蒙藥漏蘆花中黃酮類化合物的研究

吳吉英，白玉霞，斯日棍其其格

內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院，通遼 028300

蒙藥漏蘆花，蒙藥名為洪古日朱勒，為菊科植物祁州漏蘆Rhaponticum uniflorum (L.)DC.的干燥頭狀花序。在蒙醫(yī)臨床中有較長(zhǎng)的使用歷史，具有殺“粘”，止刺痛，清熱，解毒，解表等功能;用于腸刺痛，瘟熱，發(fā)癥，結(jié)喉，麻疹，毒熱，心熱，血熱，熾熱，新陳熱，傷熱等病癥［1］。洪古日朱勒主要分布在東北，華北地區(qū)及朝鮮，俄羅斯，蒙古國(guó)等地［2］，生于草甸、山石縫間，細(xì)筋狀的根多分枝，葉片有似瑪瑙鋸齒，鋪撲在地上，花小，無(wú)氣味，味苦，堅(jiān)硬，莖中空具縱棱［3］。采集于夏季初除去總苞皮并儲(chǔ)藏陰涼干燥處［4］。目前國(guó)內(nèi)外專家和學(xué)者對(duì)漏蘆花化學(xué)成分研究報(bào)道［5-10］較少，初步確認(rèn)其中含有黃酮、揮發(fā)油、植物甾醇、萜類、單糖等成分。為進(jìn)一步探明漏蘆花藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)對(duì)其黃酮類化合物進(jìn)行了研究，分離并鑒定了10個(gè)化合物，它們分別為:5，7，3'-三羥基-6，4'-二甲氧基黃酮(1)、5，7，3'-三羥基-4'-甲氧基黃酮(2)、芹菜素(3)、木犀草素(4)、槲皮素(5)、木犀草素-7-O-α-D -葡萄糖苷(6)、槲皮素-3-O-α-D -鼠李糖苷(7)、芹菜素-7-O-α-D-葡萄糖醛酸甲酯苷(8)、蘆丁(9)、芹菜素-7-O-α-D-葡萄糖醛酸苷(10)。

1 儀器與材料

核磁共振譜采用Bruker ARX-600 型核磁共振譜儀測(cè)定(德國(guó)Bruker 公司)。半制備高效液相色譜儀(LC6-AD 輸液泵，SPD-10Avp 檢測(cè)器，SCL-10Avp 工作站)。大孔樹脂(天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所)。氘代試劑為Cambridge Isotope Laboratories，InC。柱色譜試劑均為分析純。

漏蘆花采集于內(nèi)蒙古錫林郭勒烏珠穆沁旗，由內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院蒙藥生藥學(xué)教研室主任布和巴特爾教授鑒定為菊科植物祁州漏蘆Rhaponticum uniflorum (L.)DC.的干燥頭狀花序。漏蘆花Rhaponticum uniflorum (L.)DC.標(biāo)本保存于內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院蒙藥化學(xué)教研室。

2 提取分離

漏蘆花1.4 kg，用80%乙醇31.5 L 回流提取三次，每次3 h，合并提取液，減壓回收乙醇，得總提取物約163.5 g。提取物加水適量，攪拌成混懸液，分別用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取。乙酸乙酯萃取部分26 g，加水溶解，轉(zhuǎn)移置1000 mL 容量瓶，再用水至刻度，混勻，即得上柱樣品溶液。將處理好的D101樹脂200 g，裝柱，吸取上柱樣品溶液，上柱，以2 mL/min 的流速進(jìn)行吸附，先用水洗至流出液不顯molish 反應(yīng)，依次用20%、40%、60%、80%乙醇溶液各2000 mL 洗脫，洗脫液編號(hào)為流份A-D，減壓回收至干，分別得到流份A 為3.50 g、流份B為7.82 g、流份C 為8.88 g 和流份D 為2.01 g。流份D500 mg，加色譜甲醇50 mL 溶解，溶液過(guò)濾，經(jīng)反相制備HPLC，甲醇-水(45∶55)洗脫，得化合物1(13 mg)、化合物2(22 mg)和化合物3(16 mg)化合物4(18 mg);流份C 200 mg，加色譜甲醇20 mL 溶解，溶液過(guò)濾，經(jīng)反相制備HPLC，甲醇-水(39∶61)洗脫，得化合物5(35 mg)和化合物10(42 mg);流份B 500 mg，加色譜甲醇50 mL 溶解，溶液過(guò)濾，經(jīng)反相制備HPLC，甲醇-水(31∶69)洗脫，得化合物6(21 mg)、化合物7(16 mg)和化合物8(27 mg)化合物9(12 mg);

