T-SPOT．TB試驗(yàn)在結(jié)核性腦膜炎診斷中的價(jià)值

王永生 周 航 劉 藺 陳易芳 王俊力

成都三六三醫(yī)院呼吸科，四川 成都 610041

基金項(xiàng)目：四川省衛(wèi)生廳科研課題（100358）

基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)

T-SPOT．TB試驗(yàn)在結(jié)核性腦膜炎診斷中的價(jià)值

王永生 周 航 劉 藺 陳易芳 王俊力

成都三六三醫(yī)院呼吸科，四川 成都 610041

基金項(xiàng)目：四川省衛(wèi)生廳科研課題（100358）

目的探討T-SPOT．TB（結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)）試驗(yàn)在結(jié)核性腦膜炎診斷中的價(jià)值。方法對(duì)我院26例臨床和影像學(xué)可疑結(jié)核性腦膜炎的患者的腦脊液實(shí)施結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)，對(duì)照組為23例無(wú)結(jié)核原發(fā)病灶的腦膜炎患者的腦脊液實(shí)施結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)。結(jié)果26例臨床和影像學(xué)可疑結(jié)核性腦膜炎患者中，23例結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性（占88．5%），對(duì)照組24例中結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性有4人（占16．7%）。利用結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)以此診斷結(jié)核性腦膜炎的敏感度為88．5%（95%可信區(qū)間CI 49．9～91．3）特異度為83．3%（95%可信區(qū)間CI 69．3～97．8），陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為82．5%（95%可信區(qū)間CI

T-SPOT；TB試劑盒；診斷；腦膜炎；腦脊液；結(jié)核病

結(jié)核性腦膜炎的診斷長(zhǎng)久以來(lái)主要依靠臨床表現(xiàn)和積液性質(zhì)，易導(dǎo)致誤診和漏診，進(jìn)而影響患者的治療和預(yù)后。因此如何快速、準(zhǔn)確的診斷結(jié)核性腦膜炎是亟待解決的臨床難題。

T-SPOT．TB試驗(yàn)（結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)）是通過(guò)檢測(cè)受結(jié)核菌特異性抗原刺激后釋放干擾素的外周血特異性T細(xì)胞來(lái)確定結(jié)核感染的方法。近年研究表明，通過(guò)T-SPOT．TB的方法來(lái)診斷活動(dòng)性肺結(jié)核分枝桿菌感染的敏感度較高［1］，而在我國(guó)，對(duì)于該方法在肺外結(jié)核以及結(jié)核性腦膜炎診斷敏感度的文章報(bào)道很少。此研究使用結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)對(duì)我科收治的高度懷疑結(jié)核性腦膜炎患者的腦脊液進(jìn)行檢測(cè)，來(lái)評(píng)價(jià)此方法在診斷結(jié)核性腦膜炎中的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

對(duì)臨床上以發(fā)熱、頭痛、腦膜刺激征（+）為主要表現(xiàn)的患者，且MRI診斷為腦積水、肉芽增生或基底節(jié)區(qū)滲出性改變或腦脊液檢查表現(xiàn)為（腦脊液的白蛋白升高，糖下降，單核細(xì)胞及其比例升高）且臨床高度懷疑結(jié)腦的26例患者分為實(shí)驗(yàn)組，予以T-SPOT．TB試驗(yàn)，根據(jù)其結(jié)果，對(duì)臨床上考慮為結(jié)腦的患者予以診斷性抗癆治療。根據(jù)最終治療和隨訪結(jié)果，實(shí)驗(yàn)組中有23例診斷為結(jié)核性腦膜炎，其中腦脊液中結(jié)核桿菌培養(yǎng)陽(yáng)性或經(jīng)過(guò)病理學(xué)活檢證明伴有肺部及另外部位有結(jié)核感染患者14例；無(wú)結(jié)核細(xì)菌學(xué)感染及病理性活檢證據(jù)，但通過(guò)診斷性抗癆最后得到痊愈的患者9例；隨訪后非結(jié)核性中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染患者2例。把患有非結(jié)核引起的感染性腦膜炎患者24名分為對(duì)照組，其中化膿性腦膜炎13例，病毒性腦膜炎8例，化腦合并真菌性腦膜炎2例，隱球菌性腦膜炎1例。

