正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)優(yōu)選腺苷鈷胺片處方

楊桂英，宮曉平，張彥鵬，黃立紅（.張家口市食品藥品檢驗(yàn)中心，河北張家口 075000；.華北制藥股份有限公司，石家莊 05005）

腺苷鈷胺（Cobamamide）片為維生素類藥，是維生素B12的活性輔酶形式之一，用于維生素B12缺乏所致的疾病，如妊娠期貧血、營養(yǎng)不良性貧血，也可用于神經(jīng)根炎、多發(fā)性神經(jīng)炎、末梢神經(jīng)炎等[1]，現(xiàn)收載于2010年版《中國藥典》（二部）[2]，為糖衣片。標(biāo)準(zhǔn)中未對溶出度加以規(guī)定，按現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn)得到的結(jié)果不能完全真實(shí)地反映藥品的質(zhì)量。溶出度用于表征體外藥品的生物利用度，是口服固體制劑質(zhì)量評價(jià)的重要指標(biāo)之一[3-4]。為制備合格的腺苷鈷胺片，本文以溶出度為主要考察指標(biāo)，采用正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)優(yōu)化腺苷鈷胺片處方組成。

1 材料

1.1 儀器

Agilent1260 高效液相色譜儀（美國Agilent 公司）；沸騰制粒機(jī)（德國格拉特公司）；P2020 壓片機(jī)（德國菲特公司）；ML204電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；RC806智能溶出儀（天津大學(xué)無線電廠）；LDB-300包衣機(jī)（哈爾濱納諾醫(yī)藥化工設(shè)備有限公司）。

1.2 藥品與試劑

腺苷鈷胺原料藥（華北制藥股份有限公司，批號：30019913100001，純度：98.5%）；腺苷鈷胺標(biāo)準(zhǔn)品（中國食品藥品檢定研究院，批號：140658-200501，純度：98.5%）；腺苷鈷胺片（華北制藥股份有限公司，批號：131206、131207、131208，規(guī)格：每片含腺苷鈷胺0.25 mg）；羧甲基淀粉鈉（批號：130110）、微粉硅膠（批號：131103）、硬脂酸鎂（批號：20130412）均來自安徽山河藥用輔料股份有限公司；其余輔料均為藥用規(guī)格，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 處方初步篩選

根據(jù)華北制藥股份有限公司多年的片劑生產(chǎn)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，選擇國內(nèi)常用輔料，先對腺苷鈷胺片輔料進(jìn)行單因素篩選。羧甲基淀粉鈉作為崩解劑具有良好的吸水性和膨脹性，從而實(shí)現(xiàn)片劑的崩解，促進(jìn)藥物的溶出，其用量為1%～3%；微粉硅膠有很好的助流作用，確保物料的可壓性，其用量為0.1%～0.3%；硬脂酸鎂的潤滑作用可以確保壓片時片子的脫模性，確保壓片的順利進(jìn)行，其用量為0.5%～1.5%。

2.2 溶出度考察

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)[5]。色譜柱：YMC C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH 為3.2）-乙腈（85 ∶15），流速：1 ml/min；紫外檢測器；檢測波長：260 nm；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：50 μl。該色譜條件下，腺苷鈷胺與相鄰峰的分離度符合要求。

2.2.2 溶液的制備。對照品溶液：精密稱取經(jīng)60 ℃減壓干燥4 h的腺苷鈷胺對照品適量，加水溶解，并用水稀釋成每1 ml中約含1.25 μg的溶液，搖勻，即得。溶出溶液：取片劑，照溶出度測定法[2010 年版《中國藥典》（二部）附錄ⅩC 小杯法][2]，以水200 ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速75 r/min，依法操作。在30 min時，取溶液10 ml，用微孔濾膜（0.45 μm）迅速濾過，取續(xù)濾液，即得。以上溶液的制備均避光操作。

2.2.3 溶出度測定。取對照品溶液和溶出溶液各50 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜。按外標(biāo)法以峰面積分別計(jì)算每片樣品在30 min時的溶出度。限度為標(biāo)示量的70%。

2.3 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)

通過初步篩選處方，確定以淀粉和糊精用一步制粒的生產(chǎn)工藝制作空白顆粒。確定影響腺苷鈷胺片質(zhì)量的因素主要包括崩解劑、助流劑、潤滑劑的用量，每個因素分別選定3個水平，以30 min溶出度為主要考察指標(biāo)，采用L9（34）正交試驗(yàn)表[6]，對試驗(yàn)方案進(jìn)行設(shè)計(jì)，進(jìn)一步考察腺苷鈷胺片（片質(zhì)量約0.061 6 g）中羧甲基淀粉鈉用量（A）、微粉硅膠用量（B）、硬脂酸鎂用量（C）的影響。正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)因素與水平取值見表1。

表1 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)因素與水平取值（g/10 000片）Tab 1 Factors and levels of orthogonal design experiment（g/10 000 tablets）

