比色法測定清肺消炎丸中膽酸的含量

馬福家　曾曉娟　司曉莉

摘 要 目的：建立清肺消炎丸中膽酸含量的測定方法。方法：采用比色法，以硫酸溶液顯色，檢測波長為385 nm。結(jié)果：清肺消炎丸中膽酸的含量限度為不低于0.31 mg/粒，膽酸濃度在0.104 2～0.795 8 mg/ml范圍內(nèi)與吸收度呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 9， n=5），平均回收率為99.29% （RSD=0.32%， n=6）。結(jié)論：該法簡便、快速、穩(wěn)定、可靠，可用于測定清肺消炎丸中膽酸的含量。

關(guān)鍵詞 清肺消炎丸 人工牛黃 膽酸 比色法

中圖分類號：O657.32； R286 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1006-1533（2014）03-0058-02

Colorimetry determination of the content of cholalic acid in Qingfei Xiaoyan pills

MA Fujia， ZENG Xiaojuan， SI Xiaoli

（Department of pharmacy， Hospital 455 of PLA， Shanghai 200052， China）

ABSTRACT Objective： To establish a method for the determination of cholic acid in Qingfei Xiaoyan pills. Methods： Cholic acid was determined by colorimetry at a wavelength of 385 nm. Results： The content limit of cholic acid in Qingfei Xiaoyan pills is not less than 0.31mg per pill. The standard curve of cholic acd was linear over the range of 0.104 2～0.795 8 mg/ml with r=0.999 9， n=5. The average recovery （n=6） was 99.29% （RSD=0.32%）. Conclusion： This method is simple， fast， stable and reliable and can be used for the quality control of Qingfei Xiaoyan pills.

KEY WORDS Qingfei Xiaoyan pills； artificial bezoar； cholic acid； colorimetry

清肺消炎丸由麻黃、石膏、地龍、牛蒡子、葶藶子、牛黃、苦杏仁（炒）和羚羊角8味中藥組成，具有清肺化痰，止咳平喘的功效。臨床上用于治療痰熱阻肺、咳嗽氣喘、胸脅脹痛、吐痰黃稠[1]。本品中人工牛黃含有效成份膽酸，其含量的測定是控制人工牛黃質(zhì)量的一個重要指標(biāo)，但是未見清肺消炎丸中膽酸的含量測定方法，只有膽酸的定性鑒別[2-3]。為能更好地控制清肺消炎丸的質(zhì)量，本文采用比色法測定其膽酸的含量[4]。

1 儀器與試劑

德國賽多利斯儀器有限公司BP211D型1/10萬電子天平，美國瓦里安公司紫外可見分光光度計(jì)（Cary 50 UV-Vis），電熱恒溫水浴鍋（江蘇南通通海電器廠）等。膽酸標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所）批號為0078-9312，清肺消炎丸（天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司達(dá)仁堂制藥廠，批號：110419），硫酸溶液（取H2O 65 ml，加濃硫酸50 ml，搖勻，即得）。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：精密稱取膽酸標(biāo)準(zhǔn)品25 mg，置25 ml量瓶中，加60%冰醋酸溶解并定容至刻度，搖勻。精密吸取5 ml，置另一25 ml量瓶中，加60%冰醋酸至刻度，搖勻，備用。

樣品溶液制備：精密稱取30粒清肺消炎丸的重量，置25 ml量瓶中，加60%冰醋酸適量，置70 ℃水浴中不斷振搖，加熱20 min，取出，放冷，過濾，加60%冰醋酸至刻度，搖勻，備用。

陰性對照溶液的制備：稱取不含膽酸的陰性空白制劑，按“樣品溶液制備”項(xiàng)下制備陰性對照溶液。

2.2 測定波長的選擇

精密吸取膽酸標(biāo)準(zhǔn)液1 ml，置具塞刻度試管中，加硫酸溶液14.0 ml，搖勻，置70 ℃水浴中加熱l0 min，取出放冷，以相應(yīng)的試劑為空白，掃描200～800 nm波長范圍內(nèi)的吸收光譜。結(jié)果膽酸對照品溶液在385 nm波長處有最大吸收峰，故以385 nm為測定波長。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

用膽酸標(biāo)準(zhǔn)液，照分光光度法（中華人民共和國藥典附錄Ⅴ）在385 nm波長處測定吸收度A，以A為縱座標(biāo)，濃度C為橫座標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y = 0.368 3 X + 0.011 9， r = 0.999 8。結(jié)果表明，膽酸濃度在0.104 2～0.795 8 mg/ml范圍內(nèi)濃度與吸收度有良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度實(shí)驗(yàn)

取膽酸對照品溶液，按上述方法重復(fù)測定6次，吸光度分別為0.103 3、0.104 2、0.103 9、0.103 2、0.103 6和0.104 4，平均值為0.103 8，吸光度的RSD為0.46%。結(jié)果表明，本方法精密度良好。

2.5 重現(xiàn)性試驗(yàn)

分別精密吸取膽酸標(biāo)準(zhǔn)液0.5 ml 6份，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下操作，測得吸光度分別為0.188 7、0.189 8、0.190 3、0.190 7、0.189 1和0.189 5，平均值為0.189 7，吸光度的RSD為0.39%。結(jié)果表明，此方法有較好的重現(xiàn)性。

2.6 溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn)

取標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下的膽酸溶液，按上述條件每間隔40 min測定一次吸光度，結(jié)果在6 h內(nèi)吸光度穩(wěn)定。

2.7 回收率測定

精密稱取60粒清肺消炎丸的重量及膽酸標(biāo)準(zhǔn)品20 mg，置25 ml量瓶中，按樣品溶液制備項(xiàng)下操作，所得濾液按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下測定，結(jié)果見表1。

2.8 樣品測定

取3批樣品，按樣品溶液制備項(xiàng)下操作，平行制備3份，所得濾液按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下測定吸收度，并根據(jù)回歸方程計(jì)算每粒清肺消炎丸中膽酸含量（mg），結(jié)果見表2。

3 討論

按方法同時(shí)制備陰性對照溶液，在200～800 nm的波長范圍內(nèi)掃描，無吸收，說明陰性對照溶液不干擾膽酸的含量測定，選擇385 nm作為膽酸含量測定的檢測波長。

清肺消炎丸的原標(biāo)準(zhǔn)中無人工牛黃的含量測定，經(jīng)多次測定，清肺消炎丸中膽酸的含量限度為不低于0.31 mg/粒。

通過上述方法學(xué)考察，建立了清肺消炎丸中膽酸的含量測定方法， 能夠更好地控制該品種的質(zhì)量，使其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)更趨嚴(yán)謹(jǐn)、科學(xué)、完整，并且該方法簡便快捷，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性、回收率好，能有效控制清肺消炎丸的質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)

[1] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典一部[M]. 北京： 化學(xué)工業(yè)出版社， 2010， 1117-1118.

[2] 羅輝， 王原， 李昂， 等. HPLC法測定清肺消炎丸中鹽酸麻黃堿的含量[J]. 世界科學(xué)技術(shù)（中醫(yī)藥現(xiàn)代化）， 2009， 11（3）： 461-464.

[3] 羅曉茹， 曹紅， 邢俊波， 等. 人工牛黃及其制劑中膽酸含量測定的研究進(jìn)展 [J]. 解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)， 2009， 25（3）： 247-249.

[4] 曾曉娟， 馬福家， 司曉莉. 比色法測定小兒化毒散中膽紅素的含量[J]. 上海醫(yī)藥， 2013， 34（19）： 43-45.

（收稿日期：2013-05-15）