婦康洗劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

談靜，方芳，曾倩，袁強(qiáng)華

·炮制制劑·

婦康洗劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

談靜1，方芳2，曾倩1，袁強(qiáng)華2

目的：建立婦康洗劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用TLC 法對處方中苦參、紫草、甘草、烏梅進(jìn)行定性鑒別；采用HPLC法以乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺調(diào)pH至7.5）(12:5:83)為流動相；在檢測波長220 nm 處測定氧化苦參堿和苦參堿的含量。結(jié)果：TLC鑒別分離度良好，專屬性強(qiáng)。氧化苦參堿在0.1946～2.9190 μg，相關(guān)系數(shù)r為0.9999，線性關(guān)系良好；苦參堿在0.1134～1.7010 μg，相關(guān)系數(shù)為0.9999，線性關(guān)系良好。平均加樣回收率分別為99.63%（RSD為2.19%）、99.12%（RSD為1.33%）。結(jié)論：該方法簡便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可有效控制婦康洗劑的質(zhì)量。

]婦康洗劑；薄層鑒別；高效液相色譜；氧化苦參堿；苦參堿；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

婦康洗劑是由大菟絲子、烏梅、苦參、紫草、生甘草五種藥味組成的中藥復(fù)方制劑，來源于成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床經(jīng)方，主要用于老年性陰道炎。為了控制產(chǎn)品質(zhì)量，確保臨床用藥的有效性和安全性，我們建立了苦參、紫草、甘草三味藥的薄層色譜鑒別法；同時采用高效液相色譜法對本品中苦參的有效成分苦參堿和氧化苦參堿進(jìn)行了含量測定，建立的定性、定量方法，均簡便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)，可有效地控制本品的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

HP1100型高效液相色譜儀(美國惠普公司)，惠普化學(xué)工作站，DAD檢測器；BP211D電子分析天平(十萬分之一,德國Satoriüs公司)。樣品和試藥均由成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科提供。對照藥材、對照品由中國藥品生物制品檢定所提供?？鄥A對照品（批號：110805-200508）；氧化苦參堿對照品（批號：110780-200506）；熊果酸對照品（批號：110742-200516）；左旋紫草素對照品（批號：110769-200506）；紫草（新疆紫草）對照藥材（批號：121430-200802）；苦參對照藥材（批號：121019-200705）；甘草對照藥材（批號：120904-200914）；烏梅對照藥材（批號：121208-200903）；硅膠G（青島海洋化工有限公司制造）；乙腈、甲醇為色譜純；水為重蒸餾水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 鑒別

2.1.1 苦參薄層鑒別[1～2]取本品10mL，加濃氨試液調(diào)pH值至10，加三氯甲烷振搖提取兩次，每次20mL，分取三氯甲烷液，水浴濃縮至1mL，作為供試品溶液。另取苦參堿對照品，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，作為對照品溶液。再取苦參對照藥材0.5 g，加濃氨試液1 mL、三氯甲烷25 mL，放置過夜，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄? mL使溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法（2010年版《中國藥典》一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對照品溶液、對照藥材溶液各10 μL，以條帶狀分別點(diǎn)于同一用2 %氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇（5:0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，依次噴以碘化鉍鉀試液和亞硝酸鈉乙醇試液。供試品溶液色譜中，在與對照品、對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙色斑點(diǎn)。

圖1 苦參TLC色譜圖

2.1.2 紫草薄層鑒別 取本品5 mL，加石油醚(60～90℃）振搖提取兩次，每次10 mL，分取石油醚液，揮至1mL，作為供試品溶液。另取左旋紫草素對照品，加石油醚(60～90℃)制成每1mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。再取紫草對照藥材0.5 g，加石油醚（60～90℃）20 mL，超聲20分鐘，濾過，揮至1 mL，作為對照藥材溶液。

照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5：5：0.5：0.1）為展開劑，展開，取出，晾干。供試品溶液色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紫紅色斑點(diǎn)。

圖2 紫草TLC色譜圖

2.1.3 甘草薄層鑒別 取本品20 mL，加水飽和正丁醇振搖提取三次，每次20 mL，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水溶液洗滌兩次，每次10 mL，棄去水液，正丁醇液蒸干，加甲醇2 mL使殘?jiān)芙猓鳛楣┰嚻啡芤?。另取甘草對照藥?g，加入40 mL乙醚，加熱回流1小時，濾過，棄去乙醚液，藥渣加30 mL甲醇，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用水洗滌3次，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μL，以條帶狀分別點(diǎn)于同一用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15：1：1：2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