2.4 腺苷鈷胺片的制備

將處方量的腺苷鈷胺原料藥和制備的空白顆粒等量遞加2次，把等量遞加后的物料和剩余的空白顆粒按表1處方量羧甲基淀粉鈉、微粉硅膠混合30 min，再加入處方量的硬脂酸鎂混合5 min，即得腺苷鈷胺片的中間體顆粒。按中間體檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)檢測中間體顆粒，確定片質(zhì)量并壓片，然后進(jìn)行包衣。按相同方法制得另外8 組不同的腺苷鈷胺片，測定所制片劑的30 min 溶出度。正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與極差分析結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3。

表2 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)與極差分析結(jié)果Tab 2 Results of orthogonal design experiment and range analysis

由表2、表3 可知，影響腺苷鈷胺片溶出度的主要因素是A，其次為B，C 因素?zé)o顯著影響，即A＞B＞C。根據(jù)溶出度綜合平均值結(jié)果，結(jié)合極差分析，確定最優(yōu)處方組成為A3B3C1。

2.5 驗(yàn)證試驗(yàn)

表3 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)方差分析結(jié)果Tab 3 Results of variance analysis of orthogonal design experiment

按照“2.3”項(xiàng)下最優(yōu)處方，制備3批腺苷鈷胺片，批號分別為131206、131207、131208，檢測3批樣品30 min的溶出度，并按《中國藥典》中對腺苷鈷胺片的質(zhì)量控制要求，對所制片劑中羥鈷胺素在460、352 nm波長處吸光度比值、崩解時限和含量進(jìn)行檢測。結(jié)果各項(xiàng)指標(biāo)均符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，詳見表4。

表4 3批腺苷鈷胺片的驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab 4 Results of validation test of 3 batches of Cobamamide tablets（n＝6）

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

將“2.4”項(xiàng)下制備的3 批樣品進(jìn)行鋁塑包裝，在加速試驗(yàn)條件[溫度（40±2）℃、相對濕度（75±5）%]下放置1、2、3、6個月[2]，然后按“2.4”項(xiàng)下指標(biāo)進(jìn)行檢測。結(jié)果各項(xiàng)指標(biāo)均符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，詳見表5。

表5 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果Tab 5 Results of stability test

3 討論

腺苷鈷胺片為糖衣片，原料為暗紅色結(jié)晶或非結(jié)晶性粉末，見光易分解[7]，在生產(chǎn)和檢驗(yàn)的過程要避光操作?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)2010 年版《中國藥典》（二部）無溶出度檢測項(xiàng)，只控制崩解時限。溶出度檢測是評價(jià)制劑處方、生產(chǎn)工藝、制劑生物利用度的重要指標(biāo)，目前已成為制藥工業(yè)必設(shè)的一個質(zhì)量控制項(xiàng)目。關(guān)于腺苷鈷胺片溶出度方法的建立與研究，筆者已進(jìn)行過報(bào)道[5]。

考慮到藥物的溶出度與制劑的處方、工藝直接相關(guān)，筆者在多年生產(chǎn)實(shí)踐的基礎(chǔ)上，對生產(chǎn)處方進(jìn)行了正交試驗(yàn)優(yōu)化。正交試驗(yàn)結(jié)果顯示，崩解劑羧甲基淀粉鈉對腺苷鈷胺片的溶出度有顯著影響，故在保證產(chǎn)品質(zhì)量的前提下，應(yīng)采用適量崩解劑。本研究用正交試驗(yàn)優(yōu)選出的處方工藝制備的腺苷鈷胺片，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，各項(xiàng)指標(biāo)均符合要求。該制備工藝簡單易行，適合工業(yè)化大生產(chǎn)，可為藥品生產(chǎn)企業(yè)研制腺苷鈷胺口服固體制劑提供參考和借鑒。

[1]王志良，冷健，催紅燕.腺苷鈷胺的臨床應(yīng)用進(jìn)展[J].中國藥事，2006，20（2）：122.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：1 086、附錄85、附錄199.

[3]姜建國，張西如，宋更申，等.枸櫞酸噴托維林制劑的溶出度試驗(yàn)方法的建立及42 廠家樣品考察[J].中國藥房，2013，24（17）：1 593.

[4]劉春平，陳耀娣，王超，等.國產(chǎn)馬來酸依那普利與進(jìn)口片劑體外溶出度比較[J].中國藥房，2013，24（21）：1 991.

[5]楊桂英，董琨，宮曉平，等.腺苷鈷胺片溶出度試驗(yàn)方法的建立[J].中國藥房，2014，25（25）：2 376.

[6]劉東，陳乃富，陳乃東，等.地拉羅斯分散片的處方篩選研究[J].中國藥房，2013，24（45）：4 282.

[7]陳學(xué)軍，李振東.腺苷鈷胺原料藥的穩(wěn)定性研究[J].黑龍江醫(yī)藥，2011，24（1）：82.