關于丹參及其制劑高效液相色譜指紋圖譜參照物的選擇研究概況

張 珺，程月發(fā)

（河北聯(lián)合大學冀唐學院，河北唐山063300）

關于丹參及其制劑高效液相色譜指紋圖譜參照物的選擇研究概況

張 珺，程月發(fā)

（河北聯(lián)合大學冀唐學院，河北唐山063300）

近年來，國內(nèi)外學者在丹參及其制劑的高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜的建立上進行了大量研究。參照物的選擇是指紋圖譜研究過程中必不可少的內(nèi)容，在圖譜的建立與譜峰鑒別方面具有重要的意義。以丹參、HPLC指紋圖譜和參照物為關鍵詞，通過CNKI、萬方數(shù)據(jù)庫和Elsevier等專業(yè)數(shù)據(jù)庫系統(tǒng)查閱相關文獻，有參考價值的文獻近40篇，本文綜述了近十年來丹參及其制劑的HPLC指紋圖譜參照物選擇的情況，期望今后能夠更好地為丹參HPLC指紋圖譜標準化研究提供參考和依據(jù)。

丹參；高效液相色譜指紋圖譜；參照物

高效液相色譜指紋圖譜是針對中藥化學成分的多樣性與復雜性而提出的有效控制中藥材及其制劑質(zhì)量的一種技術(shù)方法，主要用來全面反映中藥所含化學成分的種類與數(shù)量，進而反映中藥的內(nèi)在質(zhì)量［1］。而制訂指紋圖譜就必須設立參照物，參照物是根據(jù)中藥理論及有關化學和藥理資料來確定選擇對象，首先應選有對照品提供的君藥中的主要有效成分，其次是其他有效成分，再次是大量存在的指標成分，最后才選一定的內(nèi)標物作為參照物［2］。一般選取原則是選相對含量高并且性質(zhì)穩(wěn)定的藥效成分的色譜峰作為參照峰，并且所選擇的色譜峰應該保留時間適中、峰形對稱性好且與相鄰色譜峰均達到基線分離。丹參及其制劑中的有效成分主要分為兩大類，分別為水溶性的酚酸類成分和脂溶性的二萜醌類成分，其指紋圖譜的建立要求盡可能多地反映其中的有效成分，達到全面、系統(tǒng)評價丹參質(zhì)量的目的［3］，但是各種研究所選擇的指紋圖譜的參照物并不一致。鑒于現(xiàn)版藥典中所規(guī)定的評價丹參及其制劑質(zhì)量的指標成分——丹酚酸B在提取過程中易分解，目前較多研究則選取非藥典指標成分，例如原兒茶醛或隱丹參酮作為參照物。另外，由于指紋圖譜評價方法的不斷改進，采用雙參照物的方法也將成為趨勢。以丹參、HPLC指紋圖譜和參照物為關鍵詞，通過

CNKI、萬方數(shù)據(jù)庫和Elsevier等專業(yè)數(shù)據(jù)庫系統(tǒng)查閱相關文獻，本文總結(jié)了近十年來關于丹參及其制劑指紋圖譜研究的參照物的選擇，以期為丹參及其制劑指紋圖譜的標準化研究提供參考依據(jù)。

1 丹參及其制劑HPLC指紋圖譜參照物選擇的類別與依據(jù)

