嗜酸乳桿菌對(duì)感染大腸桿菌O157∶H7小鼠腸道微生物區(qū)系的影響

王婷婷，李丹鳳，劉 賓，林海君，霍貴成

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，乳品科學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江哈爾濱150030）

嗜酸乳桿菌對(duì)感染大腸桿菌O157∶H7小鼠腸道微生物區(qū)系的影響

王婷婷，李丹鳳，劉 賓，林海君，霍貴成*

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，乳品科學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江哈爾濱150030）

分析了小鼠在感染大腸桿菌O157∶H7期間腸道微生物區(qū)系的變化及嗜酸乳桿菌KLDS AD1對(duì)其腸道微生物的調(diào)節(jié)作用。結(jié)合小鼠表象特征，探討了嗜酸乳桿菌KLDS AD1對(duì)小鼠腹瀉的治療效果。研究將小鼠分成3組，分別是PBS對(duì)照組、大腸桿菌-PBS對(duì)照組和大腸桿菌-KLDS AD1組，對(duì)實(shí)驗(yàn)組小鼠連續(xù)7d灌胃大腸桿菌致病后，再連續(xù)7d灌胃嗜酸乳桿菌KLDS AD1，期間采集小鼠糞便利用選擇性培養(yǎng)基對(duì)菌群作平板計(jì)數(shù)。結(jié)果表明：嗜酸乳桿菌KLDS AD1可以極顯著地提高感染大腸桿菌O157∶H7小鼠的體重（p＜0.01）；小鼠在感染大腸桿菌O157∶H7后糞便中致病性大腸桿菌、腸桿菌和腸球菌等條件致病菌數(shù)量顯著增加（p＜0.05），乳酸菌和雙歧桿菌等益生菌顯著減少（p＜0.05）。灌胃嗜酸乳桿菌KLDS AD1后，小鼠糞便中致病性大腸桿菌、腸桿菌和腸球菌均顯著降低（p＜0.05），而乳酸菌和雙歧桿菌增加極顯著（p＜0.01）。證實(shí)嗜酸乳桿菌KLDS AD1對(duì)感染大腸桿菌O157∶H7小鼠腸道微生物平衡具有一定的調(diào)節(jié)作用，對(duì)其引起的腹瀉有一定的治療效果。

嗜酸乳桿菌，大腸桿菌，腸道微生物，微生態(tài)平衡，疾病

出血性大腸桿菌O157（Enterohemorrhagic E.coli，EHEC）是一種食源性致病菌，能引起以急性出血性腹瀉為典型特征的疾病，典型菌株為EHEC O157∶H7，主要引起嬰幼兒腹瀉、出血性結(jié)腸炎和溶血性尿毒癥等[1]。由于抗生素具有耐藥性、抗藥性、殘留性及毒副作用，在臨床上用于治療疾病時(shí)不僅影響動(dòng)物和人類(lèi)的健康，而且還導(dǎo)致“超級(jí)病毒”的出現(xiàn)，威脅人類(lèi)的生存。研究表明，一些益生菌能有效地預(yù)防和治療大腸桿菌引起的腹瀉[2-3]，作為一種抗生素替代品，受到越來(lái)越多的關(guān)注。

嗜酸乳桿菌廣泛存在于人和一些動(dòng)物的腸道中，是益生菌中最具代表性的菌種。嗜酸乳桿菌通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)定殖位點(diǎn)、產(chǎn)生有機(jī)酸如乳酸和醋酸降低腸道pH、產(chǎn)生細(xì)菌素、產(chǎn)過(guò)氧化氫等[4]抑制病原菌如致病性大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和沙門(mén)氏菌的定殖生長(zhǎng)[5]；通過(guò)調(diào)節(jié)腸道微生物區(qū)系[6-7]，預(yù)防腹瀉等腸道疾病的發(fā)生[8-9]，維護(hù)人類(lèi)健康。

本研究以嗜酸乳桿菌KLDS AD1為目標(biāo)益生菌，通過(guò)建立腸道菌群失調(diào)動(dòng)物模型和灌喂益生菌方法，采用體外微生物培養(yǎng)技術(shù)，研究BALB/c小鼠在感染O157∶H7期間及感染后補(bǔ)充嗜酸乳桿菌KLDS AD1期間腸道微生態(tài)變化，分析小鼠在患病和補(bǔ)充KLDS AD1期間腸道微生物變化的差異，旨在從腸道微生物區(qū)系的動(dòng)態(tài)變化來(lái)探討嗜酸乳桿菌KLDS AD1對(duì)腹瀉小鼠疾病的治療效果。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

