東方草莓的化學成分研究

李 蓉，楊春濤，田 凱，王 韋，孫靜賢，戴建輝，劉曉芳，黃相中,2

(1.云南民族大學 云南省生物高分子功能材料工程技術研究中心，云南 明 650500；2.中國醫(yī)學科學院 北京協(xié)和醫(yī)學院藥物研究所 天然藥物活性物質(zhì)與功能國家重點實驗室，北京 100050)

東方草莓別名野草莓，為薔薇科植物東方草莓(FragariaorientalisLozinsk.)的干燥全草，分布在我國東北、華北、陜西、山西、甘肅、青海、四川以及華中各省.生于山坡草地或林下，海拔在400～6 000 m，朝鮮、蒙古及俄羅斯遠東地區(qū)也有分布[1].中藥以果實入藥，能祛痰止咳，除濕止癢，主治咳嗽痰多，濕疹，腎結石.東方草莓藏藥名為“志達薩增”，以干燥全草入藥，有引吐肺痰，托引腦腔膿血之功效.用于血熱性化濃癥，肺胃瘀血，黃水病膿瘍[2]，為藏藥經(jīng)典驗方“藏藥七十味珍珠丸(然鈉桑培)”[3]、“二十五味珍珠丸”[4]、“骨質(zhì)增生乙組合(壓迫神經(jīng)引起疼痛)”、“八味秦皮丸”[5]等的重要成分.目前，尚未見國內(nèi)外對東方草莓的化學成分的研究報道，僅有對草莓(Fragaria×ananssaDuch.)的化學成分研究的報道[6-8].本文利用現(xiàn)代色譜和波譜分析鑒定手段，對東方草莓的化學成分進行系統(tǒng)研究，為臨床用藥提供科學依據(jù).

1 材料、儀器與試劑

東方草莓采自西藏，經(jīng)云南民族大學楊青松教授鑒定，標本存放于云南民族大學化學與生物技術學院的標本室.

AVANCE Ⅲ 400超導核磁共振儀(瑞士BRUKER公司)；UltraScan ESI-MS (bruker)；Agilent 260半制備色譜儀(安捷倫科技有限公司)；AR224CN電子天平(瑞士梅特勒，精確度為萬分之一)；MS105DU電子分析天平(瑞士梅特勒，精確度為十萬分之一)；AS20500A數(shù)控超聲波清洗器(云南科儀玻有限公司)；JP-150A-8高速多功能粉粹機(永康市久品工貿(mào)有限公司)；暗箱式紫外分析儀(2F-20D，鞏義市予華儀器)；數(shù)顯自動恒溫不銹鋼電熱板(SG-1501A,上海碩光電子科技)，旋轉蒸發(fā)儀(N-1100D-WD,上海愛郎博儀器有限公司)；制備色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C1821.2 × 250 mm, 7 μm；半制備色譜柱：YMC-Pack ODS-A 10 × 250 mm, 7 μm；DW100.P實驗室超純水機(上海和泰儀器有限公司)；乙腈、甲醇為色譜純，磷酸為分析純，超純水.

2 提取與分離

取干燥的東方草莓藥材粗粉425 g用甲醇浸泡后，超聲提取，減壓濃縮回收溶劑，得墨綠色浸膏86 g，用200 mL甲醇溶解浸膏后，加水至乳濁狀后依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，減壓回收溶劑得石油醚部位浸膏15.3 g, 乙酸乙酯部位浸膏20.5 g.

將乙酸乙酯部位浸膏用DMSO溶解后用MCI凝膠柱層析，依次用水、40%、60%、80%和100%的甲醇洗脫，將40%的甲醇洗脫部位減壓濃縮，經(jīng)反相硅膠柱層析、凝膠柱層析、硅膠柱層析及高效液相色譜分離純化得化合物1～7，將60%的甲醇洗脫部位減壓濃縮，經(jīng)反相硅膠柱層析得化合物8.