1.2 方法

1.2.1 腦脊液的 T-SPOT.TB試驗(yàn) 采集患者腦脊液約20 ml，肝素抗凝后，離心分離出單核細(xì)胞液。然后洗板2次，取一塊預(yù)包被有γ-干擾素的單克隆抗體的96孔板，在4個(gè)孔內(nèi)分別接種分離出單核細(xì)胞的混懸液。陰性對(duì)照只包含細(xì)胞懸液，陽(yáng)性對(duì)照則加入5UL植物血凝素（PHA），實(shí)驗(yàn)孔分別加入抗原ESAT-6（A）和CFP-10（B），放在5% CO2孵箱中37℃培養(yǎng)16～24 h后，最后加入顯色劑顯色，靜置7 min。用肉眼觀察結(jié)果并用吸水紙終止反應(yīng)。斑點(diǎn)形成細(xì)胞的數(shù)日來(lái)描述并記錄斑點(diǎn)的各種參數(shù)。

1.2.2 結(jié)果判定 當(dāng)測(cè)試孔A或B達(dá)到以下標(biāo)準(zhǔn)則判定為陽(yáng)性結(jié)果：測(cè)試孔斑點(diǎn)數(shù)減去陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)大于

5，并且測(cè)試孔斑點(diǎn)數(shù)必須≥2倍的陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)。另外，每個(gè)病人必須對(duì)陽(yáng)性對(duì)照有滿意的反應(yīng)，即斑點(diǎn)數(shù)大于20或者充盈整個(gè)微孔。如果對(duì)一種或者兩種抗原反應(yīng)陽(yáng)性，也可認(rèn)定為陽(yáng)性。該試劑盒由英國(guó)牛津公司提供。

1.2.3 評(píng)價(jià)方法 采用敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、可信區(qū)間等作為該試驗(yàn)的評(píng)價(jià)指標(biāo)和方法。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本實(shí)驗(yàn)采用SPSS 16.0數(shù)據(jù)包進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料之間的比較采用卡方檢驗(yàn)，計(jì)量資料之間的比較采用t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

在實(shí)驗(yàn)組可疑結(jié)核性腦膜炎26例患者中，23例T-SPOT．TB試驗(yàn)陽(yáng)性（88.5%）。對(duì)照組中24例T SPOT．TB試驗(yàn)陰性20人（83.3%）結(jié)果如表1所示。T SPOT．TB試驗(yàn)診斷結(jié)核性腦膜炎的敏感度為88.5%（95%可信區(qū)間CI 49.9～91.3）特異度為83.3%（95%可信區(qū)間CI 69.3～97.8），陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為83.5%（95%可信區(qū)間CI 72.6～97.9），陰性預(yù)測(cè)值為94.7%（95%可信區(qū)間CI 48.3～97.1）。如表2所示。