大腸桿菌O157∶H7（Escherichia coli O157∶H7 ATCC 43889） 由黑龍江省出入境檢驗(yàn)檢疫局提供；嗜酸乳桿菌KLDS AD1（Lactobacillus acidophilus KLDS AD1） 購(gòu)自東北農(nóng)業(yè)大學(xué)教育部乳品科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室菌種庫(kù)；BALB/c小鼠，雌性，清潔級(jí)，6～8周 購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，保持飼養(yǎng)環(huán)境溫度（23±2）℃，每天人工燈光照明12h，標(biāo)準(zhǔn)小鼠飼料喂養(yǎng)，自由飲水；乳酸菌選擇性培養(yǎng)基（M 17）、雙歧桿菌選擇性培養(yǎng)基（TPY）、腸桿菌選擇性培養(yǎng)基（VRBDA）、大腸桿菌選擇性培養(yǎng)基（麥康凱培養(yǎng)基）、腸球菌選擇性培養(yǎng)基（疊氮鈉-結(jié)晶紫-七葉苷培養(yǎng)基） 購(gòu)自青島海博生物有限公司。

DHP-9272電熱恒溫培養(yǎng)箱 上海-恒科技有限公司；HVE-50HIRAYAMA全自動(dòng)高壓滅菌鍋、DK-98-11A電熱恒溫水浴鍋 天津市泰斯特儀器有限公司；DH-101-3BS電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 天津市中環(huán)實(shí)驗(yàn)電爐有限公司；XK96-A快速混勻器 姜堰市新康醫(yī)療器械有限公司；Model 680酶標(biāo)儀 美國(guó)Beckman公司；VD-1320潔凈工作臺(tái) 北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司；LD4-2低速離心機(jī) 北京醫(yī)用離心機(jī)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 灌胃液的制備 將培養(yǎng)至穩(wěn)定期（18h）的嗜酸乳桿菌KLDS AD1和大腸桿菌菌液5000×g，4℃，10min離心收集菌體，無(wú)菌PBS清洗三次，懸浮于一定體積的無(wú)菌PBS，調(diào)整菌濃度108CFU/mL，4℃儲(chǔ)存?zhèn)涔辔竅10-11]。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)計(jì) 實(shí)驗(yàn)將小鼠分成三組（Ⅰ組：PBS，Ⅱ組：大腸桿菌-PBS，Ⅲ組：大腸桿菌-嗜酸乳桿菌）。每天中午12：00灌胃，灌喂體積按10mL/kg（菌懸液/小鼠體重）進(jìn)行[12]。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案如表1所示。

表1 小鼠分組及灌胃設(shè)計(jì)表Table.1 Grouping of mice and corresponding intragastric administration

1.2.3 小鼠的表象觀測(cè) 在實(shí)驗(yàn)小鼠灌胃期間，每天觀察并記錄各組小鼠生長(zhǎng)狀態(tài)，包括進(jìn)食情況、外觀毛發(fā)、糞便形態(tài)和體重。

1.2.4 小鼠腸道菌群的檢測(cè) 每天早上9∶00用逼迫法無(wú)菌采取小鼠糞便，將其溶于相應(yīng)體積的無(wú)菌生理鹽水中[13]，在漩渦振蕩器上將糞便充分溶解，進(jìn)行10倍梯度稀釋?zhuān)謩e取10-4、10-5、10-6三個(gè)稀釋度進(jìn)行平板計(jì)數(shù)，每個(gè)稀釋做3個(gè)平行。VRBDA和麥康凱培養(yǎng)基在37℃微好氧條件下培養(yǎng)24h，腸球菌和TPY培養(yǎng)基在37℃厭氧條件下培養(yǎng)72h，M17培養(yǎng)基在35℃厭氧條件下培養(yǎng)72h，取特征性菌落進(jìn)行形態(tài)鑒定，計(jì)數(shù)平板中菌落數(shù)[14]，計(jì)算出每g糞便中的菌含量（cfu/g），結(jié)果以活菌數(shù)對(duì)數(shù)值lg cfu/g表示[15]。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用x±SD表示，EXCEL軟件做t-檢驗(yàn)。受試樣品是否具有調(diào)節(jié)腸道菌群作用的判斷參考趙勝娟等的實(shí)驗(yàn)方法[16]。