3 結構鑒定

化合物1：無色結晶，分子式為C15H14O6.(ESI-MS)m/z：289 [M-H]-.1H NMR (400 MHz, MeOD)δ：2.53 (1H, dd,J=8.4, 16.4 Hz, H-4), 2.87 (1H, dd,J=5.6, 16.0 Hz, H-4), 4.00 (1H, m, H-3), 4.58 (1H, d,J=7.2 Hz, H-2), 5.88 (1H, d,J=2.4 Hz, H-6), 5.95 (1H, d,J=2.0 Hz, H-8), 6.74 (1H, dd,J=1.6, 2.0 Hz, H-6′), 6.79 (1H, d,J=8.0 Hz, H-5′), 6.86 (1H, d,J=8.0 Hz, H-2′).13C NMR (100 MHz, MeOD)δ：82.9 (C-2), 68.8 (C-3), 28.5 (C-4), 156.9 (C-5), 96.3 (C-6), 157.6 (C-7), 95.6 (C-8), 157.8 (C-9), 100.9 (C-10), 132.2 (C-1′), 115.0 (C-2′), 146.3 (C-3′), 146.2 (C-4′), 116.1 (C-5′), 120.1 (C-6′).其數(shù)據(jù)與文獻[9]報道一致，鑒定該化合物為(+)-兒茶素.

化合物2：黃色粉末，分子式為C30H26O13.(ESI-MS)m/z：593 [M-H]-.1H NMR (400 MHz, MeOD)δ：7.99 (2H, d,J=9.2 Hz, H-2′, 6′), 6.82 (2H, d,J=8.8 Hz, H-3′, 5′), 6.31 (1H, d,J=2.0 Hz, H-8), 6.13 (1H, d,J=2.0 Hz, H-6), 5.25 (1H, d,J=7.6 Hz, H-1″), 7.40 (1H, d,J=16.0 Hz, H-α), 6.07 (1H, d,J=16.0 Hz, H-β), 7.31 (2H, d,J=8.8 Hz, H-2″, 6″), 6.80 (2H, d,J= 8.8Hz, H-3″, 5″).13C NMR (100 MHz, MeOD)δ：159.3 (C-2), 135.2 (C-3), 179.4 (C-4), 163.0 (C-5), 100.0 (C-6), 165.9 (C-7), 94.8 (C-8), 158.4 (C-9), 105.6 (C-10), 122.7 (C-1′), 132.2 (C-2′,6′), 116.8 (C-3′,5′), 161.5 (C-4′), 103.9 (C-1″), 75.7 (C-2″), 77.9 (C-3″), 71.7 (C-4″), 75.8 (C-5″), 64.3 (C-6″), 146.6 (C-α), 114.7 (C-β), 127.1 (C-1?), 131.2 (C-2?, 6?), 161.2 (C-4?), 116.0 (C-3?, 5?), 168.8 (C-7?).其數(shù)據(jù)與文獻[10]報道一致, 鑒定該化合物為山柰酚-3-O-6″-反式-香豆?；?β-D-葡萄糖苷.

化合物3：無色針狀結晶，分子式為C8H10O2.(ESI-MS)m/z: 131 [M-H]-.1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ：7.05 (2H, d,J=8.1 Hz, H-2, 6), 6.73 (2H, d,J=8.1 Hz, H-3, 5), 2.69 (2H, t,J=7.4 Hz, H-7), 3.64 (2H, dt,J=5.3, 7.3 Hz, H-8).13C NMR (100 MHz, CDCl3)δ：129.4 (C-1), 129.7 (C-2, 6), 115.0 (C-3, 5), 154.8 (C-4), 39.8 (C-7), 64.3 (C-8).其數(shù)據(jù)與文獻[11]報道一致, 鑒定該化合物為對羥基苯乙醇.

化合物4：黃色油狀，分子式為C9H12O3.(ESI-MS)m/z：191 [M+Na]+.1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ：6.83 (1H, H-2), 6.82 (1H, d,J=8.2 Hz, H-5), 6.72 (1H, dd,J=3.1, 3.1 Hz, H-6), 5.80 (1H, s, 3-OH), 3.90 (3H, s, 4-OCH3), 3.84 (3H, t,J=6.4 Hz, CH2CH2OH).13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ：131.8 (C-1), 115.2 (C-2), 145.9 (C-3), 145.4 (C-4), 110.9 (C-5), 120.6 (C-6), 38.7 (C-7), 63.8 (C-8), 56.2 (C-9).其數(shù)據(jù)與文獻[12]報道基本一致, 鑒定該化合物為3-羥基-4-甲氧基苯乙醇.

