豬弓形蟲病的血清學(xué)檢測

顧冬花 （青海省大通縣畜牧獸醫(yī)站 810100） 李涵林 （青海省大通縣農(nóng)牧扶貧開發(fā)局）

應(yīng)用ELISA方法對(duì)采自青海省4家規(guī)模場的200份豬血清進(jìn)行豬弓形蟲病的檢測，檢測結(jié)果為1場仔豬陽性1份；4場母豬陽性1份；2場、3場檢測結(jié)果全部為陰性；200份檢測樣品，其中子豬檢測90份，仔豬陽性率為1.1%；母豬檢測50份，母豬陽性率為2%；育肥豬檢測60份，陽性率為0。檢測結(jié)果表明1場仔豬和4場母豬存在豬弓形蟲病感染，該兩場需采取有效的治療和預(yù)防措施，防止該病的傳播擴(kuò)散。

弓形蟲病是由剛地弓形蟲(Tox op lasmagondi)引起的一種人畜共患原蟲病，1908年法國學(xué)者Nicolle 和manceaux在北非剛第最早發(fā)現(xiàn)［1］。弓形蟲宿主范圍廣，常寄生于組織細(xì)胞內(nèi)，人和動(dòng)物一旦攝入被弓形蟲卵囊污染的食物或飲水就可感染發(fā)病。人的先天性弓形蟲病可使胎兒或嬰幼兒出現(xiàn)發(fā)育畸形、智力障礙、腦炎、腦膜炎甚至死亡等臨床癥狀，常成為免疫抑制及免疫缺陷人群的致死病因之一[2]。豬感染弓形蟲初期體溫升高，食欲減退，呼吸困難，感染母畜流產(chǎn)、死胎，其余則出現(xiàn)消化道和呼吸道癥狀，或隱性感染，給養(yǎng)豬業(yè)生產(chǎn)帶來了較大的經(jīng)濟(jì)損失。自從于恩庶等1955年在豬體內(nèi)分離到弓形蟲以后[3]，20世紀(jì)80年代，我國有多個(gè)省、市、自治區(qū)相繼報(bào)道了豬感染弓形蟲病的情況［4］。為了了解青海省規(guī)模場豬弓形蟲病的感染狀況，筆者對(duì)青海省的200份豬血清用ELISA試驗(yàn)進(jìn)行了豬弓形蟲感染的血清學(xué)檢測，現(xiàn)將檢測結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料

1.1 樣品來源 被檢血清200份，采自青海省4個(gè)規(guī)模場各50份，其中仔豬90份、母豬50份、育肥豬60份。

1.2 儀器 移液器、恒溫培養(yǎng)箱、洗板機(jī)、酶標(biāo)儀等。

1.3 試劑 標(biāo)準(zhǔn)抗原、陰陽性血清均購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。

2 方法

按照蘭州獸醫(yī)研究所提供的豬弓形蟲病ELISA診斷試驗(yàn)操作說明進(jìn)行。

3 步驟

（1）用微量移液器向每個(gè)孔內(nèi)加0.2ml0.05mPH9.6碳酸鹽緩沖液稀釋的抗原，置濕盒內(nèi)于4℃冰箱包被18～24h。然后取出包被好的抗原板甩去抗原，用含有0.05%吐溫-20pH7.2PBS(簡稱洗滌液)洗滌3次，甩去洗滌液，倒置在濾紙上輕拍使孔內(nèi)液體充分流出。（2）向孔內(nèi)分別加入用稀釋液稀釋好的被檢豬血清、陽性血清、陰性血清各0.2ml，置濕盒內(nèi)于37℃恒溫2h。（3）取出反應(yīng)板甩去血清，同上洗滌5次拍干。再加入稀釋好的酶標(biāo)記物兔抗豬或鼠抗豬IgG0.2ml，置濕盒內(nèi)于37℃恒溫2h。（4）同上甩去殘留的酶標(biāo)記物溶液，洗滌5次拍干。加入底物溶液0.2ml，置濕盒內(nèi)于37℃恒溫30min，拿出后立即向孔內(nèi)加入0.03ml終止液，終止反應(yīng)。

4 結(jié)果判定

4.1 肉眼觀察 在反應(yīng)終止后，于白色背景上用肉眼觀察各孔中所呈現(xiàn)的顏色反應(yīng)，并與陰性血清孔中呈現(xiàn)的顏色比較，凡試驗(yàn)血清孔中的顏色明顯深于陰性血清孔，成鮮明的棕黃色者為陽性反應(yīng)，以能產(chǎn)生陽性反應(yīng)的最高血清稀釋度為該份血清的終點(diǎn)滴度。無色或很淺淡黃色者為陰性反應(yīng)。

4.2 測定吸光值(OD值) 將反應(yīng)板放入酶標(biāo)儀讀取492nm吸收波的OD值，凡檢測血清的吸光值高于標(biāo)準(zhǔn)陰性血清吸光值2倍以上者即為陽性反應(yīng)。

