阿托伐他汀對老年大鼠心肌過氧化氫、丙二醛及谷胱甘肽過氧化物酶水平的影響

韓 磊 ，葉 平 ，李鳴皋

近年來，他汀類藥物的作用越來越為廣大學(xué)者所重視。大量的研究證實(shí)，除調(diào)脂作用外，他汀類藥物還具有抑制炎性反應(yīng)、改善心室重構(gòu)、保護(hù)血管內(nèi)皮等多種保護(hù)作用［1-4］。然而，有關(guān)他汀類藥物與衰老及氧化應(yīng)激方面的研究少見報(bào)道。本研究以老年大鼠為研究對象，觀察老年大鼠心肌過氧化氫(H2O2)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)等氧化應(yīng)激與衰老相關(guān)指標(biāo)的變化及阿托伐他汀干預(yù)對上述指標(biāo)的影響，進(jìn)而為研究衰老的病理生理機(jī)制和干預(yù)手段提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 10月齡 Wistar大鼠90只［體質(zhì)量(586.67±39.40)g］、3月齡 Wistar大鼠30只［體質(zhì)量(245.83±11.38)g］(北京維通利華公司)，雌雄各半。

1.2 試藥、試劑與儀器 阿托伐他汀(大連輝瑞制藥有限公司，批號:73837005)，H2O2、MDA、GSH-Px檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所)，臺式高速離心機(jī)(Sigma公司)，高速冷凍離心機(jī)(Heraeus Labofuge 400)，水浴鍋(北京長風(fēng)儀器儀表公司)，721A型分光光度計(jì)(上海光學(xué)儀器廠)。

1.3 方法

1.3.1 動(dòng)物模型建立與分組:將90只10月齡Wistar大鼠飼養(yǎng)至20月齡后，隨機(jī)分成老年對照組、高劑量阿托伐他汀組(高劑量組)和低劑量阿托伐他汀組(低劑量組)，每組30只。將30只3月齡Wistar大鼠作為青年對照組，正常飼養(yǎng)，不做任何處理。

1.3.2 處理方法:高、低劑量組分別給予阿托伐他汀10 mg/(kg·d)和1 mg/(kg·d)灌胃，老年對照組大鼠給予等體積的0．9%氯化鈉溶液灌胃，共4個(gè)月。

1.4 心肌H2O2、MDA及GSH-Px含量的測定 常規(guī)麻醉大鼠，留取大鼠心肌標(biāo)本。采用H2O2、MDA及GSH-Px檢測試劑盒，嚴(yán)格按說明書操作測定各組大鼠心肌H2O2、MDA及GSH-Px含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 13．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用單因素方差分析，α=0．05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

老年對照組心肌H2O2、MDA含量顯著高于青年對照組(P＜0．01)，GSH-Px活性顯著低于青年對照組(P＜0．01);高、低劑量組心肌H2O2、MDA含量均顯著低于老年對照組(P＜0.05，P＜0.01)，GSHPx活性顯著高于老年對照組(P＜0．01);高、低劑量組H2O2、MDA含量均顯著高于青年對照組(P＜0．05，P ＜0．01)，而 GSH-Px活性顯著低于青年對照組(P＜0．01)。與低劑量組比較，高劑量組上述3種指標(biāo)變化更為顯著(P ＜0．05，P ＜0．01)。見表1。

表1 各組大鼠心肌過氧化氫、丙二醛及谷胱甘肽過氧化物酶水平變化情況(±s)

表1 各組大鼠心肌過氧化氫、丙二醛及谷胱甘肽過氧化物酶水平變化情況(±s)

注:青年對照組:3月齡Wister大鼠不做任何處理，老年對照組、高劑量組、低劑量組:20月齡Wister大鼠分別予0．9%氯化鈉溶液及阿托伐他汀10 mg/(kg·d)、1 mg/(kg·d)灌胃;*為灌胃4個(gè)月存活大鼠數(shù);與青年對照組比較，a P＜0.05，b P ＜0．01;與老年對照組比較，c P ＜0．05，d P ＜0．01;與低劑量組比較，e P ＜0．05，f P ＜0．01

?

