HPV16—E6蛋白在梅州地區(qū)客家人食管鱗癌組織及非癌組織中的表達

周臻濤++王悅冬

【摘要】 目的 通過分析HPV16E6蛋白在食管正常組織、不典型性增生組織和癌組織中的表達，探討HPV16E6蛋白在梅州地區(qū)客家人食管鱗癌組發(fā)生、發(fā)展中的生物學意義。方法 應用免疫組織化學方法檢測對68例食管正常黏膜組織、20例上皮不典型增生組織及68例癌組織中HPV16E6蛋白的表達情況進行研究。結果 HPV16E6蛋白陽性率在正常食管黏膜組織中為14.7%，在上皮不典型性增生組織中為45.0%，在癌組織中為70.6%，各組間差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結論 HPV16E6蛋白與梅州地區(qū)客家人食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展關系密切。

【關鍵詞】 食管腫瘤；人乳頭狀瘤病毒；E6蛋白；免疫組化

人乳頭狀瘤病毒（Human Papillomavirus，HPV）是一種屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬，是球形DNA病毒，能引起人體皮膚、黏膜的鱗狀上皮增殖。目前已分離出的HPV有130多種，根據(jù)其是否致癌分為高危型和低危型，其中HPV16屬于高危型，研究表明其與食管鱗癌的發(fā)生關系密切[1]。梅州地區(qū)為客家人聚集區(qū)，該地區(qū)食管癌高發(fā)。本研究應用免疫組化的方法檢測梅州地區(qū)客家人正常食管組織、不典型性增生食管組織及食管癌組織內HPV16E6蛋白表達，以探討HPV16E6蛋白在該地區(qū)食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展中的生物學意義。

作者單位：514031梅州市人民醫(yī)院腫瘤外一科

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集梅州市人民醫(yī)院2008年1月～2011年6月間行根治性切除，且臨床病理資料完整的食管鱗病例標本及相應的距腫瘤5 cm以上經(jīng)病理證實為正常食管黏膜組織68例。所有患者術前均未行放療、化療，其中男性50例，女性18例；年齡40～62歲，中位年齡50歲；另外選取同期經(jīng)胃鏡活檢病理證實為食管鱗狀上皮不典型性增生標本20例，其中男性15例，女性5 例；年齡30～65歲，中位年齡40歲。上述所有患者均為長期（≥20年）居住在梅州地區(qū)的客家人。HPV16E6單抗為美國Santa Cruz公司產(chǎn)品，購自北京中山生物公司，即用型免疫組化chemMate TM EnVision二抗試劑盒購自DaKo公司。

1.2 方法

免疫組織化學檢查采用EnVision兩步法，實驗步驟按試劑盒說明書進行，最后DAB顯色。以試劑公司提供的陽性對照片作為陽性對照，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判斷

2 結果

2.1 HPV16 E6在各組織中的表達 HPV16E6蛋白著色部位主要在細胞核， 呈棕黃色或棕褐色反應，伴少許胞漿著色。在正常食管黏膜組織、上皮不典型增生組織和癌組織中HPV16E6蛋白表達陽性率分別為14.7%、45.0%、70.6%。正常黏膜組與上皮不典型增生組及正常黏膜組與鱗癌組比較HPV16E6蛋白表達陽性率差異均有統(tǒng)計學意義（均P<0.05）；上皮不典型增生組與鱗癌組比較HPV16E6蛋白表達陽性率差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）（見表1）。

表1

3 討論

食管癌是常見的消化道腫瘤，全世界每年約有30萬人死于食管癌，我國是世界上食管癌高發(fā)地區(qū)之一，其中尤以我國北部（太行山區(qū)）發(fā)病率最高，梅州地區(qū)亦為食管癌高發(fā)區(qū)。食管癌的發(fā)生、發(fā)展是多因素協(xié)同、多階段綜合作用的結果，其病理學形態(tài)常經(jīng)過鱗狀上皮的單純增生、不典型增生、原位癌、早期浸潤癌至浸潤癌階段[3]。

