Fascin在膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)及意義＊

孟淑娟，陳小君，尹 豐，王 勇，于永利

（唐山鋼鐵集團(tuán)有限公司醫(yī)院1．病理科，2．泌尿科；3．曹妃甸區(qū)工人醫(yī)院，河北 唐山063000）

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤，90%以上為膀胱尿路上皮癌，其生物學(xué)行為表現(xiàn)為易發(fā)、多發(fā)和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。復(fù)發(fā)和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移是膀胱癌治療失敗的主要原因。腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力的增高是實(shí)現(xiàn)浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的前提。侵襲的腫瘤細(xì)胞常表現(xiàn)出特殊的形態(tài)特征［1］。Fascin蛋白是細(xì)胞骨架蛋白的一種，能與F－肌動(dòng)蛋白緊密結(jié)合，與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力和細(xì)胞間的相互作用密切相關(guān)，其作為結(jié)合細(xì)胞突起作用的結(jié)合蛋白，來(lái)輔助完成細(xì)胞附著、細(xì)胞之間相互作用和細(xì)胞移動(dòng)的功能［2］。

1 對(duì)象與方法

1．1 研究對(duì)象 收集2009年9月～2012年10月在唐鋼醫(yī)院泌尿外科手術(shù)切除并保存完好的石蠟標(biāo)本：膀胱尿路上皮癌109例，均為初發(fā)病例，術(shù)前均未接受放、化療；年齡55～85歲，中位年齡68歲，其中男性78例，女性31例。腺性膀胱炎20例，年齡38～74歲，中位年齡58歲，其中男性15例，女性5例。對(duì)照組為10例癌旁膀胱粘膜組織，均取自開(kāi)放性手術(shù)斷端，距腫瘤邊緣大于5cm，經(jīng)病理確診無(wú)癌組織浸潤(rùn)。所有病例的臨床病理資料完整，經(jīng)高年資病理醫(yī)師復(fù)查H．E切片，證實(shí)病理診斷，并確定每例膀胱尿路上皮癌的組織學(xué)分級(jí)及臨床分期。根據(jù)1973年WHO公布的膀胱惡性腫瘤病理分級(jí)方法：G1：28例，G2：45例，G3：36例。臨床分期根據(jù)UICC－TNM標(biāo)準(zhǔn)：淺表型（Tis～T1）：63例，浸潤(rùn)型（T2～T4）：46例。腫瘤單發(fā)35例，多發(fā)74例。術(shù)后證實(shí)18例伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，91例無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

1．2 實(shí)驗(yàn)試劑 鼠抗人Fascin單克隆抗體（工作液，克隆號(hào)FCN01），S－P通用二抗試劑盒，DAB顯色劑均購(gòu)自上海太陽(yáng)生物科技有限公司。

1．3 試驗(yàn)方法

1．3．1 采用免疫組化S－P法染色 組織經(jīng)10%中性甲醛固定，石蠟包埋，切成厚度4μm組織切片；將組織切片貼附于經(jīng)多聚賴氨酸處理的載玻片上，并經(jīng)60℃烤2小時(shí)。實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。陽(yáng)性對(duì)照用脾組織切片，BPS代替一抗作陰性對(duì)照。

1．3．2 免疫組化結(jié)果判定 所有組織切片的評(píng)分由兩名病理醫(yī)師在不知情的前提下各自獨(dú)立進(jìn)行，遇到結(jié)果不一致時(shí)，兩名醫(yī)師討論，得出綜合分析意見(jiàn)。

Fascin表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)為棕黃色至棕褐色顆粒，定位于細(xì)胞胞漿和（或）胞膜，依據(jù)染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)得分相乘評(píng)分。①染色強(qiáng)度計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)：用以確定為陽(yáng)性的乳腺癌標(biāo)本的反應(yīng)強(qiáng)度作為對(duì)照，無(wú)色為0分、表達(dá)強(qiáng)度弱于它為1分、與其相同為2分、比之強(qiáng)為3分。②陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)：普通光鏡相同放大倍數(shù)下計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，少于25%為1分、25%～50%為2分、51%～75%為3分、75%以上為4分。兩項(xiàng)得分相乘分為4個(gè)級(jí)別：0分（－）、1～4分（＋，弱陽(yáng)性）、5～8分（＋＋，中度陽(yáng)性）、9～12分（＋＋＋，強(qiáng)陽(yáng)性）。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析時(shí)，（＋）以上視為陽(yáng)性。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 運(yùn)用SPSS 11．5統(tǒng)計(jì)軟件，數(shù)據(jù)處理采用χ2檢驗(yàn)和Spearman相關(guān)性檢驗(yàn)，小樣本資料采用Fisher精確概率檢驗(yàn)法，P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

