神經(jīng)源性肌萎縮病理動(dòng)物模型的制備

遼寧省基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所(110101)車(chē)光昇 郭源秩 宋光熠

神經(jīng)源性肌萎縮常見(jiàn)的原因?yàn)閺U用、營(yíng)養(yǎng)障礙、缺血和中毒。脊髓前角病變、神經(jīng)根、神經(jīng)叢、周?chē)窠?jīng)的病變等均可引起神經(jīng)興奮沖動(dòng)的傳導(dǎo)障礙，從而使部分肌纖維廢用，產(chǎn)生廢用性肌萎縮。常見(jiàn)的疾病有:脊椎椎骨骨質(zhì)增生、椎間盤(pán)病變、脊神經(jīng)腫瘤、蛛網(wǎng)膜炎、神經(jīng)炎、神經(jīng)叢病變、脊神經(jīng)腫瘤、神經(jīng)損傷、脊髓空洞癥、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元性疾病、格林-巴利綜合征、腦部病變和脊髓病變等。本文試用大鼠坐骨神經(jīng)雙重結(jié)扎的方法復(fù)制神經(jīng)源性肌萎縮動(dòng)物模型。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 SPF級(jí)SD大鼠(體重190～210)g(遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證為遼寧省科學(xué)技術(shù)廳簽發(fā)，許可證號(hào):SCXK(遼)2010～0001。

1.2 方法 SD大鼠20只，隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，每組10只，雌雄各半。實(shí)驗(yàn)組腹腔注射3%戊巴比妥鈉35mg/kg，麻醉后剪開(kāi)左側(cè)臀部皮膚，縱向分離臀部肌肉，暴露并分離坐骨神經(jīng)，雙重結(jié)扎坐骨神經(jīng)，間距1cm，縫合皮膚。對(duì)照組為假手術(shù)組，未做結(jié)扎余操作同前。飼養(yǎng)4周后處死，剝離大鼠雙后肢皮膚，從膝關(guān)節(jié)和踝關(guān)節(jié)處剪下后小腿稱(chēng)重，計(jì)算左腿萎縮百分比【(右側(cè)重量-左側(cè)重量)÷右側(cè)重量×100%】，取小腿肌肉做病理檢查。

2 結(jié)果

實(shí)驗(yàn)組左側(cè)后肢小腿大體觀察明顯發(fā)生萎縮，左腿萎縮百分比為(48.7±8.2)%。光鏡下肌纖維直徑及橫截面積明顯縮小。對(duì)照組左右后肢小腿無(wú)明顯差異。

3 討論

復(fù)制肌萎縮的動(dòng)物模型的方法有常用模型，有尾部懸吊、肢體固定、去神經(jīng)和去肌肉或肌腱、局部藥物注射［1-4］，上述方法各有優(yōu)缺點(diǎn)。肌肉萎縮的發(fā)生機(jī)理有神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)障礙學(xué)說(shuō)、神經(jīng)沖動(dòng)減退學(xué)說(shuō)、氧化應(yīng)激學(xué)說(shuō)。此外，肌肉代謝的紊亂、肌肉張力與緊張性的降低以及細(xì)胞凋亡等在廢用性肌肉萎縮的發(fā)生中可能都具有一定的作用，因此推測(cè)，肌肉萎縮的發(fā)生實(shí)質(zhì)上是由多源性因素引起的［5］。我們采用雙重結(jié)扎坐骨神經(jīng)復(fù)制神經(jīng)源性肌萎縮動(dòng)物模型，其具有操作的可控性，符合多數(shù)神經(jīng)源性肌萎縮為慢性、漸進(jìn)性的病理過(guò)程。

檢測(cè)指標(biāo)除光鏡和電鏡的病理改變還可檢測(cè)以下相關(guān)指標(biāo):1)過(guò)氧化指標(biāo):如丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-px)、羥自由基(HFR)等。2)細(xì)胞凋亡指標(biāo):如腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、半胱天冬酶-3(Caspase-3)等。3)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)指標(biāo):胰島素樣生長(zhǎng)因子-I(IGF-I)、生長(zhǎng)激素(GH)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素3(NT-3)等。4)神經(jīng)沖動(dòng)傳導(dǎo)指標(biāo):乙酰膽堿(ACH)、乙酰膽堿酯酶(AchE)、Ca2+-ATP酶(Ca2+-ATPase)等。

目前肌萎縮主要的防治措施為功能鍛煉、適宜的電刺激、藥物，如具有促進(jìn)合成代謝作用的激素類(lèi)藥物生長(zhǎng)素(GH)、胰島素樣生長(zhǎng)因子I(IGFI);具有抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)作用的抗氧化劑維生素E;Ca2+通道阻斷劑(如nifedipin);糖皮質(zhì)激素抑制劑。但治療效果并不十分明顯。

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