HPV能引起人體皮膚、黏膜的鱗狀上皮增殖，目前已分離出的HPV有130多種，根據(jù)其是否致癌分為高危型和低危型，其中HPV16屬于高危型，研究表明HPV16與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關[4，5]。在HPV16雙股DNA的8個讀碼框架結構中，E6基因為轉化有關的早期基因，在DNA復制前早期編碼E6蛋白，是一種病毒癌蛋白，可以刺激易感細胞增生，并在腫瘤形成的早期階段起重要作用。歐洲學者研究表明高危型HPV感染與食管癌的發(fā)生發(fā)展密切相關，40%～60%的食管鱗癌標本HPV監(jiān)測為陽性[6]。國內學者王悅冬[7]采用PCR/導流雜交法檢測56例新鮮客家人食管癌組織、癌旁組織及正常食管黏膜組織HPV的表達，結果提示梅州地區(qū)客家人食管癌組織中存在HPV感染。本研究應用免疫組化的方法檢測梅州地區(qū)客家人正常食管組織、不典型性增生食管組織及食管癌組織內HPV16E6蛋白表達，結果顯示在正常食管黏膜組織、上皮不典型增生組織和癌組織中HPV16E6蛋白表達陽性率分別14.7%、45.0%、70.6%，各組之間差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。從研究結果可也看出，隨著食管病變的進展，HPV16 E6蛋白表達的陽性率也隨著升高，這提示HVP16E6蛋白在梅州地區(qū)客家人食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關，但其具體作用機制尚有待進一步研究。

參 考 文 獻

[1] 劉節(jié)，蘇勤，張偉.人乳頭瘤病毒HPVE6及p53蛋白與食管鱗癌關系.世界華人消化雜志，2000，8（5）：494496.

[2] Fromowitz F B， Viola M V， Chao S， et al. Ras p21 expression in the progression of breast cancer.Hum Pathol，1987， 18（12）：1268 1275.

[3] 許春雷，千新來，周小山，等.HPV16型E6、E7 在食管鱗癌組織與非癌組織中的表達.癌癥，2004，23（2）：165168.

[4] 任占平，石喆，杜鵑，等.乳腺癌組織中HPV16 18E6 及p53 MCM7 蛋白的表達及意義.中國腫瘤臨床，2008，35（6）：327330.

[5] McDougall J K. Immortalization and transformation of human cells by human papillomavirus//Human Pathogenic Papillomaviruses. Springer Berlin Heidelberg， 1994： 101119.

[6] 陸哲明.HPV與食管癌關系研究概況.國外醫(yī)學：腫瘤分冊，2000，27（4）：241245.

[7] 王悅冬，張開鄂，周臻濤，等.梅州市客家人食管與人乳頭狀瘤病毒感染的關系.腫瘤基礎與臨床，2010，23（5）：377378.endprint

【摘要】 目的 通過分析HPV16E6蛋白在食管正常組織、不典型性增生組織和癌組織中的表達，探討HPV16E6蛋白在梅州地區(qū)客家人食管鱗癌組發(fā)生、發(fā)展中的生物學意義。方法 應用免疫組織化學方法檢測對68例食管正常黏膜組織、20例上皮不典型增生組織及68例癌組織中HPV16E6蛋白的表達情況進行研究。結果 HPV16E6蛋白陽性率在正常食管黏膜組織中為14.7%，在上皮不典型性增生組織中為45.0%，在癌組織中為70.6%，各組間差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結論 HPV16E6蛋白與梅州地區(qū)客家人食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展關系密切。

【關鍵詞】 食管腫瘤；人乳頭狀瘤病毒；E6蛋白；免疫組化

人乳頭狀瘤病毒（Human Papillomavirus，HPV）是一種屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬，是球形DNA病毒，能引起人體皮膚、黏膜的鱗狀上皮增殖。目前已分離出的HPV有130多種，根據(jù)其是否致癌分為高危型和低危型，其中HPV16屬于高危型，研究表明其與食管鱗癌的發(fā)生關系密切[1]。梅州地區(qū)為客家人聚集區(qū)，該地區(qū)食管癌高發(fā)。本研究應用免疫組化的方法檢測梅州地區(qū)客家人正常食管組織、不典型性增生食管組織及食管癌組織內HPV16E6蛋白表達，以探討HPV16E6蛋白在該地區(qū)食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展中的生物學意義。

