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    木耳干耳片組織分離的新方法研究*

    2014-03-06 01:24:54孟秀秀陳衛(wèi)衛(wèi)孫賀男任洋洋
    食藥用菌 2014年3期
    關(guān)鍵詞:罐頭瓶氣霧耳片

    李 曉 孟秀秀 陳衛(wèi)衛(wèi) 李 鵬 孫賀男 任洋洋 高 偉

    ?

    木耳干耳片組織分離的新方法研究*

    李 曉 孟秀秀 陳衛(wèi)衛(wèi) 李 鵬 孫賀男 任洋洋 高 偉

    (食藥用菌教育部工程研究中心,長春 130118)

    木耳;組織分離;干耳片

    黑木耳子實體新鮮時半透明膠質(zhì),富有彈性,呈耳狀、葉片狀或不規(guī)則形;干燥后收縮成革質(zhì),較薄,有一定韌性[1]。菌種生產(chǎn)時不易進行組織分離。傳統(tǒng)組織分離方法多以新耳,或用水泡開的干耳作為材料[2]。操作方法繁瑣而又極易污染,且多使用氯化汞試劑,不僅對環(huán)境造成污染,對木耳也有一定的不良影響。我們通過實踐,摸索出兩種以干耳片為組織分離材料的實用、有效方法,在一定程度上彌補了上述缺點。

    1 材料與方法

    1.1 試驗材料

    (1)木耳。黑木耳單片品種吉Au01,選取較平整、邊緣褶皺、少筋的干耳片作為分離材料。耳片采取自然陰干、曬干,或于35 ℃以下烘干。

    (2)煙霧熏蒸氣霧消毒劑。選用小袋裝的粉末狀煙霧熏蒸氣霧消毒劑,每小袋約8 g,每次用一袋。

    (3)罐頭瓶。選擇大口玻璃制罐頭瓶,瓶體無破損。

    (4)培養(yǎng)基。采用PDA斜面培養(yǎng)基:馬鈴薯(去皮,無芽)200 g,葡萄糖20 g,瓊脂粉15~18 g(或瓊脂條20 g),水1 000 mL。培養(yǎng)基在121 ℃下滅菌30 min后,待溫度降至55~60 ℃時出鍋擺斜面?zhèn)溆谩?/p>

    1.2 組織分離方法

    (1)熏干耳片組織分離方法。先將選取的耳片用回形針固定在兩層塑料膜中央,再將第三層塑料膜覆蓋在前兩層塑料膜的外側(cè)。將煙霧熏蒸氣霧消毒劑點燃后迅速放入大口罐頭瓶內(nèi),然后將干耳片懸掛于瓶中央,用皮圈將塑料膜固定于瓶口,并封牢。待罐頭瓶內(nèi)無煙后用75%的酒精棉擦拭瓶表,置于已滅菌的超凈工作臺上。用經(jīng)75%酒精棉消毒后的手將熏過的干耳片從回形針上取下,固定在回形針的一端,用灼燒滅菌冷卻后的鑷子夾取遠離手持端的不卷曲的耳片,大小如芝麻,放入PDA培養(yǎng)基內(nèi),塞上棉塞或硅膠塞,在26 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。以上操作均在超凈工作臺內(nèi)的酒精燈火焰附近進行。

    (2)熏干耳片泡酒精組織分離方法[3]。在進行組織分離操作前,準(zhǔn)備兩個培養(yǎng)皿,在超凈工作臺內(nèi)向培養(yǎng)皿中加入75%酒精,約為培養(yǎng)皿總體積的1/2。然后再對超凈工作臺進行紫外線滅菌。

    將干耳片按照熏干耳片組織分離方法,移在超凈工作臺進行。夾取芝麻粒大小的耳片,先放入第一個培養(yǎng)皿中浸泡1 min,然后用鑷子夾到第二個培養(yǎng)皿中來回涮2~3次,再用鑷子夾著從酒精燈火焰上穿梭(在穿過酒精燈火焰時,木耳組織塊會著火,屬正?,F(xiàn)象)后放入PDA培養(yǎng)基內(nèi),塞上試管塞。在26 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

    2 結(jié)果與分析

    兩種木耳組織分離方法的相關(guān)試驗數(shù)據(jù)見表1。

    表1 木耳組織分離試驗結(jié)果

    分離成功率是指每個耳片分離出純培養(yǎng)物的幾率。表1中數(shù)據(jù)是分別以一個干耳片為分離材料進行操作所得數(shù)據(jù),所以耳片分離的成功率均為100%。

    熏干耳片組織分離方法:干木耳塊在吸收培養(yǎng)基內(nèi)水分后膨脹,3~4天萌發(fā);熏干耳片泡酒精組織分離方法,2~3天萌發(fā)。說明添加酒精對木耳塊的萌發(fā)有促進作用。熏干耳片法10支試管培養(yǎng)時有2支試管既不萌發(fā)也未污染,這可能是熏蒸時間過長導(dǎo)致的。在培養(yǎng)過程中污染的雜菌,種類較單一,都為細菌。說明以上兩種組織分離方法可以有效抑制真菌類雜菌污染。

    3 結(jié)論與討論

    在熏干耳片組織分離方法的操作中,不可以隨意增加煙霧熏蒸氣霧消毒劑的用量,否則會熏死木耳,引起分離失敗。在熏干耳片泡酒精組織分離方法的操作中,過酒精燈火焰的木耳塊著火后應(yīng)立刻放入培養(yǎng)基內(nèi),不可以在外部空間停留過長時間,否則會燒死木耳。此兩種方法只適合以干耳片為分離材料。如果操作中用鮮耳或泡開的干耳,在熏蒸過程中會使耳片發(fā)黃死亡。由于耳片在曬干過程中會殺死部分雜菌,因此以干耳片為分離材料,可降低耳片本身的雜菌基數(shù)。

    熏干耳片組織分離方法中,罐頭瓶中的耳片不可以碰壁。對罐頭瓶用氣霧消毒劑熏蒸并封口,可建立一個密閉的無菌環(huán)境。所用的煙霧熏蒸氣霧消毒劑經(jīng)濟實惠,其有效成分為有機氯,避免了重金屬污染。

    試驗過程污染的雜菌均為細菌??煽紤]在分離培養(yǎng)基中加100 μg/mL的青霉素,以減少培養(yǎng)基的細菌污染[4]。

    [1] 李玉, 圖力古爾. 長白山蘑菇[M]. 北京: 科學(xué)出版社, 2003: 77.

    [2] 黃毅. 食用菌栽培[M]. 北京: 高等教育出版社, 2008: 85.

    [3] 杜萍, 崔寶凱. 木耳菌種分離新方法簡介[J]. 食用菌, 2009(6): 27-28.

    [4] 戴水蓮, 林警, 高麗. PDA中加入抗菌素的抗菌作用試驗[J]. 食用菌, 2008, 30(1): 28-29.

    國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系“北方野生菌收集保育與馴化”(GARS-24);吉林省重大項目“作物秸稈與畜禽糞便高效轉(zhuǎn)化生產(chǎn)食用菌的關(guān)鍵技術(shù)研究與示范”(10ZDGG003)

    李曉(1976—),男,副教授,從事食用菌教學(xué)、科研和產(chǎn)業(yè)化開發(fā)等工作。

    S646

    A

    2095-0934(2014)03-151-02

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