p73和Survivin蛋白在甲狀腺癌中的表達(dá)及其意義

吳穎 周細(xì)華

p73和Survivin蛋白在甲狀腺癌中的表達(dá)及其意義

吳穎 周細(xì)華

目前甲狀腺癌的發(fā)生率約占全身惡性腫瘤的 1%左右，在神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)惡性腫瘤中占90%以上。據(jù)統(tǒng)計(jì)大約5%～10%的人在一生中可能會發(fā)現(xiàn)具有臨床意義的甲狀腺結(jié)節(jié)［1］。p73基因是抑癌基因p53家族成員之一，由Kaghad［2］等于1997年發(fā)現(xiàn)。由于其具有和p53相似的結(jié)構(gòu)及誘導(dǎo)凋亡、活化轉(zhuǎn)錄、調(diào)控細(xì)胞周期等活性，因此該基因被發(fā)現(xiàn)后倍受人們的關(guān)注。Survivin蛋白為凋亡抑制蛋白（IAP）家族中新近發(fā)現(xiàn)的一種。作者采用免疫組化ABC法檢測甲狀腺腫瘤組織中p73和Survivin蛋白表達(dá)的變化，著重探討p73和Survivin在甲狀腺腫瘤組織中的表達(dá)，為甲狀腺腫瘤的診治和預(yù)后評估提供依據(jù)。報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料 標(biāo)本來自本院病理科2009年10月至2012年10月臨床手術(shù)治療患者標(biāo)本存檔蠟塊，術(shù)前均未行化療、放療，共80例，其中男21例，女59例；平均年齡45.6歲。WHO分級：乳頭狀癌20例，濾泡狀癌20例，未分化癌20例，髓樣癌20例。表淺腫瘤Tis-T1 40例，T2-T4 40例。另取80例甲狀腺良性腫瘤黏膜組織標(biāo)本作為對照。所有標(biāo)本均經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診，行連續(xù)切片，貼于經(jīng)3一氨丙基三乙氧基硅烷處理的載玻片上，60℃烤片24h后備用。

1.2 方法 兔抗人p73單克隆抗體與兔抗人survivin多克隆抗體均來自美國Santa Cruz公司產(chǎn)品，免疫組化ABC法采用的試劑盒購自美國Sigma公司，實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照實(shí)際說明書進(jìn)行。3，3-二氨基聯(lián)苯胺顯色，蘇木素復(fù)染，樹膠封固，以PBS代替一抗作陰性對照，已知陽性表達(dá)組織標(biāo)本為陽性對照。

1.3 結(jié)果判定 p73和Survivin蛋白免疫組織化學(xué)染色陽性產(chǎn)物呈棕黃色顆粒，分別定位于細(xì)胞漿和細(xì)胞膜。采用Friedrich等的免疫反應(yīng)評分作為本實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)，IRS由陽性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)計(jì)分與染色強(qiáng)度計(jì)分相乘所得，＞1分為陽性。由兩名病理醫(yī)師采用雙盲隨機(jī)選擇10個(gè)高倍鏡視野（×400），PP計(jì)分如下：0分，＜1%。1分，1%～25%。2分，26%～50%。3分，51%～75%。4分，＞75%。S I計(jì)分如下：0分，不著色。1分，淺棕黃色。2分，棕黃色。3分，棕褐色。SI計(jì)分以多數(shù)細(xì)胞為準(zhǔn)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11.0行統(tǒng)計(jì)分析。兩組間均數(shù)的比較采用t檢驗(yàn)，組間均數(shù)的比較用方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

p73陽性表達(dá)率在正常甲狀腺組織中為15%，甲狀腺癌組織中為75%，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Survivin蛋白在甲狀腺癌中的表達(dá)主要定位于細(xì)胞漿，陽性率為67.5%，在甲狀腺良性腫瘤組織中未見陽性表達(dá)。p73和Survivin的表達(dá)與 WHO瘤分級密切相關(guān)，在甲狀腺乳頭狀癌、濾泡狀癌、未分化癌和髓樣癌組織中的表達(dá)有顯著性差異（P＜0.05），但與臨床分期無顯著差異（P＞0.05）。見表1。

