缺氧誘導(dǎo)因子2α在宮頸鱗癌組織中的表達及其意義

周紅艷郭艷風

缺氧誘導(dǎo)因子2α在宮頸鱗癌組織中的表達及其意義

周紅艷①郭艷風①

目的：探討缺氧誘導(dǎo)因子2α（HIF-2α）在宮頸鱗癌組織中的表達及其意義。方法：通過原位雜交（ISH）技術(shù)檢測102例宮頸鱗癌組織、66例CIN組織和40例正常宮頸組織中HIF-2α mRNA的表達情況及其與宮頸鱗癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果：HIF-2α mRNA在宮頸鱗癌組織中的陽性表達率均顯著高于正常宮頸組織和CIN組織（P＜0.05），并且HIF-2α mRNA在宮頸鱗癌組織中的陽性表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（χ2=6.766，P=0.009）和臨床分期（χ2=11.639，P=0.001）相關(guān)，而與年齡、病理組織學分化程度、浸潤深度無關(guān)（P＞0.05）。結(jié)論：HIF-2α mRNA在宮頸鱗癌組織中表達上調(diào)，可能與宮頸鱗癌的發(fā)生和演進有關(guān)。

缺氧誘導(dǎo)因子2α； 宮頸鱗癌； 原位雜交

在全球范圍內(nèi)，宮頸癌是女性第3大常見惡性腫瘤，嚴重威脅著婦女的健康和生命[1]。宮頸鱗癌是宮頸癌最常見的病理類型，本研究通過原位雜交（in situ hybridization，ISH）技術(shù)檢測宮頸鱗癌組織、CIN組織和正常宮頸組織中缺氧誘導(dǎo)因子2α（hypoxia-inducible factor 2α，HIF-2α）mRNA的表達情況及其與宮頸鱗癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系，旨在探討HIF-2α在宮頸鱗癌發(fā)生與演進中的作用。

1 材料與方法

1.1 一般資料 收集2006年3月-2012年3月在本院住院患者的宮頸組織蠟塊208例，術(shù)前患者均未接受放療及化療?；颊吣挲g在34～65歲，平均（45.8±3.5）歲。其中包括宮頸鱗癌102例、CIN組66例、正常宮頸組織40例。

1.2 臨床病理資料 宮頸組織蠟塊共208例，術(shù)前患者均未接受放療及化療。（1）宮頸鱗癌組：102例，術(shù)前均經(jīng)宮頸活組織病理證實。其中淺肌層浸潤癌42例，深肌層及以上浸潤癌60例；伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的18例；術(shù)后病理組織學分級（按照WHO分類標準進行組織學分級）：其中高分化32例，中分化44例、低分化26例；臨床分期，Ⅰ期56例，Ⅱ期21例，Ⅲ期17例，Ⅳ期8例；（2）CIN組：66例，其中CIN-Ⅰ級12例，CIN-Ⅱ級24例，CIN-Ⅲ級30例；（3）正常宮頸組織組：同期住院因子宮良性疾病行子宮全切術(shù)，術(shù)后病理證實宮頸正常者40例。

1.3 主要試劑及試劑盒 DAB顯色劑購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，人原位雜交檢測試劑盒（MK2210h）購自武漢博士德生物工程有限公司，5’端地高辛標記的HIF-2α寡核苷酸探針序列：5’-GAAGC TGACC AGCAG ATGGA CAACT TGTAC CTGAA-3’，由武漢博士德生物工程有限公司合成。

1.4 ISH染色 石蠟切片經(jīng)新鮮配置的二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水后，用新鮮配制的3% H2O2室溫處理5～10 min，以滅活內(nèi)源性過氧化物酶，切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶，37 ℃消化20 min，消化標本DNA結(jié)合蛋白，1%多聚甲醛/0.1 M PBS （pH7.2～7.6），室溫固定10 min，每張切片加20 μL不含探針的預(yù)雜交液，恒溫箱40 ℃ 4 h，每張切片加20 μL含探針的雜交液，恒溫箱40 ℃雜交過夜，雜交后洗滌，滴加封閉液，滴加生物素化鼠抗地高辛，滴加SABC，滴加生物素化過氧化物酶，PBS清洗，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。