Fascin在膀胱癌旁粘膜中無(wú)表達(dá)，20例腺性膀胱炎中2例（10%）表達(dá)弱陽(yáng)性，其余表達(dá)陰性；109例膀胱尿路上皮癌中18例（16．5%）表達(dá)陰性，91例（83．5%）表達(dá)陽(yáng)性：其中39例（35．8%）為弱陽(yáng)性，35例（32．1%）為中度陽(yáng)性，17例（15．6%）為強(qiáng)陽(yáng)性。膀胱癌旁粘膜組與腺性膀胱炎組表達(dá)差異無(wú)顯著性（P＞0．05），膀胱癌旁粘膜組與膀胱尿路上皮癌組、腺性膀胱炎組與膀胱尿路上皮癌組比較，差異有顯著性（P＜0．05），見(jiàn)表1，圖1。

表1 Fascin在膀胱癌旁粘膜、腺性膀胱炎及膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)Table 1 The expression of fascin in bladder cancer adjacent mucosa，cystitis glandular and bladder urothelial carcinoma

圖1 Fascin在膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)（IHC×200）Fig．1 Negative expression of fascin in bladder urothelial carcinoma（IHC×200）

Fascin在不同組織學(xué)分級(jí)的膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)陽(yáng)性率分別為：G1：71．4%（20／28），G2：80．0%（36／45），G3：97．2%（35／36），F(xiàn)ascin的表達(dá)陽(yáng)性率在不同的組織學(xué)分級(jí)中，總體有顯著性差異（P＜0．05）。不同臨床分期Fascin表達(dá)的陽(yáng)性率為淺表型（Tis～T1）74．6%（47／63），浸潤(rùn)型（T2～T4）95．7%（44／46），F(xiàn)ascin在膀胱尿路上皮癌淺表型（Tis～T1）及浸潤(rùn)型（T2～T4）分組間陽(yáng)性率的差異顯著（P＜0．05）。Fascin有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽(yáng)性率為100%（18／18）、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組為80．2%（73／91），其陽(yáng)性率有顯著性差異（P＜0．05），見(jiàn)表2。

表2結(jié)果顯示，在膀胱尿路上皮癌的患者中，F(xiàn)ascin的表達(dá)與性別、腫瘤數(shù)目等臨床病理特征無(wú)關(guān)，而與腫瘤臨床分期和組織學(xué)分級(jí)則呈正相關(guān)。隨著膀胱尿路上皮癌的臨床分期和組織學(xué)分級(jí)的增高，腫瘤細(xì)胞中Fascin表達(dá)增強(qiáng)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的Fascin的表達(dá)明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的。

表2 膀胱尿路上皮癌中Fascin的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系Table 2 The relationship between expression of Fascin in bladder urothelial carcinoma and clinical pathological parameters

