重組溶葡萄球菌酶對奶牛隱性乳房炎的治療試驗

關文怡 李桂伶 （北京農業(yè)職業(yè)學院 北京 房山 102442）

郭海龍 （北京市房山區(qū)農業(yè)局）

奶牛乳房炎是奶牛群體中常見的高發(fā)病癥之一，其直接影響著奶牛的泌乳量及乳汁的質量。在奶牛乳房炎病例中，隱性乳房炎更加普遍，占發(fā)病總數的75%～ 95%，由于患隱性乳房炎的牛乳房并不表現明顯的臨床癥狀，乳汁肉眼觀察也很難發(fā)現明顯的異常，因此，奶牛隱性乳房炎在臨床上不易發(fā)現，只能通過檢測才能確診，因而不能引起畜主的足夠重視，給奶牛生產帶來較大經濟損失。引起奶牛乳房炎的主要致病菌是葡萄球菌和鏈球菌，兩種細菌相加占的比例最高可達80%以上[1～3]，以往臨床用于治療葡萄球菌的藥物多為抗生素，而抗生素產生的耐藥性、藥殘等問題一直困擾奶業(yè)生產。溶葡萄球菌酶(Lysostaphin，LSP)是1964年Schindler等[2]首次從Staphylococcus simulans 培養(yǎng)基中發(fā)現的一種生物酶制劑，它與抗生素、化學藥物有著完全不同的殺菌機理。它可切斷葡萄球菌細胞壁肽聚糖中的五甘氨酸肽鍵橋結構，從而達到快速殺死細菌的目的，其獨特的殺菌機制不易誘導產生耐藥菌株[3]，特別適用于治療由甲氧西林耐藥性金黃色葡萄球菌(mRSA)引起的感染[4]。并且不會殘留在動物體內[5]，對機體正常組織無刺激、無致突變性[6－7]。黃青山等[8]研究了rLSP對奶牛乳房炎和子宮內膜炎常見病原菌的體外殺菌試驗，結果表明，rLSP對試驗分離的金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌具有良好抑殺效 果。因此，溶葡萄球菌酶可以做為一種新型、安全的治療奶牛乳房炎的藥物。本試驗在臨床采用重組溶葡萄球菌酶粉和頭孢噻肟唑治療奶牛隱性乳房炎，對其療效進行對比，試驗顯示，用重組溶葡萄球菌酶粉治療奶牛隱性乳房炎療效優(yōu)于頭孢噻肟唑。

1 材料和方法

1.1 試驗藥物與對照藥物

試驗藥物：重組溶葡萄球菌酶粉，規(guī)格為400U(0.4 mg)/支，10支/盒，昆山博青生物科技有限公司生產，生產批號20110623。對照藥物：注射用頭孢噻呋鈉，規(guī)格為0.5g/瓶×2瓶/盒。石家莊市光華藥業(yè)有限公司生產，生產批號20110906。

1.2 試驗動物

本試驗用牛選自北京某牛場24頭經BLT檢測為陽性的隱型乳房炎患牛。

1.3 試驗方法

1.3.1 患牛乳區(qū)分組 24頭患隱性乳房炎的受試牛在用BLT試劑檢測過程中共發(fā)現有32個患病乳區(qū)，將24頭牛分成4個組，每組6頭(8個患病乳區(qū))。

1.3.2 試驗過程 前3組為重組溶葡萄球菌酶粉試驗組，第1組為低劑量組以200U/乳區(qū)給藥，第2組為中劑量組以400U/乳區(qū)給藥，第3組為高劑量組以600U/乳區(qū)給藥，將重組溶葡萄球菌酶粉用注射用水稀釋至20ml患病乳區(qū)內注入，每天早、晚擠奶后各用藥1次，連用4d；第4組為藥物對照組，以注射用頭孢噻呋鈉0.25g/乳區(qū)給藥，將頭孢噻呋鈉粉用注射用水稀釋至20ml患病乳區(qū)內注入，每天早、晚擠奶后各用藥1次，連用4d。各組牛以耳標號做為標記。

1.3.3 評定方法 試驗通過測定用藥前及用藥后患牛的乳汁體細胞數(SCC)變化，評定3個劑量重組溶葡萄球菌酶粉和對照頭孢噻呋鈉粉對隱性乳房炎的療效。計數方法為：在各試驗組第一次用藥前的早上和4d用藥后的次日早上分別用滅菌試管采集治療乳區(qū)的乳樣，每份10ml，做好標記，用保溫冰盒保存運送至實驗室采用Nucleocounter SCC-100體細胞測定儀進行測定。若用藥乳區(qū)乳汁體細胞數(SCC少于50萬個/ml，表明病原菌幾乎全部消除，可視為治愈；若用藥乳區(qū)乳汁體細胞數(SCC)在50～100萬個/ml之間，表明主要病原菌消除，可視為有效；若用藥乳區(qū)乳汁體細胞數(SCC)仍多于100萬/ml，表明病原菌未被消除，既為無效。

2 結果

對24頭隱性乳房炎患病乳區(qū)用藥前后乳汁體細胞數(SCC)進行檢測結果如附表所示。

使用SPSS7.0軟件統(tǒng)計分析組內用藥前后和組間用藥后的乳汁體細胞數(SCC)數值(±SD)。

首次用藥時采奶檢測，各組奶牛隱性乳房炎乳區(qū)所泌乳汁的體細胞數差異不顯著(P>0.05)；用藥4d后，各組奶牛隱性乳房炎乳區(qū)所泌乳汁的體細胞數均較用藥前顯著減少(P<0.01)；200U劑量組與400U劑量組和600U劑量組之間用藥效果差異顯著(P<0.01)；200U、400U、600U劑量重組溶葡萄球菌治療組的體細胞數均顯著低于頭孢噻呋鈉粉治療組(P<0.05或 P<0.01)；3個劑量組與對照組之間均存在極顯著差異(P<0.01)。

附表 用藥前后乳汁體細胞檢測結果(SCC) (萬個/ml)

3 討論

（1）重組溶葡萄球菌酶對奶牛隱性乳房炎有明顯治療效果。與頭孢菌素類治療相比，重組溶葡萄球菌酶能夠顯著降低治療乳區(qū)泌乳的體細胞數，并能夠很好的解決抗生素治療牛乳房炎過程中出現的易產生耐藥菌株、牛奶中抗生素殘留過高、治療效果不穩(wěn)定易復發(fā)等問題，從而提高產奶量及牛奶的品質，最終達到減輕隱性乳房炎對養(yǎng)牛業(yè)造成的損失。（2）建議奶牛場在夏季的每月對全部泌乳牛進行一次隱性乳房炎監(jiān)測，既定期進行牛奶體細胞計數檢查，對陽性患牛采用重組溶葡萄球菌酶(400U以上劑量)治療4d，以減低隱性乳房炎向臨床型乳房炎的轉化，在隱性階段進行有效治療，從而收到較理想的效果。（3）由于重組溶葡萄球菌酶對葡萄球菌等革蘭氏陽性菌有效，但對大腸桿菌等革蘭氏陰性菌引起的乳房炎并不十分有效，建議奶牛場在使用重組溶葡萄球菌酶的同時可輔助使用其他桿菌肽或酶類制劑，起到協同作用。

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[5]湯仲明, 劉秀文, 宋海峰.生物技術藥物藥代動力學[m].北京: 化學工業(yè)出版社, 2004.

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