目前丹參及其制劑HPLC指紋圖譜的研究中，關于參照物的選擇上主要有以下幾類：

1.1 選擇藥典質(zhì)量標準規(guī)定的丹參活性成分作為指紋圖譜的參照物 《中國藥典》2010年版（一部）規(guī)定評價丹參藥材質(zhì)量的定量指標是丹參酮ⅡA和丹酚酸B，丹參片、復方丹參片和復方丹參顆粒等制劑品種也是以丹參酮ⅡA和丹酚酸B作為含量控制指標，而復方丹參滴丸以丹參素的含量為指標［4］。由此，相關文獻中大多采用這些指標成分作為丹參HPLC指紋圖譜的參照物。王福剛等［5］建立了白花丹參藥材的HPLC指紋圖譜，在選定的色譜條件下，通過中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)（2004A）確定14個色譜峰構(gòu)成白花丹參藥材指紋圖譜的特征峰，經(jīng)HPLC圖譜比較，丹酚酸B峰較大，為丹參的主要成分之一，故選擇丹酚酸B為參照峰。此外，一些關于丹參藥材指紋圖譜的研究中也大多采用了丹酚酸B作為指紋圖譜的參照峰［6～9］。丹參的單方或復方制劑，如丹參片、復方丹參片的指紋圖譜建立時也采用丹酚酸B的色譜峰作為參照峰［10～13］。其原因正如孫守國等［14］在建立復方丹參片HPLC指紋圖譜時所指出的：經(jīng)實驗比較，丹酚酸B峰較大，為丹參的主要成分之一，且《中國藥典》2005年版（一部）丹參項下采用其含量為質(zhì)量控制指標，故選擇丹酚酸B為參照峰，該研究以丹酚酸B為參照物，標示出了20個共有峰。而復方丹參滴丸指紋圖譜的研究中則采用藥典規(guī)定的成分丹參素作為參照峰［4，15］。有一些研究選擇了丹參酮ⅡA作為丹參及其制劑指紋圖譜研究的參照物［16，17］，原因是丹參酮ⅡA色譜峰在指紋圖譜中峰位適中、峰形對稱性好，且相對穩(wěn)定。

1.2 選擇非藥典規(guī)定的丹參水溶性成分作為指紋圖譜的參照物 目前，已從丹參中分離出的水溶性化合物主要有丹參素、原兒茶醛、迷迭香酸、迷迭香酸甲酯、紫草酸、咖啡酸、異阿魏酸和丹酚酸A、B、C、D和E等［18］。其中，丹參素和原兒茶醛含量較高，活性較強，是丹參治療冠心病的主要有效成分［19，20］。而藥典規(guī)定的指標成分丹酚酸B在藥材炮制加工過程性質(zhì)不穩(wěn)定，會發(fā)生分解反應。因此，在一些關于丹參HPLC指紋圖譜的研究，常選用水溶性成分丹參素（丹參素鈉）或原兒茶醛作為指紋圖譜的參照物。

唐旭利等［21］建立丹參藥材水溶性成分HPLC指紋圖譜時，指認了丹酚酸B、丹參素鈉、原兒茶醛3個特征峰，三者均為丹參水溶性的主要活性成分。在結(jié)構(gòu)上，丹參素鈉和丹酚酸B屬于α－羥基酚酸類成分，在水溶液中易失去一分子水生成穩(wěn)定的共軛酚酸結(jié)構(gòu)。原兒茶醛為高度共軛的酚醛類成分，化學性質(zhì)上較為穩(wěn)定，在色譜圖中分離度好且容易辨認，因此選擇了原兒茶醛為丹參藥材指紋圖譜的參照物。李婧等［22］在建立丹參注射液HPLC指紋圖譜時，因原兒茶醛為主要活性成分之一，其積分面積在指紋圖譜中所占的比例較大且相對穩(wěn)定，所以選原兒茶醛作為參照物，并用此法建立了共有指紋圖譜，包含20個共有峰，每個峰分離度好，并指認出5種特征水溶性有效成分。此外相當一部分研究也是選用了原兒茶醛作為 HPLC指紋圖譜的參照峰［23～28］。

吳志軍等［29］則選擇了丹參素鈉作為丹參藥材HPLC指紋圖譜的參照峰。而黃敏等［30］在建立山東栽培丹參水溶性成分指紋圖譜時選擇了出峰時間適中且分離良好的咖啡酸色譜峰作為參照峰。Hu等［31］選擇了迷迭香酸為參照物，將其色譜峰作為丹參藥材指紋圖譜的參比峰。

1.3 選擇非藥典規(guī)定的丹參脂溶性成分作為指紋圖譜的參照物 丹參脂溶性成分是丹參的主要有效成分，有較強的生理活性，該類化合物主要有：丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA、丹參酮ⅡB、隱丹參酮、丹參酸甲酯、丹參新酮、二氫丹參酮Ⅰ及丹參二醇等［18］。其中，除丹參酮ⅡA外，隱丹參酮是丹參治療冠心病的主要有效成分之一且抗菌活性較強［32］。因此，在研究丹參及其制劑HPLC指紋圖譜時，還常選用脂溶性成分隱丹參酮或二氫丹參酮作為指紋圖譜的參照物。