作者單位：514031梅州市人民醫(yī)院腫瘤外一科

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集梅州市人民醫(yī)院2008年1月～2011年6月間行根治性切除，且臨床病理資料完整的食管鱗病例標本及相應的距腫瘤5 cm以上經(jīng)病理證實為正常食管黏膜組織68例。所有患者術前均未行放療、化療，其中男性50例，女性18例；年齡40～62歲，中位年齡50歲；另外選取同期經(jīng)胃鏡活檢病理證實為食管鱗狀上皮不典型性增生標本20例，其中男性15例，女性5 例；年齡30～65歲，中位年齡40歲。上述所有患者均為長期（≥20年）居住在梅州地區(qū)的客家人。HPV16E6單抗為美國Santa Cruz公司產(chǎn)品，購自北京中山生物公司，即用型免疫組化chemMate TM EnVision二抗試劑盒購自DaKo公司。

1.2 方法

免疫組織化學檢查采用EnVision兩步法，實驗步驟按試劑盒說明書進行，最后DAB顯色。以試劑公司提供的陽性對照片作為陽性對照，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判斷

2 結果

2.1 HPV16 E6在各組織中的表達 HPV16E6蛋白著色部位主要在細胞核， 呈棕黃色或棕褐色反應，伴少許胞漿著色。在正常食管黏膜組織、上皮不典型增生組織和癌組織中HPV16E6蛋白表達陽性率分別為14.7%、45.0%、70.6%。正常黏膜組與上皮不典型增生組及正常黏膜組與鱗癌組比較HPV16E6蛋白表達陽性率差異均有統(tǒng)計學意義（均P<0.05）；上皮不典型增生組與鱗癌組比較HPV16E6蛋白表達陽性率差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）（見表1）。

表1

3 討論

食管癌是常見的消化道腫瘤，全世界每年約有30萬人死于食管癌，我國是世界上食管癌高發(fā)地區(qū)之一，其中尤以我國北部（太行山區(qū)）發(fā)病率最高，梅州地區(qū)亦為食管癌高發(fā)區(qū)。食管癌的發(fā)生、發(fā)展是多因素協(xié)同、多階段綜合作用的結果，其病理學形態(tài)常經(jīng)過鱗狀上皮的單純增生、不典型增生、原位癌、早期浸潤癌至浸潤癌階段[3]。

HPV能引起人體皮膚、黏膜的鱗狀上皮增殖，目前已分離出的HPV有130多種，根據(jù)其是否致癌分為高危型和低危型，其中HPV16屬于高危型，研究表明HPV16與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關[4，5]。在HPV16雙股DNA的8個讀碼框架結構中，E6基因為轉化有關的早期基因，在DNA復制前早期編碼E6蛋白，是一種病毒癌蛋白，可以刺激易感細胞增生，并在腫瘤形成的早期階段起重要作用。歐洲學者研究表明高危型HPV感染與食管癌的發(fā)生發(fā)展密切相關，40%～60%的食管鱗癌標本HPV監(jiān)測為陽性[6]。國內學者王悅冬[7]采用PCR/導流雜交法檢測56例新鮮客家人食管癌組織、癌旁組織及正常食管黏膜組織HPV的表達，結果提示梅州地區(qū)客家人食管癌組織中存在HPV感染。本研究應用免疫組化的方法檢測梅州地區(qū)客家人正常食管組織、不典型性增生食管組織及食管癌組織內HPV16E6蛋白表達，結果顯示在正常食管黏膜組織、上皮不典型增生組織和癌組織中HPV16E6蛋白表達陽性率分別14.7%、45.0%、70.6%，各組之間差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。從研究結果可也看出，隨著食管病變的進展，HPV16 E6蛋白表達的陽性率也隨著升高，這提示HVP16E6蛋白在梅州地區(qū)客家人食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關，但其具體作用機制尚有待進一步研究。

參 考 文 獻

[1] 劉節(jié)，蘇勤，張偉.人乳頭瘤病毒HPVE6及p53蛋白與食管鱗癌關系.世界華人消化雜志，2000，8（5）：494496.