化合物5：黃色粉末，分子式為C15H10O5.(ESI-MS)m/z：293[M+Na]+.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ：6.80 (1H, s, H-3), 6.20 (1H, d,J=2.4 Hz, H-6), 6.49 (1H, d,J=2.4 Hz, H-8), 7.94 (2H, d,J=8.8 Hz, H-2′, 6′), 6.93 (2H, d,J=9.2 Hz, H-3′,5′), 12.98 (1H, s, 4-OH).13C NMR(100 MHz, DMSO-d6)δ：164.6 (C-2), 103.3 (C-3), 182.2 (C-4), 157.8 (C-5), 99.3 (C-6), 164.2 (C-7), 94.4 (C-8), 161.9 (C-9), 102.9 (C-10), 121.6 (C-1′), 128.9 (C-2′, 6′), 116.4 (C-3′, 5′), 161.6 (C-4′).其波譜數(shù)據(jù)與文獻[13]報道基本一致, 鑒定該化合物為芹菜素.

化合物6：黃色粉末，分子式為C15H10O7.(ESI-MS)m/z：303 [M+H]+.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ：7.67 (1H, d,J=2.5 Hz, H-2′), 7.53 (1H, dd,J=8.5, 2.5 Hz, H-6′), 6.89 (1H, d,J=8.5 Hz, H-5′), 6.19 (1H, d,J=8.5 Hz, H-6), 6.41 (1H, d,J=2.5 Hz, H-8).13C NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ：146.7 (C-2), 135.7 (C-3), 175.8 (C-4), 160.7 (C-5), 98.2 (C-6), 163.9 (C-7), 93.2 (C-8), 156.0 (C-9), 102.9 (C-10), 121.8 (C-1′), 115.0 (C-2′), 145.0 (C-3′), 147.6 (C-4′), 115.6 (C-5′), 119.9 (C-6′).以上數(shù)據(jù)與文獻[14-15]報道的數(shù)據(jù)基本一致，確定該化合物為槲皮素.

化合物7：淡黃色粉末，分子式為C22H22O11.(ESI-MS)m/z：463 [M-H]-.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ：7.59 (1H, d,J=2.5 Hz, H-2′), 7.57 (1H, dd,J=2.5, 8.2 Hz, H-6′), 6.85 (1H, d,J=8.5 Hz, H-5′), 6.40 (1H, d,J=2.5 Hz, H-8), 6.20 (1H, d,J=2.5 Hz, H-6), 5.47 (1H, d,J=7.0 Hz, H-1″), 3.09～3.65 (6H, m, sugar protons).13C NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ：156.3 (C-2), 133.5 (C-3), 177.5 (C-4), 161.0 (C-5), 98.7 (C-6), 164.1 (C-7), 93.4 (C-8), 156.1 (C-9), 104.0 (C-10), 121.5 (C-1′), 115.4 (C-2′), 144.7 (C-3′), 148.4 (C-4′), 116.3 (C-5′), 121.3 (C-6′), 101.2 (C-1″), 74.2 (C-2″), 76.6 (C-3″), 70.2 (C-4″), 77.4 (C-5″), 60.6 (C-6″).以上數(shù)據(jù)與文獻[16]報道的數(shù)據(jù)基本一致，確定該化合物為槲皮素-3-O-β-D-葡糖苷.