1.5 ISH結(jié)果判定 HIF-2α陽性信號為棕黃色顆粒，定位于細胞質(zhì)；參照文獻[2]，原位雜交的陽性計算方法為：于高倍鏡下（×400）隨即選取10個視野（每個視野觀察細胞數(shù)不少于100個），陽性細胞數(shù)＜30%、 30%～70%、＞70%分別記1、2、3分。陽性著色強度：雜交信號強度可分為弱（+）、中（++）、強（+++）三級，分別記1、2、3分：1分為弱陽性（+）：細胞質(zhì)內(nèi)可見淺黃色顆粒，明顯高于背景底色。2分為陽性（++）：細胞質(zhì)內(nèi)見黃色顆粒。3分為強陽性（+++）：細胞質(zhì)內(nèi)有大量棕黃色顆粒。上述2種記分相乘，＜2分者為陰性，≥2分者為陽性。

1.6 統(tǒng)計學處理 應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行處理，兩樣本率的比較采用四格表資料的 χ2檢驗，多樣本率的比較采用行列表資料的 χ2檢驗；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 正常宮頸、CIN及宮頸鱗癌組織中HIF-2α mRNA的表達 HIF-2α mRNA在正常宮頸組織、CIN和宮頸鱗癌組織中陽性率分別為0、22.7% （15/66）、68.6%（70/102），三組比較差異有統(tǒng)計學意義（ χ2=68.005，P＜0.05），且兩兩比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。HIF-2α mRNA在正常宮頸、CIN和宮頸鱗癌組織中的表達見圖1～圖3。

圖1 HIF-2α mRNA在正常宮頸組織的表達（ISH×400）

圖2 HIF-2α mRNA在CIN組織的表達（ISH×400）

圖3 HIF-2α mRNA在宮頸鱗癌組織中的表達（ISH×400）

2.2 HIF-2α mRNA的陽性表達與宮頸鱗癌臨床病理特征的關(guān)系 伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸鱗癌組織中HIF-2αmRNA的陽性表達率較高（P＜0.05）；宮頸鱗癌的臨床分期越晚，HIF-2αmRNA的陽性表達率越高（P＜0.05）。HIF-2α mRNA在宮頸鱗癌組織中的陽性表達率與年齡、病理組織學分化程度和浸潤深度無關(guān)（P＞0.05），見表1。

3 討論

HIF是廣泛存在于人和哺乳動物體內(nèi)的一種轉(zhuǎn)錄因子，目前發(fā)現(xiàn)的缺氧誘導(dǎo)因子成員有HIF-1、HIF-2、HIF-3 3種。HIF-2是由HIF-2α和HIF-1β兩個亞基構(gòu)成的異源二聚體蛋白質(zhì)復(fù)合物，HIF-2α 和HIF-1β均為堿性螺旋-環(huán)-螺旋-PAS（bHLHPAS）轉(zhuǎn)錄因子超家族成員。

研究已證實，HIF-2α在多種惡性腫瘤中高表達，如結(jié)直腸癌、胃癌、非小細胞肺癌、膀胱移行細胞癌、腎細胞癌、乳腺癌、口腔鱗狀細胞癌等，由此推測HIF-2α可能為一個癌基因[3-9]。本研究顯示，正常宮頸組織中與CIN組織中HIF-2α mRNA的陽性表達率兩組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），CIN組織中與宮頸鱗癌組織中HIF-2α mRNA陽性表達率兩組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），說明HIF-2α的表達可能在宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要作用。Mandriota等[10]研究發(fā)現(xiàn)，在腎透明細胞癌中檢測到較高的HIF-2α表達，并且表達的增加與進展期腫瘤的損害程度有關(guān)。Turner等[11]在研究HIF-2α與腎癌血管化和VHL基因突變的關(guān)系中發(fā)現(xiàn)，17例透明細胞癌中有11例HIF-2α mRNA表達水平增高，與相應(yīng)的正常組織相比有顯著差異，以上結(jié)果均表明HIF-2α表達的增高與腎透明細胞癌有顯著相關(guān)性，與本研究結(jié)果相似。