2 結(jié)果與分析

2.1 嗜酸乳桿菌KLDS AD1對(duì)感染大腸桿菌O157∶H7小鼠表象及體重的影響

在實(shí)驗(yàn)小鼠灌喂期間，每天觀察各組小鼠生長(zhǎng)狀態(tài)，包括進(jìn)食情況、外觀毛發(fā)、糞便形態(tài)和體重。當(dāng)小鼠出現(xiàn)水樣稀便，進(jìn)食量減少或毛發(fā)無(wú)光澤時(shí)，可以判斷小鼠已經(jīng)患病。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)小鼠的表象觀察發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)第4d，Ⅱ組和Ⅲ組小鼠開(kāi)始精神萎靡，并伴有不同程度的腹瀉現(xiàn)象，小鼠毛發(fā)無(wú)光澤，進(jìn)食量減少，表現(xiàn)出明顯的病癥，說(shuō)明病變模型建立成功。從第8d開(kāi)始，Ⅲ組小鼠在灌喂L.acidophilus KLDS AD1后進(jìn)食量逐漸增加，病癥有所緩解。

圖1 嗜酸乳桿菌KLDS AD1對(duì)感染大腸桿菌O157∶H7小鼠體重的影響Fig.1 Effect of L.acidophilus KLDS AD1 on weight of mice infected with E.coli O157∶H7

體重變化見(jiàn)圖1。由圖1可知，Ⅱ組和Ⅲ組小鼠體重在開(kāi)始灌喂大腸桿菌起就開(kāi)始明顯減少。從第9d開(kāi)始，Ⅲ組小鼠體重有所上升，雖仍低于空白組，但與Ⅱ組未補(bǔ)充L.acidophilus KLDS AD1的小鼠相比較，體重差異極顯著（p＜0.01），說(shuō)明L.acidophilus KLDS AD1可以緩解小鼠由于感染大腸桿菌O157∶H7造成的體重減輕、腹瀉等癥狀。

2.2 嗜酸乳桿菌KLDS AD1對(duì)感染大腸桿菌O157∶H7小鼠腸道微生物區(qū)系的影響

2.2.1 L.acidophilus KLDS AD1對(duì)感染大腸桿菌O157∶H7小鼠腸道致病性大腸桿菌的影響 大腸桿菌作為腸道條件致病菌在菌群失衡的情況下使機(jī)體免疫力下降，引起相應(yīng)的腸道疾病。

圖2 嗜酸乳桿菌KLDS AD1對(duì)感染大腸桿菌O157∶H7小鼠腸道致病性大腸桿菌的影響Fig.2 Effect of L.acidophilus KLDS AD1 on Escherichia coli of mice infected with E.coli O157∶H7

由圖2可知，在小鼠灌喂大腸桿菌期間，其腸道內(nèi)致病性大腸桿菌的數(shù)量明顯增加，且在第7d達(dá)到最大值，這與小鼠患病表象特征是相對(duì)應(yīng)的，說(shuō)明腸道致病菌的增加已經(jīng)引起疾病的發(fā)生。Ⅱ組在第8d停止灌喂大腸桿菌后致病性大腸桿菌的數(shù)量仍處于較高水平。對(duì)Ⅲ組小鼠灌喂L.acidophilus KLDS AD1后，腸道內(nèi)的致病性大腸桿菌數(shù)量明顯減少，活菌數(shù)量級(jí)從8減少到6，在第11d達(dá)到空白組的水平，并且與Ⅱ組未補(bǔ)充L.acidophilus KLDS AD1的小鼠腸道內(nèi)致病性大腸桿菌有顯著性差異（p＜0.05），說(shuō)明L.acidophilus KLDS AD1對(duì)腸道內(nèi)的大腸桿菌具有明顯的抑制或排斥作用。

2.2.2 L.acidophilus KLDS AD1對(duì)感染大腸桿菌O157∶H7小鼠腸桿菌類(lèi)的影響 腸桿菌為條件致病菌，既包括有益菌也包括有害菌，當(dāng)機(jī)體處于健康狀態(tài)時(shí)，有益菌占優(yōu)勢(shì)，機(jī)體維持正常，當(dāng)受到外界干擾或自身機(jī)體失調(diào)時(shí)，有害菌數(shù)量增加，從而引起機(jī)體發(fā)生病變。

