幼狐腦炎母源抗體消退情況監(jiān)測

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（山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學院，山東濰坊 261061）

幼狐腦炎母源抗體消退情況監(jiān)測

郭洪梅，王成森

（山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學院，山東濰坊 261061）

本研究采用微量中和實驗的方法，對30日齡、45日齡、60日齡幼狐的傳染性腦炎母源抗體進行檢測。結果顯示，30日齡幼狐的傳染性腦炎母源抗體水平較高，中和抗體平均效價為1∶48.3；在45日齡斷乳期該母源抗體平均中和抗體效價顯著下降到1∶18.3；在60日齡該母源抗體基本消失，多數中和抗體效價低于1∶2.9。實驗結果表明，45～50日齡對幼狐進行傳染性腦炎疫苗首免，能避開免疫空白期和母源抗體干擾，獲得較好免疫效果。

：中和試驗；狐貍腦炎；幼狐；母源抗體；

狐貍腦炎是（fox encephalitis，FE）由犬I型腺病毒（ canine adenovirus type 1，CAV-1）引起的一種急性、敗血性、接觸性傳染病，是嚴重危害狐貍養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的主要疫病之一，疫苗接種是我國目前防控該病的主要措施，這在很大程度上控制了CAV-1在狐群中的爆發(fā)流行，但是仍有部分狐場爆發(fā)腦炎、發(fā)病率較高［1］，免疫效果不佳的原因可能是狐貍腦炎疫苗首免時間不當所致。若疫苗首免時間過早，母源抗體的干擾會嚴重影響免疫效果，造成免疫失敗；若疫苗首免時間過晚，則易出現免疫空白期，使動物易于感染CAV-1。因而本研究采用微量中和試驗方法對不同日齡幼狐的狐貍腦炎母源抗體進行檢測，進一步弄清母源抗體的消退規(guī)律，以期選擇恰當的首免時機，克服母源抗體的干擾，避免出現免疫空白期，為制定狐貍腦炎疫苗的適宜免疫程序提供科學依據。

1 材料

1.1實驗動物和分組選自濰坊郊區(qū)的養(yǎng)狐場，選擇未經狐貍腦炎疫苗免疫的4窩健康銀狐幼狐，共30只。幼狐45日齡斷奶，試驗期間按正常養(yǎng)殖程序補喂飼料和分窩，弱仔、死仔及時淘汰。

1.2血清

1.2.1對照血清狐貍傳染性腦炎陽性血清由山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學院實驗室自制保存，陰性血清采自健康北極狐（SN抗體效價≤1∶4 ）；過濾除菌后置-20℃凍存待檢，實驗前將血清56℃水浴滅活30 min備用。

1.2.2待檢血清分別于幼狐出生后30日齡、45日齡、60日齡時前肢臂頭靜脈采血，分離血清，過濾除菌后置-20℃凍存待檢，實驗前將血清56℃水浴滅活30 min備用。

1.3參照毒株揚州大學惠贈的CAV-1弱毒株。

1.4細胞系MDCK細胞購自中國科學院上海生科院細胞資源中心。

2 方法

采用固定病毒-稀釋血清法，用微量中和試驗［2］檢測待檢血清中狐貍腦炎母源抗體效價。

2.1狐貍腦炎病毒含量的測定啟封凍干病毒，用細胞生長液對病毒液進行10倍梯度稀釋，取10-3～10-6稀釋度之間的病毒稀釋液進行毒價測定，每個稀釋度接種4孔，每孔50 μL，然后加100 μL3.0×105個/mL 的MDCK細胞懸液于各孔中，最后一列孔為正常細胞對照，接種細胞生長液，置于5%CO2培養(yǎng)箱中于37℃培養(yǎng)，逐日觀察結果，記錄細胞出現細胞病變（CPE）的孔，至接種后第4天按Reed-Muench法計算病毒的TCID50／50μL。

2.2微量血清中和試驗

2.2.1MDCK細胞懸液的準備取長滿單層的細胞一瓶，傾去培養(yǎng)液，加入胰酶消化，將消化好的MDCK細胞稀釋成成3.0×105個/mL的MDCK細胞懸液。

2.2.2血清的稀釋取96孔微量培養(yǎng)板，以50μL／孔體積，用細胞維持液將血清進行2倍系列稀釋至1∶256，每個稀釋度做4孔。

2.2.3血清抗體與病毒中和感作在上述各孔內加入50μL稀釋好的200TCID50／50μL CAV-1液，混勻，同時做陰、陽性血清對照，病毒對照和正常細胞對照，在25℃感作1.5 h。

2.2.4添加細胞感作完成后，每孔加入100μL 3.0×105個/mL的MDCK細胞懸液，置5%CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)，逐日觀察CPE，在對照系統(tǒng)成立的前提下，觀察5天后判定結果。以每孔完全不出現細胞病變?yōu)橹泻蜆藴剩碦eed-Muench法計算血清的中和抗體效價。