表1 HIF-2α mRNA的陽性表達與宮頸鱗癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

此外，本研究還分析了HIF-2α mRNA的表達與患者臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度等主要臨床病理學特征間的關(guān)系，結(jié)果顯示 HIF-2α mRNA的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期相關(guān)（P＜0.05），而與年齡、病理組織學分化程度、浸潤深度無關(guān)（P＞0.05），由這一結(jié)果進一步推測HIF-2α的高表達可能與宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。用RNAi技術(shù)干擾乳腺癌細胞中HIF-2α的表達后，癌細胞凋亡顯著增多[12]。Liu 等[13]用RNAi技術(shù)干擾NSCLC（非小細胞肺癌）癌細胞中HIF-2α的表達，可以明顯抑制癌細胞的侵襲、粘附和轉(zhuǎn)移，推測可能跟HIF-2α上調(diào)趨化因子受體4的表達有關(guān)。在乳腺癌中，HIF-2α高表達與腫瘤大小、遠處轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后有關(guān)，HIF-2α表達越高，越易發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移，且HIF-2α表達與MMP-2的表達正相關(guān)[14]。Petrella等[15]在轉(zhuǎn)移性腎癌中發(fā)現(xiàn)HIF-2α可以誘導(dǎo)MT1-MMP的表達。MMP有明顯的促腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的作用，因此HIF-2α有增強腫瘤細胞侵襲和轉(zhuǎn)移的作用。在甲狀腺乳頭狀癌中，HIF-2α表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，而與年齡、腫瘤大小、TNM分期無關(guān)[16]。此結(jié)果與上述研究結(jié)果相似，提示HIF-2α可能在宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要的作用，參與了宮頸癌的侵襲、轉(zhuǎn)移等過程，并可能成為宮頸鱗癌一個新的分子治療靶點。

綜上所述，HIF-2α的高表達可能與宮頸鱗癌的發(fā)生和演進存在密切的關(guān)系；檢測HIF-2α的表達水平，可對宮頸鱗癌進行早期診斷和治療觀察，但其在宮頸鱗癌中的作用尚需進一步探討，這對完善宮頸癌的致癌機制及指導(dǎo)治療具有重要意義。

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Expression and Significance of HIF-2α in Cervical Squamous Cell Carcinoma

/ZHOU Hong-yan，GUO Yan-feng.//Medical Innovation of China，2014，11（21）：054-057

Objective：To explore the expression of HIF-2α mRNA in cervical squamous cell carcinoma and its significance.Method：The expression of HIF-2α mRNA in 102 cases of cervical squamous cell carcinoma， 66 cases of CIN and 40 cases of normal cervical tissue was detected by in situ hybridization（ISH）. The significance of the expression of HIF-2α mRNA in cervical squamous cell carcinoma and the relationships between the positive expression of HIF-2α mRNA and clinicopathological parameters of cervical squamous cell carcinoma were analyzed.Result：The positive expression rate of HIF-2α mRNA in cervical squamous cell carcinoma was significantly higher than that in normal cervical tissue and CIN（P＜0.05）. And HIF-2α mRNA positive expression in cervical squamous carcinoma tissues and lymph node metastasis （ χ2=6.766，P=0.009） and clinical staging （ χ2=11.639，P=0.001）. However， the expression of HIF-2α mRNA was not related to age， histological grade， and depth of invasion （P＞0.05）.Conclusion：The upregulated expression of HIF-2α mRNA may be related with the occurrence and progression of the cervical squamous cells.

Hypoxia-inducible factor 2α； Cervical squamous cell carcinoma； Insitu hybridization

10.3969/j.issn.1674-4985.2014.21.017

2014-05-19） （本文編輯：蔡元元）

①河南省新鄉(xiāng)市第一人民醫(yī)院 河南 新鄉(xiāng) 453000

周紅艷

First-author’s address：The First People’s Hospital of Xinxiang，Xinxiang 453000，China