圖3 嗜酸乳桿菌KLDS AD1對(duì)感染大腸桿菌O157∶H7小鼠腸桿菌的影響Fig.3 Effect of L.acidophilus KLDS AD1 on Enterobacteria of mice infected with E.coli O157∶H7

由圖3可知，Ⅰ組小鼠腸道內(nèi)腸桿菌數(shù)量相對(duì)較低且保持穩(wěn)定，只是從7d開(kāi)始有上升的趨勢(shì)，在15d時(shí)增加了一個(gè)數(shù)量級(jí)，可能是由于小鼠個(gè)體機(jī)能的差異所致，相對(duì)于其他兩組的變化，空白組仍在可控制之內(nèi)[15]。Ⅱ組和Ⅲ組在灌喂大腸桿菌后腸桿菌數(shù)量明顯上升，活菌數(shù)量級(jí)分別由6增加到8和9，且Ⅱ組在第9d停止灌喂大腸桿菌后仍有上升的趨勢(shì)。在灌喂L.acidophilus KLDS AD1后，Ⅲ組小鼠腸道內(nèi)腸桿菌數(shù)量開(kāi)始下降，在第15d，與Ⅱ組未補(bǔ)充L.acidophilus KLDS AD1的小鼠有顯著性差異（p＜0.05），與Ⅰ組差異不顯著（p＞0.05），說(shuō)明L.acidophilus KLDS AD1可以有效地抑制腸道內(nèi)的條件致病菌。

2.2.3 L.acidophilus KLDS AD1對(duì)感染大腸桿菌O157∶H7小鼠腸球菌的影響 由圖4可知，三組小鼠腸道內(nèi)腸球菌數(shù)量都有所上升，且灌喂大腸桿菌的Ⅱ組和Ⅲ組與Ⅰ組沒(méi)有顯著性差異（p＞0.05），說(shuō)明大腸桿菌在前期對(duì)腸道內(nèi)腸球菌影響較小，可能是由于小鼠腸道微生物對(duì)其有一定的調(diào)節(jié)作用，或者是小鼠自身對(duì)致病菌有一定的防御能力。Ⅱ組腸球菌在第9d仍保持較高水平，結(jié)合小鼠的表象特征發(fā)現(xiàn)，雖然停止灌喂大腸桿菌，但體內(nèi)較多的大腸桿菌已經(jīng)導(dǎo)致腸道內(nèi)微生物菌群失衡，使得條件致病菌數(shù)量增加，從而引起腹瀉的發(fā)生，而Ⅲ組在補(bǔ)充了L.acidophilus KLDS AD1后，腸球菌數(shù)量明顯下降，從第11d開(kāi)始與Ⅱ組相比具有顯著性差異（p＜0.05），說(shuō)明L.acidophilus KLDS AD1可以通過(guò)抑制腸道內(nèi)條件致病菌而調(diào)節(jié)腸道微生物菌群平衡，從而抑制腹瀉的發(fā)生。

圖4 嗜酸乳桿菌KLDS AD1對(duì)感染大腸桿菌O157∶H7小鼠腸球菌的影響Fig.4 Effect of L.acidophilus KLDS AD1 on Enterococcus of mice infected with E.coli O157∶H7

2.2.4 L.acidophilus KLDS AD1對(duì)感染大腸桿菌O157∶H7小鼠腸道乳酸菌的影響 乳酸菌作為益生菌和腸道微生物的主要成員，具有調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡和增強(qiáng)機(jī)體免疫系統(tǒng)的功能，乳酸菌等有益菌的變化與機(jī)體健康有密切的關(guān)系。

由圖5可知，Ⅰ組乳酸菌數(shù)量維持在較高水平，Ⅱ組和Ⅲ組在灌喂大腸桿菌后乳酸菌類(lèi)數(shù)量下降，第5d時(shí)與Ⅰ組具有顯著性差異（p＜0.05），其中Ⅱ組在停止灌喂大腸桿菌后仍有下降的趨勢(shì)；Ⅲ組補(bǔ)充L.acidophilus KLDS AD1后，于第9d后乳酸菌類(lèi)數(shù)量明顯增加，甚至超過(guò)Ⅰ組，與Ⅱ組相比，差異極顯著（p＜0.01）。說(shuō)明L.acidophilus KLDS AD1在抑制有害菌的同時(shí)，也增加了有益菌的生長(zhǎng)，并改善了患病小鼠腸道內(nèi)微生物菌群。