表1 p73和Survivin在甲狀腺不同組織中的表達(dá) （n）

3 討論

p73基因是近年發(fā)現(xiàn)的與p53基因同家族的新基因，位于1p36.2～36.3［1］。此區(qū)是多種人類腫瘤如惡性黑色素瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、肝細(xì)胞癌、結(jié)腸癌、乳腺癌發(fā)生缺失或雜合性丟失的熱點(diǎn)區(qū)［2］，故人們認(rèn)為p73可能是一個(gè)腫瘤抑制基因。p73全長80728bp，由14個(gè)外顯子和13個(gè)內(nèi)含子組成，表達(dá)產(chǎn)物p73蛋白在氨基酸序列上與 p53蛋白具有同源性，轉(zhuǎn)錄激活功能相似［3］。p73基因在兩種不同的啟動(dòng)子作用下，可表達(dá)出兩種不同水平的蛋白。啟動(dòng)子1（P1）轉(zhuǎn)錄成含TA區(qū)域的異構(gòu)體，稱為TAp73；而啟動(dòng)子2（P2）可產(chǎn)生氨基端截短的異構(gòu)體，稱為ANp73，不具有TA區(qū)域，其生物特性與TAp73異構(gòu)體完全相反。TAp73異構(gòu)體至少有7種轉(zhuǎn)錄剪切變異體，ANp73異構(gòu)體至少有4種轉(zhuǎn)錄剪切變異體。p73的不同異構(gòu)體與p53在腫瘤中的共同表達(dá)以及相互干預(yù)又賦予了p73基因抑癌又致癌的雙重特性，p73的許多特點(diǎn)又與p53不同。TAp73是具有抑癌活性的形式，ANp73則無抑癌活性的形式。由于ANp73缺失轉(zhuǎn)錄活化區(qū)，此與全長p73不同，失了轉(zhuǎn)錄活化功能，而成為p73的顯性負(fù)性因子，可誘導(dǎo)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化形成腫瘤。Ferrua等發(fā)現(xiàn)，正常甲狀腺組織無p73基因的表達(dá)，而甲狀腺癌中有廣泛表達(dá)［4］。在人類腫瘤中p53的突變率較高，而 p73在腫瘤中極少發(fā)生突變，表明兩者活化調(diào)節(jié)機(jī)制可能完全不同。

本資料結(jié)果顯示，甲狀腺癌組織中p73蛋白呈高表達(dá)，陽性率為75%，而甲狀腺良性腫瘤組織中表達(dá)率僅為15%。兩者差異顯著（P＜0.05）。癌組織中確實(shí)存在p73蛋白，p73基因可能參與調(diào)控甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展。目前國內(nèi)外有關(guān)p73與甲狀腺癌發(fā)生、發(fā)展的研究不多，其分子作用機(jī)制尚未明確，尤其是p73各種異構(gòu)體與p53基因及其他基因之間的相互作用。

Survivin是IAP家族中最小的一員，由Ahieri在1997年利用效應(yīng)細(xì)胞蛋白酶受體cDNA在人類基因組庫中篩選克隆成功后，引起人們的廣泛關(guān)注［5］。Survivin基因定位于染色體17q25，全長14.7kb，由3個(gè)內(nèi)含子和4個(gè)外顯子組成，編碼142酸的蛋白［6］。Survivin可以抑制凋亡終末效應(yīng)器半胱氨酸蛋白酶Caspas-3及Caspas-7的活性而阻斷各種刺激因素誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過程；與細(xì)胞周期調(diào)控因子CDK4結(jié)合形成survivin-DK4復(fù)合體，使p21從CDK4的復(fù)合體中釋放并與線粒體Caspase-3結(jié)合后間接抑制其活性［6］。此外，Survivin還參與細(xì)胞凋亡周期的調(diào)控，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂中紡錘體檢查點(diǎn)和凋亡檢查點(diǎn)雙重功能，是聯(lián)系細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡界面的重要因子［7］。Survivin的抗凋亡作用是促進(jìn)腫瘤細(xì)胞存活的主要機(jī)制之一，且其表達(dá)常與腫瘤的惡性程度、預(yù)后密切相關(guān)。

本資料結(jié)果顯示，Survivin的表達(dá)與甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，提示 survivin可能通過抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)細(xì)胞增殖而在甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。

甲狀腺癌的發(fā)生是多基因損傷的復(fù)雜過程，它的發(fā)生發(fā)展與癌基因激活、抑癌基因的突變和抗凋亡基因過表達(dá)等有關(guān)。p73和Survivin在甲狀腺癌組織中的再激活和異常表達(dá)，而導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡減少或逃避與甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系，對甲狀腺癌的診斷預(yù)后具有重要參考價(jià)值。

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