋白，計(jì)算平均值作為基礎(chǔ)濃度，分別加入3份不同濃度微量白蛋白標(biāo)準(zhǔn)物（49.5，103.9，205.5 mg/L）混勻后，測(cè)定混合物尿微量白蛋白濃度，計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。

表2 尿微量白蛋白回收試驗(yàn)結(jié)果（mg/L）

2.4 干擾試驗(yàn)

2.4.1 血紅蛋白干擾試驗(yàn) 取一肝素抗凝全血標(biāo)本，3 000 r/min離心3分鐘棄去血漿，剩余的紅細(xì)胞以生理鹽水洗滌4次，通過機(jī)械攪拌和加入蒸餾水使其溶血，制成血紅蛋白液，測(cè)定其血紅蛋白濃度。將已知尿微量白蛋白量的尿液與血紅蛋白液以不同比例混勻，測(cè)定混合物尿微量白蛋白含量，計(jì)算干擾率，結(jié)果見表3。

表3 尿微量白蛋白血紅蛋白干擾試驗(yàn)結(jié)果

2.4.2 膽紅素干擾試驗(yàn) 取一膽紅素定位陽性，尿蛋白定性為陰性的新鮮尿液標(biāo)本，以此標(biāo)本作為膽紅素干擾液。另取一膽紅素定性為陰性的新鮮尿液標(biāo)本，測(cè)定其尿微量白蛋白含量，以此標(biāo)本作為基礎(chǔ)液。將基礎(chǔ)液與膽紅素干擾液以不同比例混勻，測(cè)定混合物尿微量白蛋白含量，計(jì)算干擾率，結(jié)果見表4。

表4 尿微量白蛋白膽紅素干擾試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

正常人的腎小球?yàn)V液中存在小分子的蛋白質(zhì)，在通過近曲小管時(shí)絕大部分被重吸收，因此終尿中總蛋白含量很少，僅為30～130mg/24 h。當(dāng)尿中白蛋白排出量在3.2～22.6mg/mmol·Cr（30～200 mg/Cr）或排除率在20～200μg/min這一范圍內(nèi)即為微量白蛋白尿[1]。尿微量白蛋白不僅對(duì)糖尿病、腎病的早期診斷、治療和預(yù)后具有重要意義，而且在高血壓、心血管疾病、腎小球疾病等所致的腎損傷中具有舉足輕重的作用[1]。

尿微量白蛋白用磺基水楊酸法、加熱乙酸法及試帶法基本不能查出[2]。故國內(nèi)外多采用免疫化學(xué)技術(shù)進(jìn)行測(cè)定。本試驗(yàn)采用免疫比濁法測(cè)定尿微量白蛋白，檢出限為0～200mg/L，批內(nèi)CV為0.55%，平均CV為1.18%，平均回收率為101.9%，與文獻(xiàn)[3]報(bào)道的檢出限10～160mg/L，批內(nèi)CV6.3%，批間CV 6.47%，平均回收率96.2%比較，結(jié)果較為理想，該試驗(yàn)方法有良好的精密度和準(zhǔn)確性。

干擾試驗(yàn)結(jié)果表明，血紅蛋白和膽紅素均會(huì)對(duì)尿微量白蛋白的測(cè)定產(chǎn)生負(fù)干擾，并且干擾物濃度越高，負(fù)干擾率也越大。從血紅蛋白干擾試驗(yàn)結(jié)果分析，當(dāng)血紅蛋白濃度在0.61 g/L以下時(shí)，對(duì)尿微量白蛋白的測(cè)定影響可以忽略（干擾率<-2.60%）；當(dāng)血紅蛋白濃度超過2.59 g/L時(shí)，干擾率高達(dá)-15.61%，這時(shí)測(cè)定的尿微量白蛋白結(jié)果是不可以接受的，臨床上測(cè)定無意義。膽紅素干擾試驗(yàn)表明，膽紅素濃度<1.03μmol/L時(shí)，對(duì)尿微量白蛋白的測(cè)定影響較小（干擾率<-1.99%），可以忽略；膽紅素濃度上升到5.18μmol/L時(shí)，干擾率為-7.19%，對(duì)尿微量白蛋白的測(cè)定影響較大；膽紅素濃度達(dá)12.97μmol/L時(shí)，干擾率高達(dá)-14.44%，這時(shí)測(cè)定的尿微量白蛋白結(jié)果不可以接受，臨床上測(cè)定無意義。

由于本試驗(yàn)檢出限制為0～200mg/L，測(cè)定前可先將標(biāo)本離心，取上清液做蛋白定性試驗(yàn)，若陰性或弱陽性可直接測(cè)定尿微量白蛋白，若陽性以上需以生理鹽水適當(dāng)稀釋后測(cè)定，以免造成尿微量白蛋白試劑不必要的浪費(fèi)。

關(guān)于尿微量白蛋白測(cè)定結(jié)果的表示現(xiàn)在尚無統(tǒng)一單位。目前文獻(xiàn)所采用的表示方法有兩種：一是對(duì)定時(shí)尿樣品的測(cè)定結(jié)果根據(jù)分泌的蛋白以μg/min表示；二是對(duì)不定時(shí)尿樣品常用尿微量白蛋白/尿肌酐表示。

總之，應(yīng)用免疫比濁法測(cè)定尿微量白蛋白準(zhǔn)確性高、精密度好，適于常規(guī)實(shí)驗(yàn)室采用。

[1]齊志宏，劉振元.尿微量白蛋白測(cè)定的臨床意義[J].現(xiàn)代診斷與治療，1999,10（6）：351-352.

[2]寇麗筠.臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1997.

[3]馮葛苓，王兆成，劉晨梅.免疫濁度終點(diǎn)法檢測(cè)尿微量白蛋白[J].河北醫(yī)藥，1999（4）：295-297.■