2.2.5 L.acidophilus KLDS AD1對(duì)感染大腸桿菌O157∶H7小鼠腸道雙歧桿菌的影響 由圖6可知，Ⅰ組雙歧桿菌數(shù)量相對(duì)穩(wěn)定，與Ⅰ組相比，Ⅱ組和Ⅲ組小鼠在灌喂大腸桿菌后第3d數(shù)量下降顯著（p＜0.05），其中Ⅱ組小鼠在停止灌喂大腸桿菌后仍有下降的趨勢(shì)；Ⅲ組小鼠補(bǔ)充L.acidophilus KLDS AD1后，雙歧桿菌數(shù)量明顯增加，到15d幾乎增加三個(gè)活菌數(shù)量級(jí)，并與未補(bǔ)充L.acidophilus KLDS AD1的Ⅱ組相比，差異性極顯著（p＜0.01）。說(shuō)明L.acidophilus KLDS AD1對(duì)腸道雙歧桿菌的增殖具有明顯的促進(jìn)作用，對(duì)感染大腸桿菌后腸道微生物菌群失調(diào)具有明顯的改善作用。

圖5 嗜酸乳桿菌KLDS AD1對(duì)感染大腸桿菌O157∶H7小鼠乳酸菌的影響Fig.5 Effect of L.acidophilus KLDS AD1 on Lactobacillus of mice infected with E.coli O157∶H7

圖6 嗜酸乳桿菌KLDS AD1對(duì)感染大腸桿菌O157∶H7小鼠雙歧桿菌的影響Fig.6 Effect of L.acidophilus KLDS AD1 on Bifidobacterium of mice infected with E.coli O157∶H7

2.3 討論

實(shí)驗(yàn)初期，小鼠腸道中乳酸菌和雙歧桿菌初始濃度較高，可以在短時(shí)間內(nèi)通過(guò)與病原菌競(jìng)爭(zhēng)黏附位點(diǎn)、釋放抑菌物質(zhì)等作用抑制病原菌的繁殖，然而持續(xù)增加的大腸桿菌O157∶H7利用腸道內(nèi)蛋白質(zhì)和氨基酸產(chǎn)胺，刺激黏膜導(dǎo)致內(nèi)毒素、外毒素的吸收，致使腸道內(nèi)滲透壓升高，使小鼠在第3d開(kāi)始出現(xiàn)腹瀉現(xiàn)象。腸道內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被致病菌過(guò)多利用致使乳酸菌和雙歧桿菌數(shù)量減少，條件致病菌大量繁殖，擾亂了腸道微生物平衡，進(jìn)而會(huì)引起消化不良、腸炎、腹瀉等一系列腸道疾病，及時(shí)補(bǔ)充益生菌對(duì)治療腸道疾病具有顯著的作用[17]。嗜酸乳桿菌KLDS AD1的補(bǔ)充不僅增加了乳酸菌本身的活菌數(shù)，而且促進(jìn)了雙歧桿菌的繁殖，并減少了大腸桿菌、腸桿菌和腸球菌的數(shù)量。結(jié)合體外實(shí)驗(yàn)分析，一方面是由于嗜酸乳桿菌KLDS AD1對(duì)大腸桿菌等致病菌具有抑制作用[5]，另一方面，益生菌可以增強(qiáng)腸道黏膜免疫屏障作用，調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)，預(yù)防和治療腸道感染[18]。雙歧桿菌的增加可能是由于嗜酸乳桿菌KLDS AD1產(chǎn)酸能力強(qiáng)[19]，在代謝過(guò)程中產(chǎn)生乳酸等有機(jī)酸，降低了腸道內(nèi)pH，并產(chǎn)生一些短鏈脂肪酸[20]，促進(jìn)了雙歧桿菌的生長(zhǎng)繁殖。Yamano等[21]也認(rèn)為雙歧桿菌的增加可能是由于約氏乳桿菌La1發(fā)酵乳中乳酸等其他代謝物降低了腸道內(nèi)pH。Spanhaak等[22]研究發(fā)現(xiàn)干酪乳桿菌發(fā)酵乳使得雙歧桿菌和乳桿菌數(shù)量增加，而腸桿菌和梭狀芽孢桿菌數(shù)量減少。