3 結果

3.1中和抗體效價測定結果由表1可以看出，30日齡幼狐腦炎母源中和抗體水平較高，平均SN抗體效價為1∶48.3；45日齡斷乳期間SN抗體水平有明顯下降，平均SN抗體效價為1∶18.3；60日齡部分幼狐的SN抗體基本消失，多數SN抗體效價小于1∶2.9。

3.2對病死狐貍的綜合診斷

表1幼狐狐貍腦炎母源中和抗體效價統(tǒng)計結果

實驗過程中，25號幼狐于31日齡時突然死亡，死前無癥狀，見體表被嘶咬，綜合判斷可能因采血受到驚嚇造成應激致死。

4 討論

母源抗體的被動免疫對新生動物是十分重要的，然而對疫苗的免疫效果也帶來一定的影響，若免疫時間過早，母源抗體的干擾易造成疫苗免疫失??；若免疫時間過晚，則動物體內較低的母源抗體水平不足以對抗FEV強毒的感染。據夏咸柱等的研究［3］，FEV母源SN抗體達1∶4以上具有明顯的免疫干擾作用，SN抗體最低免疫保護值為1∶16。

弄清幼狐抗CAV-1母源中和抗體的消長規(guī)律，對制定CAV-1免疫程序有很重要的意義。對30只未進行CAV-1免疫接種的健康幼狐母源SN抗體檢測結果表明，在30日齡絕大多數幼狐抗CAV-1平均母源中和抗體效價在1∶48.3，這表明絕大多數幼狐在30日齡抗CAV-1的母源中和抗體效價較高，免疫保護力高，如此時對幼狐進行CAV-1免疫，母源抗體會嚴重干擾CAV-1的免疫效果，易造成免疫失?。挥缀?5日齡母源抗體均較低，血清抗CAV-1平均中和抗體效價等于1∶18.3，有一定免疫保護力；幼狐在60日齡母源抗體基本消失，血清抗CAV-1平均中和抗體效價小于1∶2.9，免疫保護力很低，幼狐易于感染CAV-1而發(fā)病。實驗結果表明，幼狐腦炎疫苗的首免時間宜在45～50日齡，這樣能避開免疫空白期和母源抗體干擾，獲得較好免疫效果。

[1] 鄭海發(fā)，聶金珍，趙常太，等．狐貍腦炎流行病學調查[J]．特產研究，1992（1）：29-30．

[2] 柴秀麗，閆喜軍，姜莉莉，等．狐貍傳染性腦炎中和試驗監(jiān)測方法的建立和應用[J]．特產研究，2006（4）：8-10．

[3] 夏咸柱，范泉水，扈榮良，等．Ⅱ型犬腺病毒自然弱毒YCA18株的實驗免疫研究[J] ．中國獸藥雜志，2001，35（2）：1-4

[4] 閆喜軍，姜莉莉，柴秀麗，等．狐傳染性腦炎活疫苗抗體消長規(guī)律的研究[J]．經濟動物學報，2006，10（2）：70-72．

[5] 鐘志宏，夏咸柱，趙奕，等．狐貍腦炎病毒的分離鑒定和流行病學調查[J]．獸醫(yī)大學學報，1990，10（2）：111-117．

[6] 聶金珍，鄭海發(fā)，吳威，等．犬腺病毒1I型病毒株的致弱及狐貍腦炎弱毒苗的研究[J]．中國農業(yè)科學，1992，25（2）：14-21．

[7] 李慶國，姜莉莉，樊兆斌．仔狐傳染性腦炎母源抗體水平監(jiān)測[J]．黑龍江畜牧獸醫(yī)，2011（6）：90-91．

The decreasing of the maternal antibodies to fox encephalitis in fox cubs

Guo Hongmei，Wang Chengsen
（Shandong Vocational Animal Science and Veterinary College，Weifang，Shandong 261061）

Maternal antibodies against fox encephalitis virus in fox cubs at ages of 30，45 and 60 days were detected by micro neutralization test. The results showed that the level of the maternal antibodies was higher at 30 day-old with an average SN titer of 1∶48.3，it was reduced sharply to 1∶18.3 at 45 day-old when weaning，and almost disappeared at 60 day-old as most of them were below 1∶2.9，suggesting that good immunity could be obtained if the infectious fox encephalitis vaccine was inoculated for the fi rst time between 45 and 50 day-old and the immune gap and the maternal antibody interference could be avoided as well.

neutralization test；fox encephalitis；fox cubs；maternal antibody

S852.659.1；S858.299

：B

：1005-944X（2014）02-0077-03

山東省高等學校科技計劃項目（J10LC52）