基于氣相色譜指紋圖譜技術(shù)的花生油質(zhì)量評價方法研究

駱 姍，張 培，徐月敏，劉曄瑋，邸多隆

（1.蘭州大學公共衛(wèi)生學院營養(yǎng)與食品衛(wèi)生學研究所，甘肅蘭州730000；2.中國科學院蘭州化學物理研究所，中科院西北特色植物資源化學重點實驗室，甘肅省天然藥物重點實驗室，甘肅蘭州730000）

基于氣相色譜指紋圖譜技術(shù)的花生油質(zhì)量評價方法研究

駱 姍1，2，張 培1，2，徐月敏1，2，劉曄瑋1，*，邸多隆2，*

（1.蘭州大學公共衛(wèi)生學院營養(yǎng)與食品衛(wèi)生學研究所，甘肅蘭州730000；2.中國科學院蘭州化學物理研究所，中科院西北特色植物資源化學重點實驗室，甘肅省天然藥物重點實驗室，甘肅蘭州730000）

借鑒中藥指紋圖譜的研究思路，建立花生油氣相色譜（GC）指紋圖譜。在優(yōu)選的色譜條件下，從16個樣品的色譜圖利用相似度軟件篩選出8個共有峰，建立了花生油指紋圖譜，通過方法學驗證，8個共有峰精密度、穩(wěn)定性的RSD分別小于3.1%和5.1%。同時，采用氣相色譜-質(zhì)譜技術(shù)（GC-MS）對8個共有峰進行化學歸屬，并利用歸一化法確定其相對含量。本文建立的方法簡單、靈敏，為鑒別花生油真?zhèn)魏驮u價花生油的品質(zhì)提供技術(shù)參考。

花生油，氣相色譜，氣相色譜-質(zhì)譜，指紋圖譜

食用植物油是我國居民脂肪攝入的主要來源，花生油以其獨特的香味和較高的營養(yǎng)價值，已經(jīng)成為我國三大食用油之一。研究表明，花生油中不飽和脂肪酸含量較高，平均在45%，僅次于橄欖油，高于大豆油、葵花籽油和菜籽油等[1]。此外，花生油中還含有白藜蘆醇等活性成分，對心血管有保護作用。由于在食用油市場上價格偏高，在經(jīng)濟利益的驅(qū)使下，不法商販以其他低價的食用油甚至非食用油摻入花生油中，嚴重的損害了人民群眾的經(jīng)濟利益和身體健康。

對于食用油的檢驗，常用的檢測指標主要有油脂的酸價、過氧化值和介電常數(shù)等[2]。常規(guī)的檢測方法有化學檢測法、物理檢測法、光譜法和色譜法等，這些方法都各有其優(yōu)缺點[3]。而氣相色譜法（GC）、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）已廣泛應用于食用油中油脂和揮發(fā)性成分的測定[4]。隨著現(xiàn)代儀器分析技術(shù)的發(fā)展，指紋圖譜技術(shù)已被廣泛的應用于食品成分分析的領(lǐng)域中，所建立的食品中一些成分的指紋圖譜對食品摻假和食品質(zhì)量控制都具有很大的意義[5]。本文利用氣相色譜建立花生油指紋圖譜，并采用氣相色譜-質(zhì)譜技術(shù)（GC-MS）對8個共有峰進行化學歸屬，利用歸一化法確定其相對含量，研究結(jié)果為花生油的評價和質(zhì)量控制提供了參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

本實驗所有的花生油樣品 均由超市購得，樣品信息見表1；甲醇、乙醚 利安隆博華醫(yī)藥化學有限公司，分析純；正己烷 天津市凱信化學工業(yè)有限公司，分析純；甲醇 煙臺市雙雙化工有限公司，分析純；氫氧化鉀 北京化工廠，分析純。

Agilent 7890A氣相色譜儀 HP-INNOWAX毛細管色譜柱（30m×0.35mm×0.25μm），美國Agilent公司（包括自動進樣器和Agilent Chemstation工作站）；中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)A版 國家藥典委員會。