5 結(jié)果

附表 各豬場豬弓形蟲病ELISA試驗(yàn)檢測結(jié)果 （%）

6 討論

（1）本次調(diào)查采用ELISA試驗(yàn)診斷方法，檢測4個(gè)規(guī)模場的豬血清樣品200份，仔豬90份，母豬50份，育肥豬60份；檢測結(jié)果仔豬陽性1份，陽性率1.1%，母豬陽性1份，陽性率2%；說明青海地區(qū)豬弓形蟲感染率不高，尤其2場和3場豬弓形蟲的感染率為0，感染主要發(fā)生在1場和4場，因此1場和4場應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)獸醫(yī)衛(wèi)生管理及疫病的防治工作。（2）應(yīng)用ELISA試驗(yàn)診斷方法判斷豬弓形蟲病具有高效、經(jīng)濟(jì)、快速、結(jié)果易于判斷等優(yōu)點(diǎn)，有一定的實(shí)用價(jià)值。（3）隨著養(yǎng)豬業(yè)的集約化和規(guī)?；l(fā)展，母豬繁殖障礙性疾病已成為豬場的主要疫病之一，目前，沒有預(yù)防豬弓形蟲病的疫苗，再加上飼養(yǎng)者對(duì)本病認(rèn)識(shí)不足，缺乏診斷防治技術(shù)，延誤治療時(shí)機(jī)，造成大批母豬流產(chǎn)、肉豬發(fā)病死亡，給養(yǎng)豬生產(chǎn)帶來嚴(yán)重的 經(jīng)濟(jì)損失，因此控制豬弓形蟲病的流行主要依靠有效的防治措施來進(jìn)行。（4）弓形蟲的整個(gè)發(fā)育過程需要兩個(gè)宿主，貓科動(dòng)物為終末宿主，是弓形蟲的重要傳播源，因此豬場禁止飼養(yǎng)貓科動(dòng)物，杜絕弓形蟲的傳播。另外病畜和帶蟲者的肉、內(nèi)臟、血液、滲出物和排泄物中均可能有弓形蟲，這些不僅可感染家畜，而且對(duì)人體健康危害極大。

7 建議

（1）禁止貓科動(dòng)物進(jìn)入豬圈舍，防止其糞便污染豬的飼料和飲水；（2）做好豬舍的防鼠滅鼠工作，禁止用屠宰廢物和廚房垃圾、生肉湯水喂豬，以防豬吃到患病和帶蟲動(dòng)物體內(nèi)的滋養(yǎng)體和包囊而感染；（3）對(duì)豬圈舍定期消毒，保持衛(wèi)生清潔，對(duì)流產(chǎn)胎兒及排泄物嚴(yán)格按無害化處理，對(duì)流產(chǎn)場地嚴(yán)格消毒；（4）加強(qiáng)生豬的宰前、宰后檢疫，防止污染肉上市，以保證人民群眾身體健康。（5）不同地區(qū)和環(huán)境弓形蟲感染率不同，即使同一種動(dòng)物也不盡相同。很多國家都有此病，且最高感染率達(dá)90%[5]。國內(nèi)不少地區(qū)豬的平均感染率為30%左右，有的高達(dá)80%以上[6]，而本次調(diào)查比馬利青等應(yīng)用間接血凝試驗(yàn)(IHA)檢測出青海省西寧地區(qū)豬弓形蟲的感染率為30.34%低[7]，說明近幾年規(guī)模場的獸醫(yī)衛(wèi)生管理工作和疫病防治工作取得了顯著成效，今后繼續(xù)加強(qiáng)這方面的調(diào)查工作，為養(yǎng)殖場防制和凈化本病提供科學(xué)依據(jù)。

[1]北京農(nóng)業(yè)大學(xué)主編.家畜寄生蟲學(xué)[m].北京: 農(nóng)業(yè)出版社, 1987.430-435.

[2]吳中光, 鄭葵陽.實(shí)用寄生蟲病學(xué)[m].南京: 江蘇科學(xué)技術(shù)出版社, 2003: 152-156.

[3]于恩庶.弓形蟲病學(xué)[m].福州: 福建科學(xué)技術(shù)出版社, 1992: 3-6.

[4]蔡寶祥, 鄭明球主編.豬病診斷和防治手冊[m].上海: 上?？茖W(xué)技術(shù)出版社, 1997.271-276.

[5]林明亮等, 牡丹江地區(qū)羊弓形蟲病血清學(xué)普查報(bào)告[J].黑龍江畜牧獸醫(yī), 1995, 7: 27-28.

[6]呂元聰.廣西西南部分地區(qū)畜禽弓形體病流行病學(xué)監(jiān)測[J].畜牧獸醫(yī)雜志, 1990, 3: 24-26.

[7]馬利清, 王弋平, 閻高峰.青海省西寧地區(qū)豬弓形體病的血清學(xué)調(diào)查[J].家畜生態(tài), 2003: 24(4): 6.