3 討論

隨著老齡化社會的來臨，衰老及與衰老相關(guān)疾病導(dǎo)致的健康問題日益凸顯，衰老的病理生理機(jī)制及其干預(yù)措施也日益成為廣大醫(yī)務(wù)工作者關(guān)注的熱點(diǎn)。目前在衰老發(fā)生機(jī)制方面有多種學(xué)說［5］，主流的學(xué)說主要有衰老基因?qū)W說、復(fù)制性衰老理論與端粒酶學(xué)說、線粒體自由基學(xué)說、DNA損傷理論學(xué)說等，其中線粒體自由基學(xué)說具有較重要的地位。根據(jù)線粒體自由基學(xué)說［6-9］，代謝中產(chǎn)生的大量自由基如超氧陰離子(O2－)、過氧化脂質(zhì)等是導(dǎo)致機(jī)體衰老的重要原因;過量表達(dá)的自由基會導(dǎo)致細(xì)胞膜與線粒體等細(xì)胞重要結(jié)構(gòu)的損傷，還可引起蛋白質(zhì)與酶的活性發(fā)生變化;當(dāng)這種損傷超過了機(jī)體的承受能力時(shí)，就可引起細(xì)胞分化狀態(tài)的改變和喪失，最終導(dǎo)致與加速衰老的發(fā)生。

H2O2、MDA、GSH-Px等作為反映機(jī)體衰老與氧化應(yīng)激水平的指標(biāo)，已為研究者所公認(rèn)。既往研究證實(shí)，MDA、H2O2在生物體內(nèi)的含量隨年齡的增長而增高，GSH-Px活性降低［10-13］。上述指標(biāo)在研究中亦常用于評價(jià)抗氧化及抗衰老干預(yù)措施的效果［14-16］。因此，本研究選擇上述指標(biāo)作為反映老年大鼠心臟氧化應(yīng)激水平和衰老狀態(tài)及評價(jià)阿托伐他汀干預(yù)效果的指標(biāo)。

本研究結(jié)果表明，老年對照組心肌 H2O2及MDA含量較青年對照組顯著增高，GSH-Px活性顯著降低。這一結(jié)果提示，一方面，24月齡Wistar大鼠心臟出現(xiàn)了顯著的衰老性改變;另一方面，也提示老年大鼠心臟氧化應(yīng)激水平較青年大鼠有了顯著提高，再次驗(yàn)證了脂質(zhì)過氧化在衰老發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要的作用。

近年來，關(guān)于他汀類藥物在心血管保護(hù)作用方面的研究較多，但既往研究多集中于他汀類藥物在病理情況下的作用，而有關(guān)他汀類藥物長期干預(yù)在生理衰老情況下尤其是在心臟老化方面的研究則少有報(bào)道。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)過4個(gè)月的阿托伐他汀干預(yù)后，老年大鼠心肌H2O2、MDA含量顯著升高，GSH-Px活性顯著降低，提示阿托伐他汀可以顯著抑制心臟的衰老性改變;同時(shí)也提示，阿托伐他汀對抗大鼠心臟衰老性改變的作用可能與其對心臟脂質(zhì)過氧化水平的抑制有關(guān)。既往研究也顯示，阿托伐他汀的長期干預(yù)可顯著增強(qiáng)大鼠心肌過氧化氫酶、超氧化物歧化酶、一氧化氮合酶等抗氧化酶的活性，也從另一個(gè)側(cè)面提示其抗衰老作用可能與其增強(qiáng)抗氧化酶活性、抑制脂質(zhì)過氧化水平有關(guān)。此外，本研究結(jié)果顯示，高、低劑量組MDA、H2O2、GSH-Px水平較青年對照組仍有顯著差異，表明盡管阿托伐他汀干預(yù)可顯著抑制老年大鼠心肌的脂質(zhì)過氧化水平，但仍未達(dá)到青年對照組水平。提示，阿托伐他汀干預(yù)并不能完全逆轉(zhuǎn)老年大鼠心肌過氧化水平，通過藥物干預(yù)只能延緩心臟衰老性改變，并不能完全逆轉(zhuǎn)這一生理趨勢。目前，關(guān)于阿托伐他汀抗衰老及抗氧化作用的具體機(jī)制尚不清楚，還需進(jìn)一步研究。