圖3 甘草TLC色譜圖

2.1.4 烏梅的薄層鑒別 取本品100 mL，濃縮至30 mL，加乙醇90 mL，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，加乙醚振搖提取兩次，每次20 mL，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取熊果酸對照品，加無水乙醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（2010年版《中國藥典》一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對照品溶液各20μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（20：5：8：0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙 醇 溶 液 ，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品溶液色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

圖4 烏梅TLC色譜圖

2.2 含量測定[3～11]

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Green pHlex C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺調(diào)pH至7.5）(12:5:83)為流動相；流速：1 mL．min-1；檢測波長為220 nm；柱溫：30℃。理論板數(shù)按氧化苦參堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.2.2 對照品溶液制備 精密稱取干燥至恒重的苦參堿對照品22.68 mg和氧化苦參堿對照品38.92 mg，置50 mL量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得混合對照品溶液（苦參堿對照品濃度：0.4536mg．mL-1、氧化苦參堿對照品濃度：0.7784 mg．mL-1）。

2.2.3 供試品溶液制備 精密量取樣品2 mL，置25 mL量瓶中，加乙醇23 mL，超聲處理10 min，放至室溫，加乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 缺苦參的陰性供試品溶液制備 按處方比例稱取除苦參外其余飲片，按制劑工藝制備陰性樣品，在按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備陰性供試品溶液。

2.2.5 線性范圍考察 分別精密吸取“2.2.2”項(xiàng)下混合對照品溶液1，2，3，5，10，15 mL，置20 mL容量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。分別吸上述混合對照品溶液各5 μL，注入色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積（Y）對進(jìn)樣量（X）進(jìn)行線性回歸，得氧化苦參堿回歸方程：Y=839.89X+2.0896(r=0.9999), 表明氧化苦參堿在0.1946～2.9190 μg，與其峰面積呈良好的線性關(guān)系；苦參堿回歸方程：Y=1153.5X+0.597（r=0.9999），表明苦參堿在0.1134～1.7010 μg，與其峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.2.6 專屬性試驗(yàn) 精密吸取混合對照品溶液、供試品溶液和陰性供試品溶液各5 μL，注入色譜儀，按上述色譜條件測定，結(jié)果供試品中氧化苦參堿、苦參堿色譜峰與相鄰色譜峰分離度大于1.5，陰性無干擾。見圖4。

圖5 氧化苦參堿和苦參堿HPLC色譜圖

2.2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取氧化苦參堿和苦參堿混合對照品溶液（氧化苦參堿對照品濃度：0.3892 mg．mL-1，苦參堿對照品濃度：0.2268mg．mL-1）5 μL，按上述色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，結(jié)果氧化苦參堿和苦參堿峰面積的RSD分別為0.60%和0.62%，表明精密度良好。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品6份，按供試品溶液制備方法制備，分別進(jìn)樣5 μL，測定峰面積，計(jì)算氧化苦參堿和苦參堿的含量分別為0.5067，1.644 mg．mL-1，RSD分別為1.11%，1.18%。表明重現(xiàn)性良好。

2.2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液5 μl，于0，2，4，8，12，18 h分別進(jìn)樣，記錄峰面積，結(jié)果峰面積RSD分別為1.47%，0.61%。表明供試品在18 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.10 加樣回收試驗(yàn) 精密吸取已知含量的樣品溶液（氧化苦參堿：0.5067 mg/mL，苦參堿：1.644 mg．mL-1）1mL，共6份，分別精密加入苦參堿和氧化苦參堿的混合對照品溶液（苦參堿對照品：1.588 mg．mL-1，氧化苦參堿對照品：0.5010 mg．mL-1）1mL，置25 mL容量瓶中，按供試品溶液制備方法制備，測定氧化苦參堿和苦參堿的含量，結(jié)果見表1、2。

表1 氧化苦參堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

表2 苦參堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明，氧 化 苦 參 堿 和 苦 參 堿 的 平均回收率分別為99.63%、98.34%，回收率在95-105%之間，且RSD(%)均小于3.0%，表明本法加樣回收率良好。

2.2.11 樣品含量測定 精密量取三批中試樣品各2 mL，每批3份，按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液5 μL進(jìn)樣，按上述色譜條件測定，計(jì)算氧化苦參堿和苦參堿總含量，結(jié)果三批樣品含氧化苦參堿和苦參堿的總量分別為2.026，