[2] Fromowitz F B， Viola M V， Chao S， et al. Ras p21 expression in the progression of breast cancer.Hum Pathol，1987， 18（12）：1268 1275.

[3] 許春雷，千新來，周小山，等.HPV16型E6、E7 在食管鱗癌組織與非癌組織中的表達.癌癥，2004，23（2）：165168.

[4] 任占平，石喆，杜鵑，等.乳腺癌組織中HPV16 18E6 及p53 MCM7 蛋白的表達及意義.中國腫瘤臨床，2008，35（6）：327330.

[5] McDougall J K. Immortalization and transformation of human cells by human papillomavirus//Human Pathogenic Papillomaviruses. Springer Berlin Heidelberg， 1994： 101119.

[6] 陸哲明.HPV與食管癌關系研究概況.國外醫(yī)學：腫瘤分冊，2000，27（4）：241245.

[7] 王悅冬，張開鄂，周臻濤，等.梅州市客家人食管與人乳頭狀瘤病毒感染的關系.腫瘤基礎與臨床，2010，23（5）：377378.endprint

【摘要】 目的 通過分析HPV16E6蛋白在食管正常組織、不典型性增生組織和癌組織中的表達，探討HPV16E6蛋白在梅州地區(qū)客家人食管鱗癌組發(fā)生、發(fā)展中的生物學意義。方法 應用免疫組織化學方法檢測對68例食管正常黏膜組織、20例上皮不典型增生組織及68例癌組織中HPV16E6蛋白的表達情況進行研究。結果 HPV16E6蛋白陽性率在正常食管黏膜組織中為14.7%，在上皮不典型性增生組織中為45.0%，在癌組織中為70.6%，各組間差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結論 HPV16E6蛋白與梅州地區(qū)客家人食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展關系密切。

【關鍵詞】 食管腫瘤；人乳頭狀瘤病毒；E6蛋白；免疫組化

人乳頭狀瘤病毒（Human Papillomavirus，HPV）是一種屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬，是球形DNA病毒，能引起人體皮膚、黏膜的鱗狀上皮增殖。目前已分離出的HPV有130多種，根據(jù)其是否致癌分為高危型和低危型，其中HPV16屬于高危型，研究表明其與食管鱗癌的發(fā)生關系密切[1]。梅州地區(qū)為客家人聚集區(qū)，該地區(qū)食管癌高發(fā)。本研究應用免疫組化的方法檢測梅州地區(qū)客家人正常食管組織、不典型性增生食管組織及食管癌組織內HPV16E6蛋白表達，以探討HPV16E6蛋白在該地區(qū)食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展中的生物學意義。

作者單位：514031梅州市人民醫(yī)院腫瘤外一科

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集梅州市人民醫(yī)院2008年1月～2011年6月間行根治性切除，且臨床病理資料完整的食管鱗病例標本及相應的距腫瘤5 cm以上經(jīng)病理證實為正常食管黏膜組織68例。所有患者術前均未行放療、化療，其中男性50例，女性18例；年齡40～62歲，中位年齡50歲；另外選取同期經(jīng)胃鏡活檢病理證實為食管鱗狀上皮不典型性增生標本20例，其中男性15例，女性5 例；年齡30～65歲，中位年齡40歲。上述所有患者均為長期（≥20年）居住在梅州地區(qū)的客家人。HPV16E6單抗為美國Santa Cruz公司產(chǎn)品，購自北京中山生物公司，即用型免疫組化chemMate TM EnVision二抗試劑盒購自DaKo公司。

1.2 方法

免疫組織化學檢查采用EnVision兩步法，實驗步驟按試劑盒說明書進行，最后DAB顯色。以試劑公司提供的陽性對照片作為陽性對照，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判斷