［1］ Delgado Montero A，Zamorano J L．Atorvastatin calcium plus amlodipine for the treatment of hypertension［J］．Expert Opin Pharmacother，2012，13(18):2673-2685．

［2］ Kotl?ga D，Ciecwiez S，Turowska Kowalska J，et al．Pathogenetic justification of statin use in ischaemic stroke prevention according to inflammatory theory in development of atherosclerosis［J］．Neurol Neurochir Pol，2012，46(2):176-183．

［3］ 李曉濤，張惠軍，郭喜朝，等．阿托伐他汀對冠心病患者血清脂聯(lián)素和瘦素的影響［J］．首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，33(1):126-127．

［4］ Padhy B M，Yadav R，Gupta Y K．Hypolipidaemic and anti-inflammatory effects of fixed dose combination of atorvastatin plusezetimibe in Indian patients with dyslipidaemia［J］．Singapore Med J，2013，54(2):90-95．

［5］ 王福龍，王甄真，陳雁．衰老的分子機(jī)制與干預(yù)研究的最新進(jìn)展［J］．中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào)，2012，34(8):739-748．

［6］ Schon E A，Przedborski S．Mitochondria:the next(neurode)generation［J］．Neuron，2011，70(6):1033-1053．

［7］ Harman D．Aging:a theory based on free radical and radiation chemistry［J］．JGerontol，1956，11(3):298-300．

［8］ Ashok B T，Ali R．The aging paradox:free radical theory of aging［J］．Exp Gerontol，1999，34(3):293-303．

［9］ Johnson F B，Sinclair D A，Guarente L．Molecular biology of aging［J］．Cell，1999，96(2):291-302．

［10］劉靈芝．丹紅注射液對自然衰老大鼠心臟、大腦組織SOD、MDA及GSH-Px的影響［J］．中國實(shí)用神經(jīng)疾病雜志，2012，15(17):73-74．

［11］張書偉，張莉蓉．兩頭毛水提物對衰老小鼠心、肝及腎組織中MDA、GSH和SOD含量的影響［J］．鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2011，46(5):735-736．

［12］魏曉東，鄧連瑞，張惠丹，等．靈芝多糖抗H2O2誘導(dǎo)的HDF細(xì)胞衰老及其機(jī)制的研究［J］．中國老年學(xué)雜志，2009，29(11):1347-1349．

［13］黃俊杰，王彩冰，黃麗娟，等．maFGF對慢性衰老大鼠肝組織ATP酶、SOD活力及丙二醛和羥自由基水平的影響［J］．重慶醫(yī)學(xué)，2011，40(34):3469-3471．

［14］宮鐵紅，付淑華，牛嗣云，等．衰老大鼠睪丸組織SOD、MDA和血清睪酮含量的變化［J］．承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，29(1):14-16．

［15］鄧彩霞，藍(lán)賢俊，農(nóng)文田，等．川芎對衰老小鼠腦組織SOD和MDA及羥自由基的影響［J］．醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐，2012，25(5):499-500．

［16］欒增強(qiáng)，曹文富，黃和賢，等．延衰合劑對D-半乳糖衰老小鼠血清SOD、MDA、IL-2和睪酮的影響［J］．中國藥房，2011，22(7):589-591．