化合物8：白色針晶，分子式為C29H50O.(ESI-MS)m/z：414 [M]+.1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ：0.69 (3H, s, CH3-18), 1.02 (3H, s, CH3-19), 0.93 (3H, d,J=6.50 Hz, CH3-21), 0.84 (3H, d,J=3.69 Hz, CH3-26), 0.81 (3H, s, CH3-27), 0.85 (3H, d,J=1.84 Hz, CH3-29), 3.53 (1H, m, H-3), 5.36 (1H, d,J=4.98 Hz, H-6).13C NMR (100 MHz, CDCl3)δ：32.4 (C-1), 31.8 (C-2), 70.3 (C-3), 42.4 (C-4), 140.9 (C-5), 121.8 (C-6), 32.1 (C-7,8), 50.3 (C-9), 36.6 (C-10), 21.5 (C-11), 28.5 (C-12), 45.9 (C-13), 56.9 (C-14), 24.4 (C-15), 39.9 (C-16), 54.6 (C-17), 12.1 (C-18), 19.2 (C-19), 36.3 (C-20), 18.9 (C-21), 26.3 (C-22), 34.1 (C-23), 42.4 (C-24), 23.3 (C-25), 12.1 (C-26), 29.3 (C-27), 19.9 (C-28), 19.7 (C-29).以上數(shù)據(jù)與文獻[17]報道的數(shù)據(jù)基本一致，確定該化合物為β-谷甾醇.

4 結語

從東方草莓甲醇提取物中分離得到了8個化合物.其中化合物1、2、5、6、7屬于黃酮類化合物，化合物3、4屬于酚類化合物，化合物8屬于甾體類化合物.化合物1～8均首次從該植物中分得.

參考文獻:

[1] 吳征鎰.中國植物志(37卷)[M].北京：科學出版社，2004：235-355.

[2] 賈敏如，李星煒.中國民族藥志要[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2005：281-281.

[3] 加永澤培，杜元灝.藏藥七十味珍珠丸對大鼠腦缺血梗塞面積的影響[J].西藏醫(yī)藥雜志, 2012，33(3)：56-57.

[4] 王智森，趙獻超，王凱梅，等.二十五味珍珠丸治療腦出血后遺癥臨床療效觀察[J].中西醫(yī)結合研究，2013，8，5(4)：172-175.

[5] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準[S].藏藥第1冊.1995：241．

[6] SEERAM N P，LEE R，SCHEULLER H S，et al.Identification of phenolic compounds in strawberries by liquid chromatography electrospray ionization mass spectroscopy[J].Food Chemistry，2006，97：1-11.

[7] AABY K，MAZUR S，NES A，et al.A phenolic compounds in strawberry (Fragaria × ananassa Duch.) fruits：Composition in 27 cultivars and changes during ripening[J].Food Chemistry，2012，132：86-97.

[8] 阮金蘭，陳靜波，趙曉亞，等.草莓的化學成分研究[J].中國中藥雜志，2001，26(9): 610-612.

[9] SHEN C C，CHANG Y S，Hott L K.Nuclear magnetic resonance studies of 5,7-dihydroxyflavonoids [J].Phytochemistry，1993，34(3)：843-845.

[10] 張沛，薛瑩，青琳森，等.月季花的化學成分研究[J].中草藥，2010，41(10)：1616-1618.

[11] 薛震，李帥，王素娟，等.山慈菇Cremastraappendiculata化學成分[J].中國中藥雜志，2005，30 (7)：511-513.

[12] ZHANG X，GAO H，WANG N L，et al.Phenolic components from dendrobium nobile[J].Chin Tradit Herb Drugs，2006，5(37)：652-655.

[13] 楊念云，段金廒，李萍，等.連錢草中的黃酮類化學成分[J].中國藥科大學學報，2005，36(3)：210-212.

[14] 葉冠，范明松，黃成鋼.芨芨草中的黃酮類化學成分的分離與鑒定[J].中草藥，2006，37(6)：821-823.

[15] XU X Q，YE H Z，WANG W，et al.Determination of flavonoids inHouttuyniacordataThunb.andSaururuschinesis(Lour.) Bail by capillary electrophoresis with electrochemical detection [J].Talanta，2006，68(3)：759-764.

[16] 唐于平，王穎，樓鳳昌，等.銀杏葉中的黃酮醇苷類成分[J].藥學學報，2000，35(5)：363-366.

[17] ZHANG B B，DAI Y，LIAO Z X.Chemical constituents ofSaussureaeopygmaea[J].Chinese Journal of Natural Medicines，2011，9(1)：33-37.