表1 T SPOT.TB對(duì)結(jié)核性腦膜炎的診斷試驗(yàn)結(jié)果（n）

表2 T SPOT.TB診斷結(jié)核腦膜炎試驗(yàn)的評(píng)價(jià)結(jié)果（%）

3 討論

通過(guò)檢測(cè)IFN-γ的產(chǎn)生，來(lái)快速診斷結(jié)核分支桿菌感染。該方法是使用編碼結(jié)核分支桿菌基因組的差異-1（RD-1）區(qū)域的ESAT-6和CFP-10的多肽，RD-1區(qū)域在卡介苗疫苗的所有菌株和絕大多數(shù)非結(jié)核分枝桿菌是不存在。這些試驗(yàn)檢測(cè)活動(dòng)性結(jié)核的敏感性為76%～100%，特異性是88%以上［2］。目前，國(guó)內(nèi)外多項(xiàng)臨床研究證實(shí)了全血或血清的T-SPOT．TB檢測(cè)在活動(dòng)性肺結(jié)核以及肺外結(jié)核的敏感度、特異度明顯高于TST，痰培養(yǎng)，痰TB DNA，血TB-AB.等方法［3］。特別是在合并免疫抑制及結(jié)核潛伏感染的診斷中，具有快速，敏感性及特異性較高的優(yōu)點(diǎn)，在臨床上對(duì)疑似結(jié)核病的患者進(jìn)行T-SPOT．TB試驗(yàn)對(duì)鑒別診斷具有重要價(jià)值。

結(jié)核性腦膜炎屬于肺外結(jié)核的一種類型，肺外結(jié)核的現(xiàn)代診斷方法以微生物法和免疫法為主，國(guó)外的一些研究資料表明結(jié)核病中25%～30%屬于肺外結(jié)核，肺外結(jié)核感染的死亡率占總結(jié)核死亡率的14.1%～17.6%。但是，關(guān)于T-SPOT．TB試驗(yàn)在診斷肺外結(jié)核病中的應(yīng)用價(jià)值的報(bào)道較少，英國(guó)某傳染病醫(yī)院對(duì)64位采用過(guò)T-SPOT．TB試驗(yàn)診斷活動(dòng)性肺外結(jié)核的患者進(jìn)行回顧性研究，與培養(yǎng)法相比，其敏感度為94%，特異度為85%。

在本項(xiàng)試驗(yàn)中，T-SPOT．TB用于診斷結(jié)核性腦膜炎的敏感度為88.5%，特異度為83.3%，同國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道相一致。根據(jù)研究，本實(shí)驗(yàn)具有重要的臨床意義，和以往結(jié)核性腦膜炎的診斷方法相比較，本項(xiàng)試驗(yàn)方法的敏感度要高，特異度也更好。另外與其他一些新的結(jié)核感染檢測(cè)方法相比，T-SPOT．TB試驗(yàn)也有較為明顯的優(yōu)勢(shì)，比如實(shí)驗(yàn)中采用比較多的檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的QPCR方法，現(xiàn)在臨床上的大規(guī)模研究表明其真實(shí)的敏感度僅為45%。本研究的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為83.5%，陰性預(yù)測(cè)值為94.7%，對(duì)于鑒別容易與結(jié)核性腦膜炎混淆的一些疾病，比如化膿性腦膜炎、霉菌性腦膜炎、病毒性腦膜炎等，該實(shí)驗(yàn)均有鑒別診斷的作用，且體現(xiàn)了很好的臨床應(yīng)用價(jià)值。但是，本試驗(yàn)的不足之處在于研究例數(shù)較少，未在對(duì)明確排除結(jié)核感染的患者中進(jìn)行T-SPOT．TB實(shí)驗(yàn)的特異性進(jìn)行評(píng)價(jià)，如果該項(xiàng)檢測(cè)方法能夠聯(lián)合QPCR的方法檢測(cè)在結(jié)核性腦膜炎的診斷作用可能其診斷的敏感性和特異性會(huì)更高，也為下一步的診斷提供新的方向。

現(xiàn)在國(guó)外的一些最新的研究成果證實(shí)，為了區(qū)分活動(dòng)性及穩(wěn)定期結(jié)核感染，對(duì)病變部位的漿膜腔積液進(jìn)行離心分離出單核細(xì)胞液，將其予以T-SPOT．TB試驗(yàn)，該方法的敏感度和特異度較高。相關(guān)文章報(bào)道，對(duì)17例印度結(jié)腦患者腦脊液?jiǎn)蝹€(gè)核細(xì)胞進(jìn)行T-SPOT．TB試驗(yàn)，診斷活動(dòng)性結(jié)核性腦膜炎其敏感度和特異度分別達(dá)到90%和100%。T-SPOT．TB試驗(yàn)在心包積液，胸腔積液，腹