表1 樣品信息Table 1 Information of samples

1.2 實驗方法

1.2.1 樣品前處理 參照文獻[6]。精密量取樣品0.5mL，置于50mL容量瓶中，加入5mL乙醚∶正己烷（V∶V=1∶1），搖勻，然后加入5mL無水甲醇，搖勻，再加入5mL 0.8mol/L KOH-甲醇溶液，搖動5min，加水至刻度，靜置分層，澄清后吸取上清液，待測。

1.2.2 色譜條件 HP-INNOWAX毛細管色譜柱（30m×0.35mm×0.25μm）；進樣口溫度：250℃；檢測器溫度：280℃；柱起始溫度：100℃，以5℃/min速率程序升溫至240℃，保持5min；分流比1∶10，載氣為氮氣（99.99%），流量3mL/min；進樣量1μL。

質(zhì)譜條件：離子源為EI源；離子源溫度：240℃，電子能量：70eV；四級桿溫度：150℃。

1.2.3 指紋圖譜建立 16個樣品按照1.2.1項樣品前處理方法和1.2.2項中色譜條件分別制備樣品和進樣分析，以16個樣品氣相色譜圖譜中各色譜峰出峰頻次，利用指紋圖譜相似度軟件篩選樣品的共有峰。選擇峰面積、保留時間適宜的6號峰為參比峰，計算共有峰相對保留時間tr（tr=tri/trs）和相對峰面積Ar（Ar=Ai/As）。

2 結(jié)果與討論

2.1 指紋圖譜建立和共有峰的確定

利用指紋圖譜相似度軟件篩選，得到8個共有峰，見圖1。8個共有峰相對保留時間tr（tr=tri/trs）和相對峰面積Ar（Ar=Ai/As）見表2、表3。

圖1 氣相色譜指紋圖譜Fig.1 GC-fingerprints chromatogram of peanut oil

表2 樣品8個共有峰相對保留時間Table 2 The relative retention time of common peaks of 8 samples

2.2 方法學評價

2.2.1 精密度實驗 取同一樣品油，按1.2.1項方法處理后，在1.2.2項中色譜條件下連續(xù)進樣3次，分別考察色譜峰的相對保留時間、相對峰面積。8個共有峰相對保留時間的RSD均小于1%；8個共有峰相對峰面積的RSD小于3.1%。

2.2.2 穩(wěn)定性實驗 取同一樣品油，按1.2.1項方法處理制備供試品溶液，分別在0、2、4、8、16、24h在1.2.2項中色譜條件下進樣分析，考察色譜峰的相對保留時間、相對峰面積，結(jié)果8個共有峰在0、2、4、8、16、24h的相對保留時間的RSD（n=6）均不超過1.9%；8個共有峰在0、2、4、8h相對峰面積的RSD均不超過5.1%。8個共有峰在16h時的相對峰面積的RSD大于10%，表明樣品溶液在8h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.3 重現(xiàn)性實驗 取同一樣品油，分為3份，按1.2.1項方法處理制備供試品溶液3份，考察色譜峰的相對保留時間、相對峰面積。相對保留時間重現(xiàn)性實驗結(jié)果的RSD均小于1%，相對峰面積重現(xiàn)性實驗結(jié)果的RSD均小于4.4%。