3 討論

Fascin蛋白是細(xì)胞骨架蛋白的一種，分子量為55kD，由Bryan等［3］首先在海膽卵母細(xì)胞胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn)，其結(jié)構(gòu)獨(dú)特、進(jìn)化保守，廣泛存在于無(wú)脊椎動(dòng)物與脊椎動(dòng)物之中。Fascin在正常上皮細(xì)胞中不表達(dá)或較低，而在骨骼肌和平滑肌細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞、神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等一些特殊的細(xì)胞中高表達(dá)［4］。研究發(fā)現(xiàn)在人體多種上皮來(lái)源的腫瘤細(xì)胞中出現(xiàn)Fascin的表達(dá)上調(diào)，并與這些腫瘤的高病理分級(jí)和臨床分期及侵襲轉(zhuǎn)移等相關(guān)［5～8］。因此，在上皮惡性腫瘤中Fascin的表達(dá)上調(diào)是一種普遍現(xiàn)象，與腫瘤的惡性生物學(xué)行為存在一定的關(guān)系。mi－133a和miR－145存在FSCN1mRNA 的靶序列，可直接與FSCN1mRNA結(jié)合，從而抑制FSCN1mRNA和蛋白的表 達(dá)［9］。 實(shí) 驗(yàn) 發(fā) 現(xiàn) 轉(zhuǎn) 染 miR－133a、mi－145 和 si－FSCN1的膀胱癌細(xì)胞活動(dòng)力明顯被抑制，同時(shí)Fascin在侵襲性膀胱癌中的表達(dá)明顯高于非侵襲性膀胱癌。有研究表明Fascin蛋白在正常膀胱黏膜中不表達(dá)，在膀胱良性病變?nèi)绨螂籽祝ㄏ傩?、囊性）、?jīng)典的外生性乳頭狀瘤、內(nèi)翻性乳頭狀瘤中表達(dá)無(wú)增加；但在表淺乳頭狀膀胱癌中42%呈片狀或弱彌漫表達(dá)、浸潤(rùn)性膀胱癌95%呈強(qiáng)彌漫分布；并且Fascin表達(dá)增強(qiáng)常常出現(xiàn)在微浸潤(rùn)前沿腫瘤細(xì)胞中；這些均提示Fascin表達(dá)增強(qiáng)與膀胱癌侵襲力增加具有一致性［10，11］。Fascin在膀胱癌的浸潤(rùn)中發(fā)揮著重要作用，F(xiàn)ascin在浸潤(rùn)性尿路上皮癌中的表達(dá)明顯高于非浸潤(rùn)性尿路上皮癌，但對(duì)于腫瘤的組織學(xué)分級(jí)的關(guān)系還需要進(jìn)一步研究。

本實(shí)驗(yàn)說(shuō)明Fascin的表達(dá)可能對(duì)膀胱癌的侵襲和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有一定的促進(jìn)作用，F(xiàn)ascin的高表達(dá)使患者更易出現(xiàn)淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，膀胱癌分級(jí)越高，患者預(yù)后越差。這與以往Fascin蛋白在上皮性腫瘤組織中的研究結(jié)果一致。

研究證實(shí)Fascin的過(guò)表達(dá)會(huì)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞增殖周期變短，細(xì)胞膜突起增多，細(xì)胞間連接消失，粘附力下降，細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力增強(qiáng)［12］。綜合分析Fascin在膀胱尿路上皮癌中表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)在組織學(xué)分級(jí)較高的腫瘤中以及腫瘤浸潤(rùn)邊緣細(xì)胞Fascin蛋白染色較強(qiáng)，腫瘤分化越低其染色強(qiáng)度越強(qiáng)。同時(shí)可見(jiàn)偽足樣突起的細(xì)胞，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中該腫瘤細(xì)胞數(shù)較多。分析其原因，可能為Fascin表達(dá)使腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞骨架重排，細(xì)胞膜突起增多，使其具有較強(qiáng)的侵襲、轉(zhuǎn)移能力，與高級(jí)別腫瘤更具有侵襲性，更易發(fā)生轉(zhuǎn)移相關(guān)。在試驗(yàn)中，在乳頭狀尿路上皮癌中，分化好的乳頭中央軸心血管染色陽(yáng)性，而緊鄰其膀胱癌細(xì)胞染色陽(yáng)性，但是乳頭邊緣的細(xì)胞卻染色陰性，形成明顯的對(duì)比。分析原因，可能與靠近乳頭軸心的腫瘤細(xì)胞侵襲性較強(qiáng)有關(guān)，具體機(jī)制和原因有待進(jìn)一步研究。

在上皮性來(lái)源的腫瘤中Fascin表達(dá)上調(diào)具有普遍性，但陽(yáng)性表達(dá)率有明顯差異，在乳腺癌中陽(yáng)性率只有16%［12］，而在非小細(xì)胞肺癌中陽(yáng)性率為98%［13］。Fascin的高表達(dá)與腫瘤的惡性程度和患者預(yù)后有一定的聯(lián)系，但其調(diào)節(jié)通路還在進(jìn)一步研究中。有觀點(diǎn)認(rèn)為不同組織來(lái)源的腫瘤在發(fā)生機(jī)制上可能存在差異，同一腫瘤也可能受多種途徑調(diào)節(jié)，但Fascin表達(dá)與各腫瘤不同的發(fā)生機(jī)制存在或多或少的聯(lián)系。

4 結(jié)論

Fascin蛋白在不同臨床分期和組織學(xué)分級(jí)及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的膀胱癌中的陽(yáng)性率存在差異，本研究結(jié)果提示可將其作為預(yù)測(cè)膀胱癌惡性程度及患者預(yù)后的一種指標(biāo)。

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