2 結果

2.1 HPV16 E6在各組織中的表達 HPV16E6蛋白著色部位主要在細胞核， 呈棕黃色或棕褐色反應，伴少許胞漿著色。在正常食管黏膜組織、上皮不典型增生組織和癌組織中HPV16E6蛋白表達陽性率分別為14.7%、45.0%、70.6%。正常黏膜組與上皮不典型增生組及正常黏膜組與鱗癌組比較HPV16E6蛋白表達陽性率差異均有統(tǒng)計學意義（均P<0.05）；上皮不典型增生組與鱗癌組比較HPV16E6蛋白表達陽性率差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）（見表1）。

表1

3 討論

食管癌是常見的消化道腫瘤，全世界每年約有30萬人死于食管癌，我國是世界上食管癌高發(fā)地區(qū)之一，其中尤以我國北部（太行山區(qū)）發(fā)病率最高，梅州地區(qū)亦為食管癌高發(fā)區(qū)。食管癌的發(fā)生、發(fā)展是多因素協(xié)同、多階段綜合作用的結果，其病理學形態(tài)常經(jīng)過鱗狀上皮的單純增生、不典型增生、原位癌、早期浸潤癌至浸潤癌階段[3]。

HPV能引起人體皮膚、黏膜的鱗狀上皮增殖，目前已分離出的HPV有130多種，根據(jù)其是否致癌分為高危型和低危型，其中HPV16屬于高危型，研究表明HPV16與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關[4，5]。在HPV16雙股DNA的8個讀碼框架結構中，E6基因為轉化有關的早期基因，在DNA復制前早期編碼E6蛋白，是一種病毒癌蛋白，可以刺激易感細胞增生，并在腫瘤形成的早期階段起重要作用。歐洲學者研究表明高危型HPV感染與食管癌的發(fā)生發(fā)展密切相關，40%～60%的食管鱗癌標本HPV監(jiān)測為陽性[6]。國內學者王悅冬[7]采用PCR/導流雜交法檢測56例新鮮客家人食管癌組織、癌旁組織及正常食管黏膜組織HPV的表達，結果提示梅州地區(qū)客家人食管癌組織中存在HPV感染。本研究應用免疫組化的方法檢測梅州地區(qū)客家人正常食管組織、不典型性增生食管組織及食管癌組織內HPV16E6蛋白表達，結果顯示在正常食管黏膜組織、上皮不典型增生組織和癌組織中HPV16E6蛋白表達陽性率分別14.7%、45.0%、70.6%，各組之間差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。從研究結果可也看出，隨著食管病變的進展，HPV16 E6蛋白表達的陽性率也隨著升高，這提示HVP16E6蛋白在梅州地區(qū)客家人食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關，但其具體作用機制尚有待進一步研究。

參 考 文 獻

[1] 劉節(jié)，蘇勤，張偉.人乳頭瘤病毒HPVE6及p53蛋白與食管鱗癌關系.世界華人消化雜志，2000，8（5）：494496.

[2] Fromowitz F B， Viola M V， Chao S， et al. Ras p21 expression in the progression of breast cancer.Hum Pathol，1987， 18（12）：1268 1275.

[3] 許春雷，千新來，周小山，等.HPV16型E6、E7 在食管鱗癌組織與非癌組織中的表達.癌癥，2004，23（2）：165168.

[4] 任占平，石喆，杜鵑，等.乳腺癌組織中HPV16 18E6 及p53 MCM7 蛋白的表達及意義.中國腫瘤臨床，2008，35（6）：327330.

[5] McDougall J K. Immortalization and transformation of human cells by human papillomavirus//Human Pathogenic Papillomaviruses. Springer Berlin Heidelberg， 1994： 101119.

[6] 陸哲明.HPV與食管癌關系研究概況.國外醫(yī)學：腫瘤分冊，2000，27（4）：241245.

[7] 王悅冬，張開鄂，周臻濤，等.梅州市客家人食管與人乳頭狀瘤病毒感染的關系.腫瘤基礎與臨床，2010，23（5）：377378.endprint