益生菌得以在腸道中發(fā)揮益生作用，不僅是因?yàn)榭梢哉{(diào)節(jié)腸道微生態(tài)失衡，還可以通過(guò)刺激腸道黏膜免疫系統(tǒng)分泌抗體、細(xì)胞因子等免疫分子，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，抵御病原菌的入侵。副干酪乳桿菌可以有效地增強(qiáng)抗原呈遞細(xì)胞的活性，從而抵抗大腸桿菌O157∶H7的感染，并使感染后的小鼠體重迅速恢復(fù)正常[23]。嗜酸乳桿菌作為益生菌的重要成員，也具有免疫增強(qiáng)的作用[24]。因此，對(duì)于嗜酸乳桿菌KLDS AD1是否是通過(guò)免疫增強(qiáng)的作用預(yù)防和治療腹瀉等疾病還有待進(jìn)一步研究。

3 結(jié)論

嗜酸乳桿菌用于治療不同腹瀉，如抗生素腹瀉、急性胃腸炎、旅行者腹瀉，難辨梭菌導(dǎo)致的反復(fù)腹瀉[25]。本研究使用嗜酸乳桿菌KLDS AD1對(duì)小鼠腹瀉模型灌胃后，與對(duì)照組相比，致病性大腸桿菌、腸桿菌和腸球菌數(shù)量降低，而乳酸菌和雙歧桿菌數(shù)量增加，且小鼠體重有一定的恢復(fù)。嗜酸乳桿菌不僅對(duì)大腸桿菌等致病菌具有抑制作用，而且通過(guò)代謝作用為雙歧桿菌的生長(zhǎng)創(chuàng)造有利條件，同時(shí)嗜酸乳桿菌和腸道內(nèi)雙歧桿菌等有益菌結(jié)合，具有良好的益生作用[26]。因此，嗜酸乳桿菌KLDS AD1可以通過(guò)調(diào)節(jié)腸道內(nèi)致病菌和有益菌而調(diào)節(jié)腸道微生物區(qū)系的平衡，對(duì)小鼠感染大腸桿菌O157∶H7引起的腹瀉有一定的治療作用。

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Effects of Lactobacillus acidophilus KLDS AD1 on intestinal microbiota of Escherichia coli O157∶H7 infected mice

WANG Ting-ting，LI Dan-feng，LIU Bin，LIN Hai-jun，HUO Gui-cheng*
（Key Laboratory of Dairy Science，Ministry of Education，Northeast Agricultural University，Harbin 150030，China）

Gut microbiota changes were investigated in the present study after infection with Escherichia coli O157∶H7 and treated with Lactobacillus acidophilus KLDS AD1.Appearance characteristics were employed to identify the preventive roles of L.acidophilus KLDS AD1 in the mice infected with E.coli O157∶H7.Mice were randomly allocated to nonchallenged control（Ⅰ），E.coli-PBS treatment（Ⅱ）and E.coli-L.acidophilus treatment（Ⅲ）groups.After oral administration of E.coli O157∶H7 for 7 days，the infected mice were fed with L.acidophilus KLDS AD1 for another 7 days，and the numbers of bacteria in the faeces of mice were counted. Results indicated that L.acidophilus KLDS AD1 could result in the weight gain significantly of E.coli O157∶H7 infected mice（p＜0.01）.Faecal Lactobacillus，Bifidobacterium counts were significantly decreased（p＜0.05），while Enterococcus，Enterobacteria and E.coli counts were obviously increased（p＜0.05），in groupsⅡandⅢafter E.coli O157∶H7 challenge compared with groupⅠ.After oral administration of L.acidophilus KLDS AD1，the number of Enterococcus，Enterobacteria and E.coli were significantly lower（p＜0.05），while Lactobacillus，Bifidobacterium counts were obviously higher（p＜0.01）in groupsⅢthan groupsⅡ.These results demonstrated that L.acidophilus KLDS AD1 was effective in regulating the intestinal microbiota and ameliorating diarrhea in E.coli O157∶H7 infected mice.

Lactobacillus acidophilus；Escherichia coli；intestinal microflora；eubiosis of microflora；disease

Q939.11+7

A

1002-0306（2014）04-0341-05

2013－07－30 *通訊聯(lián)系人

王婷婷（1988-），女，碩士研究生，研究方向：乳品科學(xué)與微生物。

國(guó)家“863”項(xiàng)目（2011AA100902）；國(guó)家“863”計(jì)劃（2012AA022108）；食品安全與營(yíng)養(yǎng)協(xié)同創(chuàng)新中心。