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 黃色結(jié)晶(甲醇)，紫外光下顯黃色熒光，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽(yáng)性，推測(cè)為黃酮類化合物。1H NMR(DMSO-d6)δ:7.52 (1H，dd，J=8.4，2.4 Hz，H-6')，6.91 (1H，d，J=8.4 Hz，H-5')，7.49 (1H，d，J=2.4 Hz，H-2')，6.51 (1H，s，H-8)，6.93(1H，s，H-3)，13.01 (1H，s，5-OH)，3.89 (3H，s，-OCH3)，3.74 (3H，s，-OCH3)。13C NMR(DMSO-d6)δ:164.5 (C-2)，103.7 (C-3)，180.8 (C-4)，152.4(C-5)，130.8 (C-6)，156.2 (C-7)，91.8 (C-8)，153.6 (C-9)，101.9 (C-10)，121.3 (C-1')，112.3(C-2')，146.3 (C-3')，148.8 (C-4')，115.9 (C-5')，119.8(C-6')。據(jù)以上數(shù)據(jù)并與文獻(xiàn)［11］對(duì)照，鑒定該化合物為5，7，3'-三羥基-6'，4'-二甲氧基黃酮。

化合物2 黃色結(jié)晶(甲醇)，紫外光下顯黃色熒光，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽(yáng)性，推測(cè)為黃酮類化合物。1H NMR(DMSO-d6)δ:7.51 (1H，dd，J=7.8，1.8 Hz，H-6')，6.95 (1H，d，J=7.8 Hz，H-5')，7.50 (1H，d，J=1.8 Hz，H-2')，6.47 (1H，d，J=1.8 Hz，H-8)，6.21 (1H，d，J=1.8 Hz，H-6)，6.87 (1H，s，H-3)，13.04 (1H，s，5-OH)，3.86 (3H，s，-OCH3)。13C NMR(DMSO-d6)δ:163.6 (C-2)，104.0 (C-3)，180.9 (C-4)，155.4 (C-5)，98.8 (C-6)，164.2 (C-7)，93.8 (C-8)，161.6 (C-9)，102.8 (C-10)，119.8(C-1')，112.9 (C-2')，146.5 (C-3')，150.6 (C-4')，111.9 (C-5')，121.5(C-6')。據(jù)以上數(shù)據(jù)并與文獻(xiàn)［11］對(duì)照，鑒定該化合物為5，7，3'-三羥基-4'-甲氧基黃酮。

化合物3 黃色結(jié)晶(甲醇)，紫外光下顯黃色熒光，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽(yáng)性，推測(cè)為黃酮類化合物。1H NMR(DMSO-d6)δ:7.91 (2H，d，J=7.2 Hz，H-2'，6')，6.91 (2H，d，J=7.2 Hz，H-3'，5')，6.49 (1H，d，J=1.2 Hz，H-8)，6.18 (1H，d，J=1.2 Hz，H-6)，6.88 (1H，s，H-3)，12.95 (1H，s，5-OH)，10.65(2H，s，7，4'-OH)。13C NMR(DMSO-d6)δ:157.4 (C-2)，103.7 (C-3)，181.8 (C-4)，163.8 (C-5)，98.9(C-6)，164.2 (C-7)，94.0 (C-8)，161.2 (C-9)，102.9 (C-10)，121.2 (C-1')，128.5 (C-2')，116.0(C-3')，161.3 (C-4')，116.0 (C-5')，128.5(C-6')。據(jù)以上數(shù)據(jù)并與文獻(xiàn)［12］對(duì)照，鑒定該化合物為芹菜素。

化合物4 黃色結(jié)晶(甲醇)，紫外光下顯黃色熒光，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽(yáng)性，推測(cè)為黃酮類化合物。1H NMR(DMSO-d6)δ:7.38 (1H，dd，J=7.8，1.8 Hz，H-6')，6.91 (1H，d，J=7.8 Hz，H-5')，7.43 (1H，d，J=1.8 Hz，H-2')，6.48 (1H，d，J=1.8 Hz，H-8)，6.20 (1H，d，J=1.8 Hz，H-6)，6.63 (1H，s，H-3)，12.24 (1H，s，5-OH)，10.20 (1H，s，7-OH)，9.65 (2H，s，3'，4'-OH)。據(jù)以上數(shù)據(jù)并與文獻(xiàn)［12］對(duì)照，鑒定該化合物為木犀草素。

化合物5 黃色結(jié)晶(甲醇)，紫外光下顯黃色熒光，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽(yáng)性，推測(cè)為黃酮類化合物。1H NMR(DMSO-d6)δ:7.51 (1H，dd，J=8.4，2.4 Hz，H-6')，6.79 (1H，d，J=8.4 Hz，H-5')，7.61 (1H，d，J=2.4 Hz，H-2')，6.28 (1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，6.07 (1H，d，J=2.4 Hz，H-6)，12.29 (1H，s，5-OH)。據(jù)以上數(shù)據(jù)并與文獻(xiàn)［12］對(duì)照，鑒定該化合物為木犀草素。