宋敏等［33］在研究丹參藥材脂溶性成分指紋圖譜時就選擇了含量較高且與其他色譜峰能達到完全分離的隱丹參酮作為參比峰。王立萍等［34］采用HPLC法研究山東丹參脂溶性成分指紋圖譜時也選用了隱丹參酮作為參照物，確定了12個色譜峰作為共有峰，并指認了丹參酮Ⅱ、丹參酮、丹參酮Ⅰ的色譜峰。劉剛等［35］在建立丹參藥材乙醇提取物的指紋圖譜時，以隱丹參酮為參照物，得出了主要共有峰相對保留時間和相對峰面積，作為丹參指紋圖譜相關技術(shù)參數(shù)。

宋平順等［36］在建立評價甘肅丹參質(zhì)量優(yōu)劣的指紋圖譜分析方法是選擇的指紋圖譜參照峰為二氫丹參酮，因為其色譜峰分離度良好，保留時間居中，峰面積穩(wěn)定。

1.4 選擇丹參的兩個活性成分作為參照物 目前，在一些研究中也有選用兩個成分作為HPLC指紋圖譜的參照物。孫國祥等［37］就以丹酚酸B和原兒茶醛為雙參照峰，建立了丹參水溶性成分HPLC數(shù)字化指紋圖譜的雙參照物峰指紋系統(tǒng)標定方法。

1.5 選擇內(nèi)標物作為丹參及其制劑指紋圖譜的參照峰 應用此種方法在已公開的文獻中相對較少。閻正等［38］采用蒽作為內(nèi)標物建立了丹參藥材的HPLC指紋圖譜。

2 總結(jié)與展望

綜上所述，丹參及其制劑指紋圖譜選擇的參照物是不盡相同的，并沒有統(tǒng)一的標準或規(guī)定。其原因在于丹參藥材因不同種類或產(chǎn)地及氣候等因素的影響而引起的成分間的差異，而不同劑型的制劑則會受原料藥及加工炮制方法等因素的影響，故很難用選取一種固定的指紋圖譜參照物做研究。而目前大多數(shù)研究都是圍繞著丹參及其制劑HPLC指紋圖譜的建立及應用于質(zhì)量控制而進行的，關于HPLC指紋圖譜的標準化研究相對較少。隨著中藥指紋圖譜技術(shù)逐步被收入到國家標準中，指紋圖譜標準化將成為今后研究的重點。只有實現(xiàn)指紋圖譜的標準化才能使其成為丹參及其制劑質(zhì)量控制的統(tǒng)一標準。事實上，絕對的標準化很難實現(xiàn)，但對不同廠家的相同或者相似的品種，或者提取工藝相同的提取物，在采用HPLC指紋圖譜監(jiān)控其質(zhì)量時采用同一參照物，不但具有實際應用價值，而且對于指紋圖譜標準化工作也具有十分重要的意義。

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The selection of reference involved in HPLC fingerprint analysis of salvia miltiorrhiza and its preparations

ZHANG Jun，CHENG Yue-fa
（Jitang College of Hebei United University，Tangshan 063300，China）

Many researches in the establishmentof the HPLC fingerprintof salviamiltiorrhiza and its preparations have been finished in recent years.In order to build the accurate fingerprints，the selection of reference should be paid more attention because it played an important role in establishing the HPLC fingerprints and identifying the peaks in the process of these tests.By using salvia miltiorrhiza，HPLC fingerprint and reference as keywords，about40 references were retrieved in CNKI，Wanfang and Elsevier databases.This paper reviewed the referencematerials in the studies of HPLC fingerprintabout salvia miltiorrhiza and its preparations in the past ten years，expected to provide some basic guides for the HPLC fingerprint standardized research in the future.

Salviamiltiorrhiza；HPLC fingerprint；Reference

R284.1

A

2095－5375（2014）11－0664－004

2013年唐山市科學技術(shù)研究與發(fā)展計劃基金項目（No.13130298z）；河北聯(lián)合大學2012年青年科學研究基金項目（No.z201242）

張珺，女，講師，研究方向：藥物分析，E－mail：zhangjun_2402＠163.com

程月發(fā)，男，博士研究生，副教授，研究方向：藥理學，Tel：0315－8114108，E－mail：arthurcyf＠163.com