急性創(chuàng)傷性腦損傷模型核轉(zhuǎn)錄因子-KB(NF-KB) 表達(dá)變化規(guī)律探討

春

1.廣東省徐聞縣人民醫(yī)院神經(jīng)外，廣東 徐聞 524100;2.廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，廣東 湛江 524001

Abstract:ObjectiveTo investigate the acute traumatic brain injury after a nuclear transcription factor-KB(NF-KB)expression variation.MethodsThis set of experiments conducted experiments using Wistar rats, and 80 patients were randomly divided into sham group of rats with brain trauma injury group. Variation observed in rats after traumatic brain injury NF-KB expression using immunohistochemistry.ResultsTBI brain injury group of nerve injury lesion area in six hours-120 hours after injury time stage, the expression of NF-KB was significantly higher, and there is a significant difference compared with the sham control group,P<0.05,statistically significant.ConclusionAcute traumatic brain injury NF-KB expression was significantly increased, and therefore NF-KF exception may be the main factors leading to secondary brain injury by inhibiting the expression of NF-KB in order to achieve the prevention of secondary brain injury occur.

Keywords:Acute traumatic brain injury;Nuclear transcription factor-KB;Variation

創(chuàng)傷性腦損傷對(duì)腦組織造成的損傷依據(jù)類型及時(shí)間可分為原發(fā)性腦損傷與繼發(fā)性腦損傷，通常腦外傷可致腦組織原發(fā)性腦損傷，但其后發(fā)生的繼發(fā)性腦損傷是影響顱腦外傷臨床治療效果及患者致死率、致殘率的主要因素之一[1]。研究表明腦炎性反應(yīng)在引起顱腦組織繼發(fā)性腦損傷中起重要作用，其中核轉(zhuǎn)錄因子-KB(NF-KB)是細(xì)胞因子及炎癥介質(zhì)表達(dá)的主要轉(zhuǎn)錄因子之一，通過NF-KB的激活可產(chǎn)生腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、IL等促炎因子在炎癥發(fā)應(yīng)征發(fā)揮作用，通過研究NF-KB與繼發(fā)性腦損傷的相關(guān)關(guān)系對(duì)治療急性創(chuàng)傷性腦損傷具有重要價(jià)值[2]。本組實(shí)驗(yàn)通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究急性創(chuàng)傷性腦損傷后NF-KB的表達(dá)變化規(guī)律，以此判斷其對(duì)繼發(fā)性腦損傷的影響?，F(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 選取健康Wistar大鼠80只作為研究實(shí)驗(yàn)對(duì)象，雌雄不限，大鼠體重在200～300g，平均體重(261.3±11.5)g，隨即將其分為兩組，假手術(shù)對(duì)照組與腦外傷損傷組，假手術(shù)對(duì)照組30例，腦外傷損傷組60例；NF-kBp65鼠抗大鼠單抗(北京中杉生物工程有限公司)；SP超敏KIT 9706、R-二聯(lián)氨苯胺顯色試劑盒DABKKIT0031(福州邁新生物工程有限公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 大鼠創(chuàng)傷性腦損傷的建立依據(jù)Feeney自由落體腦損傷模型制作，大鼠采用水合氯醛進(jìn)行腹腔麻醉。腦損傷建立沖擊力度選擇400gcm以達(dá)到右頂葉腦組織挫裂傷。創(chuàng)傷后數(shù)據(jù)觀察時(shí)相點(diǎn)選擇6h、24h、72h、120h，每時(shí)間隨機(jī)選取7例大鼠采集血清樣本并處死大鼠收集腦組織，應(yīng)用多聚甲醛液固定大鼠腦組織24小時(shí)后石蠟包埋進(jìn)行實(shí)驗(yàn)切片，其中1/2切片標(biāo)本進(jìn)行蘇木精-伊紅染色，另1/2切片標(biāo)本進(jìn)行免疫組化染色實(shí)驗(yàn)，采用SP法檢測(cè)切片標(biāo)本中的NF-KB數(shù)值并記錄，并采用SPIC彩色圖文分析系統(tǒng)及攝像機(jī)計(jì)算免疫組化陽(yáng)性染色的平均光密度值(IOD)；通過測(cè)量腦組織含水量評(píng)價(jià)大鼠是否存在腦水腫。