腔積液，肺泡灌洗液等也有成功的病例報(bào)道。

T-SPOT.TB試驗(yàn)以腦脊液作為檢測(cè)標(biāo)本，腦脊液的獲取較簡(jiǎn)便，并且能快速得出結(jié)果，常規(guī)為第二天。該方法的臨床應(yīng)用不僅可對(duì)結(jié)核感染的患者進(jìn)行早診斷、早治療，且還可以盡量避免一些因誤診，漏診導(dǎo)致的一些耐藥性的產(chǎn)生，在很大程度上節(jié)省了醫(yī)療費(fèi)用，并且還可以通過(guò)測(cè)定效應(yīng)T淋巴細(xì)胞來(lái)協(xié)助判定人體是否完全清除了病原體，用來(lái)作為判定治療療效的一項(xiàng)指標(biāo)之一。在臨床應(yīng)用過(guò)程中該項(xiàng)試驗(yàn)亦具有一定的局限性，由于T-SPOT.TB試驗(yàn)試劑盒價(jià)格較為昂貴，操作較繁瑣，且需要專人培訓(xùn)及操作，因此目前在我國(guó)尚未進(jìn)行大規(guī)模開展，需要更多更大樣本臨床試驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)。

［1］Pai M，Riley LW，Colford JM Jr.Interferon-gamma assays in the immunodiagnosis of tuberculosis:a systematic review. Lancet Infect Dis 2004，4（12）：761-776.

［2］Alfred A Lardizabal，Lee B Reichman. Interferon-Gamma release assay for detection of tuberculosis infection.US Respiratory Disease，2006，54（6）：59-61.

［3］Mori T，et al.Specific detection of tuberculosis infection:an interferon gamma-based assay using new antigens.Am J Respir Crit Care Med 2004，170（1）：59-64.

Clinical Study of the Detection of T-SPOT.TB in Diagnosis of Tuberculosis Meningitis

WANG Yongsheng ZHOU Hang LIU Lin CHEN Yifang WANG Junli Department of respiratory，Avic 363 Hospital，Chengdu Sichuan 610041，China

ObjectiveTo analysis the value of T-SPOT．TB detection in the diagnosis of tuberculous meningitis．MethodsCerebrospinal fluid of 26 cases who clinical and radiographic suspected tuberculous meningitis was tested with T-SPOT．TB test．Cerebrospinal fluid of 24 cases of meningitis with no tuberculous was tested with T-SPOT．TB test as the control group．ResultsThe T-SPOT．TB test was positive in 24 cases of the experimental group（92．3%），however，in control group only 3 was positive（12．5%）．Using T-SPOT．TB test to diagnose tuberculous meningitis，the sensitivity was 92．3%（95% confidence interval CI 52．5～ 94．2），the specificity was 87．5%（95% CI 70．3～97．8），the positive predictive value was 83．5%（95% CI 72．6～97．9），and the negative predictive value was 94．7%（95% CI 48．3～ 97．1）．ConclusionT-SPOT．TB ELISPOT is a method with high sensitivity and specificity to the detection of tuberculosis infection，which is useful to quick and accurate diagnose tuberculous meningitis．

T-SPOT．TB kit，ELISPOT，Diagnosis，Meningitis，Cerebrospinal fluid，Tuberculosis

R521

B

1674-9316（2014）23-0068-04

10．3969/J．ISSN．1674-9316．2014．23．041

72．6～97．9），陰性預(yù)測(cè)值為91．7%（95%可信區(qū)間CI 48．3～97．1）。結(jié)論結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)是一種具有較高敏感性和特異性的檢測(cè)結(jié)核感染的技術(shù)，這對(duì)快速而準(zhǔn)確地診斷結(jié)核性腦膜炎是有用的。