2.050，2.077 mg．mL-1，平均值為2.051 mg．mL-1。

3 討論

3.1 在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立過程中，按照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅠV“洗劑”項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定，對本品三批樣品的裝量差異、相對密度、pH、微生物限度、重金屬、砷鹽等進(jìn)行了檢查，結(jié)果均符合規(guī)定。

3.2 建立薄層鑒別方法時，對苦參的薄層鑒別分別考察了展開系統(tǒng)Ⅰ：甲苯-丙酮-乙醇-濃氨（20：20：3：1）、展開系統(tǒng)Ⅱ：甲苯-乙酸乙酯-丙酮-濃氨（3：3：1：0.1）、展開系統(tǒng)Ⅲ：三氯甲烷-甲醇（5：0.2）、展開系統(tǒng)Ⅳ：三氯甲烷-甲醇-濃氨（5：0.6：0.3）10℃以下放置的下層溶液，展開系統(tǒng)Ⅰ和Ⅱ分離效果均較好，但系統(tǒng)Ⅰ的Rf值較大，Ⅱ的Rf值較小，展開系統(tǒng)Ⅳ樣品的相溶性較差，展開時溶劑前沿不平。展開系統(tǒng)Ⅲ分離效果較好，Rf值適中，需注意溫濕度的影響，否則邊緣效應(yīng)明顯。此外烏梅的薄層鑒別，因制樣取樣量和點(diǎn)樣量均較大，圖譜的背景通道干擾較明顯，因此烏梅的鑒別方法還有待改進(jìn)。

3.3含量測定方法篩選時考察了色譜柱、流動相種類、比例、柱溫：比較了依利特ODS C18（150×4.6 mm，5 μm）柱，Welchrom C18（250×4.6 mm，5 μm）柱，Diamonsil C18（250×4.6 mm，5 μm）柱，Green pHlex C18（250×4.6 mm，5 μm）柱，采用乙腈-0.1%磷酸溶液、乙腈-0.1%磷酸溶液（三乙胺調(diào)pH=7.5）、乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺調(diào)pH=7.5）等不同種類和比例的流動相進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明Green pHlex C18（250×4.6 mm，5 μm）柱用乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺調(diào)pH=7.5）分離效果較好。同時比較了乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺調(diào)pH=7.5）不同比例(10:7:83、11:7:83、12:6:82、12:5:83)，比較了柱溫30℃、25℃、20℃，比較流速0.9 mL．min-1、1.0 mL．min-1、1.1 mL．min-1，發(fā)現(xiàn)乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺調(diào)pH=7.5）(12:5:83)，1.0 mL．min-1，柱溫30℃分離效果最好，故采用此條件進(jìn)行洗脫。

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（責(zé)任編輯：胡慧玲）

The quality standards research of Fukang lotion

/TAN Jing1, FANG Fang2, ZENG Qian1, YUAN Qiang-hua2//(1.AffliatedHospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610072, Sichuan;2.Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610075, Sichuan)

Objective:To establish the quality standards of Fukang lotion. Method:TLC was used to identify Kushen, Zicao, Gancao and Wumei in Fukang lotion. The content of oxymatrine and matrine were determined by HPLC with a mobile phase of acetonitrile-Methanol-0.1% phosphoric acid (12:5:83). And Triethylamine was used to maintain pH value at 7.5.The detection wave length was set at 220 nm. Result:The identifcation by TLC was distinct and highly specifc. The linear ranges of oxymatrine and matrine were in the ranges of 0.1946 μg ～2.9190 μg (r=0.9999) and 0.1134 μg ～1.7010 μg (r=0.9999). The sample recoveries were 99.63% (RSD=2.19%) and 99.12% (RSD=1.33%). Conclusion: The method is simple, accurate, reproducible and can control the quality of Fukang lotion effectively.

Fukang lotion；TLC；HPLC；oxymatrine；matrine；quality standard

R 284

A

1674-926X(2014)02-014-05

成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院基金項(xiàng)目（2009-D-YY-44）

1.成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，四川 成都 610072；

2.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 610075

談靜（1980-），女，漢族，碩士，主管藥師，研究方向?yàn)橹兴幣谥萍靶轮苿┭芯?/p>

Email:tj800410@163.com

2013-07-31