2 結(jié)果

2.1 腦損傷后NF-KB的表達(dá)變化情況 根據(jù)免疫組化SP法采集兩組大鼠的NF-KB表達(dá)情況并比較，結(jié)果見表1。

通過表1比較可知，假手術(shù)組基本無(wú)NF-KB免疫反應(yīng)，腦外傷損傷組在各時(shí)相點(diǎn)均可檢出較多NF-KB陽(yáng)性細(xì)胞，兩組比較差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 兩組大鼠腦損傷后NF-KB表達(dá)比較

注：與假手術(shù)組比較，*P<0.05。

2.2 兩組大鼠腦水腫的評(píng)估效果 根據(jù)腦組織含水量結(jié)果評(píng)估大鼠是否發(fā)生腦水腫，結(jié)果見表2。

通過表2比較可知，腦損傷組大鼠腦組織含水量各時(shí)相點(diǎn)明顯高于假手術(shù)對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表2 兩組大鼠腦組織水容量的比較情況

注：與假手術(shù)組比較，*P<0.05。

3 討論

炎性介質(zhì)及細(xì)胞因子在腦組織繼發(fā)性腦損傷過程中發(fā)揮較為重要的作用，其創(chuàng)傷后的表達(dá)與繼發(fā)性腦損傷存在密切聯(lián)系，因此針對(duì)性控制炎性介質(zhì)與細(xì)胞因子的高度表達(dá)對(duì)提高急性創(chuàng)傷性腦損傷的臨床治療效果及穩(wěn)定病情程度具有重要作用[3]。其中NF-KB的激活是釋放促炎細(xì)胞因子導(dǎo)致過度炎癥反應(yīng)及組織損傷的主要原因，因此對(duì)NF-KB的表達(dá)規(guī)律研究對(duì)開辟新的防治繼發(fā)性腦損傷途徑具有重要意義[4]。

根據(jù)本組動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，腦損傷組大鼠的NF-KB表達(dá)顯著高于假手術(shù)組，且在各時(shí)相點(diǎn)表達(dá)具有差異性，在6h時(shí)NF-KB表達(dá)活躍，72h時(shí)NF-KB表達(dá)下降但仍顯著高于假手術(shù)組，并且腦損傷組大鼠的腦組織含水量普遍高于假手術(shù)組，可提示急性創(chuàng)傷性腦損傷后NF-KB的表達(dá)可導(dǎo)致繼發(fā)性腦損傷發(fā)生機(jī)率的升高，同時(shí)導(dǎo)致腦水腫發(fā)病率較高。由此進(jìn)行資料整理及實(shí)驗(yàn)回顧可知，NF-KB作為一種多向性轉(zhuǎn)錄激活功能調(diào)節(jié)因此可受到應(yīng)激、炎癥、自由基等多種因素激活而發(fā)揮調(diào)控編碼作用導(dǎo)致多種細(xì)胞因子、粘附分子等參與免疫、炎癥反應(yīng)生理、病理過程基因的表達(dá)調(diào)控，而NF-KB的高度表達(dá)可加重患者的炎癥反應(yīng)進(jìn)一步造成繼發(fā)性腦損傷，因此在急性創(chuàng)傷性腦損傷后通過抑制NF-KB的表達(dá)對(duì)降低患者炎癥反應(yīng)、繼發(fā)性腦損傷發(fā)生率具有重要作用[5-6]。

綜上所述，急性創(chuàng)傷性腦損傷后NF-KB表達(dá)顯著增高可能是導(dǎo)致繼發(fā)性腦損傷的主要因素，因此可通過抑制NF-KB的表達(dá)從而實(shí)現(xiàn)防止繼發(fā)性腦損傷的發(fā)生，為臨床治療急性創(chuàng)傷性腦損傷提高創(chuàng)新思路，可有效提高臨床治療效果，降低急性創(chuàng)傷性腦損傷致死率、致殘率。

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