表3 樣品8個共有峰相對峰面積Table 3 The relative peak area of common peaks of 8 samples

2.3 共有峰化學歸屬

按照1.2.2項質(zhì)譜條件對8個共有峰進行化學歸屬，總離子色譜圖見圖2，共有峰化學成分見表4。

圖2 樣品總離子流圖Fig.2 Total ion[1]current（TIC）chromatography

表4 8個共有峰化學成分Table 4 Chemical constituents of 8 common peaks

根據(jù)表4中8個共有峰化學歸屬，按照1.2.1項、1.2.2項對16個花生油樣品進行測定，按照歸一化法計算8個共有峰相對含量，結(jié)果見表5。

表5 8個共有峰相對含量（%）Table 5 The relative content of common peaks of 8 samples（%）

由表5可知，8個共有峰平均含量和范圍分別為：亞油酸48.5%（44.3%～50.3%）、硬脂酸39.4%（35.9%～ 40.9%）、10-十九碳酸3.9%（2.6%～6.6%）、花生酸4.1%（2.8%～7.1%）、11-二十碳烯酸4.6%（3.40%～ 4.6%）、芥酸1.33%（0.9%～2.8%）、2，6，10，15，19，23-六甲基-2，6，10，14，18，22-廿四碳六烯2.5%（2.2%～ 2.7%）、二十六烷酸0.2%（0.2%～0.4%）。其中的不飽和脂肪酸主要為棕櫚油酸，亞油酸和芥酸，而亞油酸峰平均含量48.5%，最為突出。硬脂酸平均含量也較高，達到39.4%，現(xiàn)有研究已經(jīng)證實，硬脂酸對于膽固醇無上升作用。硬脂酸在身體內(nèi)經(jīng)不飽和反應會迅速轉(zhuǎn)換為油酸[7]。

由于花生油原料產(chǎn)地不同、加工工藝的差異，使其化學成分有一定的差別。但是通過8個共有峰種類的篩選及其相對含量平均值和含量范圍等信息，為鑒別花生油真?zhèn)魏驮u價花生油的品質(zhì)提供技術(shù)參考。

3 結(jié)論

本研究借鑒了中藥指紋圖譜的概念，利用氣相色譜指紋圖譜技術(shù)，建立了花生油指紋圖譜。利用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)從中篩選到8個共有峰，經(jīng)方法學評價表明所建立的指紋圖譜穩(wěn)定性、重現(xiàn)性良好，可為鑒別花生油真?zhèn)魏驮u價花生油的品質(zhì)提供技術(shù)參考。

[1]徐貴發(fā)，郭海峰，朱鳳，等.花生油對中老年人血脂水平的影響[J].營養(yǎng)學報，2004，26（4）：249-252.

[2]鄭振佳，趙先恩，遲炳海，等.花生油中游離脂肪酸的HPLCFLD分析[J].分析測試室，2011，30（4）：23-27.

[3]黃偉雄，羅建波，江片碧.花生油脂肪酸特征模式的研究[J].中國公共衛(wèi)生，2001，17（10）：889.

[4]李高陽，丁霄霖.亞麻籽油中脂肪酸成分的GC-MS分析[J].食品與機械，2005，21（5）：30-32.

[5]姚云平，李昌模，劉慧琳.指紋圖譜技術(shù)在植物油鑒定和摻假中的應用[J].中國油脂，2012，37（7）：51-54.

[6]吳惠勤，黃曉蘭，陳江韓，等.SPME/GC-MS鑒別地溝油新方法[J].分析測試學報，2012，13（1）：1-6.

[7]唐傳核，徐建祥，彭志英.脂肪酸營養(yǎng)與功能的最近研究[J].中國油脂，2000，25（6）：20-23.

Fingerprint analysis of peanut oil based on gas chromatography

LUO Shan1，2，ZHANG Pei1，2，XU Yue-min1，2，LIU Ye-wei1，*，DI Duo-long2，*
（1.Institute of Nutrition and Food Hygiene，of Public Health，Lanzhou University，Lanzhou 730000，China. 2.Key Laboratory of Chemistry of Northwestern Plant Resources and Key Laboratory for Natural Medicine of Gansu Province，Lanzhou Institute of Chemical Physics，Chinese Academy of Sciences，Lanzhou 730000，China）

Learned from fingerprinting research ideas，built peanut oil by gas chromatography（GC）fingerprints. In the preferred chromatographic conditions，chromatograms 16 samples screened used software similarity eight common peaks established peanut oil fingerprinting method validation，8 total peak precision，RSD of the stability were less than 3.1%and 5.1%.Meanwhile，the used of gas chromatography-mass spectrometry（GCMS）for a total of eight peaks chemical vest，and determine its relative content of the used of normalization method.The established method was simple，sensitive，and provided technical reference for the identification and evaluation of the quality of peanut oil，peanut oil authenticity.

peanut oil；GC；GC-MS；fingerprint

TS207.3

A

1002-0306（2014）08-0058-04

10.13386/j.issn1002-0306.2014.08.003

2013－10－23 *通訊聯(lián)系人

駱姍（1988－），女，在讀碩士研究生，研究方向：食品污染物檢測新方法和新技術(shù)。

中科院“百人計劃”項目；蘭州市城關(guān)區(qū)科技計劃項目（2012-3-5）。