化合物6 黃色粉末(甲醇)，鹽酸-鎂粉反應(yīng)為陽(yáng)性，Molish 反應(yīng)為陽(yáng)性，提示該化合物為一黃酮苷。1H NMR(DMSO-d6)δ:7.47 (1H，dd，J=8.4，2.4 Hz，H-6')，6.89 (1H，d，J=8.4 Hz，H-5')，7.43 (1H，d，J=2.4 Hz，H-2')，6.75 (1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，6.41 (1H，d，J=2.4 Hz，H-6)，6.89(1H，s，H-3)，12.98 (1H，s，5-OH)。13C NMR(DMSO-d6)δ:164.1 (C-2)，103.1 (C-3)，182.3 (C-4)，163.5 (C-5)，99.4 (C-6)，161.2 (C-7)，94.5 (C-8)，157.6 (C-9)，103.5 (C-10)，121.7 (C-1')，111.7 (C-2')，145.7 (C-3')，150.4 (C-4')，116.1(C-5')，117.6 (C-6')。糖的碳信號(hào)δ:98.1 (C-1″)，72.0 (C-2″)，73.7 (C-3″)，70.4 (C-4″)，71.9(C-5″)及60.9 (C-6″)，提示該糖是葡萄糖，并且在1H NMR 譜中給出了端基質(zhì)子信號(hào)δ 5.21 (1H，d，J=3.6 Hz)，顯示為α 糖苷鍵。在NOESY 譜中端基質(zhì)子信號(hào)δ 5.21 (1H，d，J=4.2 Hz)與δ 6.41(1H，d，J=2.4 Hz，H-6)和6.75 (1H，d，J=2.4 Hz，H-8)相關(guān)，說(shuō)明葡萄糖連接在木犀草素的7(位。將核磁數(shù)據(jù)進(jìn)行歸屬后與文獻(xiàn)［13］對(duì)照基本一致，鑒定為木犀草素-7-O-α-D-葡萄糖苷。

化合物7 黃色粉末(甲醇)，鹽酸-鎂粉反應(yīng)為陽(yáng)性，Molish 反應(yīng)為陽(yáng)性，提示該化合物為一黃酮苷。1H NMR(DMSO-d6)δ:7.28 (1H，dd，J=8.4，1.8 Hz，H-6')，6.99 (1H，d，J=8.4 Hz，H-5')，7.33 (1H，d，J=2.4 Hz，H-2')，6.41 (1H，d，J=1.8 Hz，H-8)，6.22 (1H，d，J=1.8 Hz，H-6)，12.70 (1H，s，5-OH)。13C NMR(DMSO-d6)δ:157.4(C-2)，134.3 (C-3)，177.8 (C-4)，161.4 (C-5)，98.9 (C-6)，164.5 (C-7)，93.8 (C-8)，156.6 (C-9)，104.2 (C-10)，120.8 (C-1')，115.8 (C-2')，145.3 (C-3')，148.6 (C-4')，115.6 (C-5')，121.2 (C-6')。糖的碳信號(hào)δ:101.9 (C-1″)，70.7 (C-2″)，70.5 (C-3″)，71.3 (C-4″)，70.1 (C-5″)及17.6 (C-6″)，提示該糖是吡喃鼠李糖，并且在1H NMR 譜中給出了端基質(zhì)子信號(hào)δ 5.28 (1H，d，J=2.4 Hz)，顯示為α 糖苷鍵。在HMBC 譜中端基質(zhì)子信號(hào)δ 5.28 (1H，d，J=2.4 Hz)與δ 134.3 (C-3)相關(guān)，說(shuō)明吡喃鼠李糖連接在槲皮素的3 位。根據(jù)該化合物核磁數(shù)據(jù)分析鑒定為槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷。

化合物8 黃色粉末(甲醇)，鹽酸-鎂粉反應(yīng)為陽(yáng)性，Molish 反應(yīng)為陽(yáng)性，提示該化合物為一黃酮苷。1H NMR(DMSO-d6)δ:7.94 (2H，d，J=7.8 Hz，H-2'，6')，6.93 (2H，d，J=7.8 Hz，H-3'，5')，6.85 (1H，d，J=1.2 Hz，H-8)，6.46 (1H，d，J=1.2 Hz，H-6)，6.85 (1H，s，H-3)，12.65 (1H，s，5-OH)，10.48 (1H，s，4'-OH)，5.30 (1H，d，J=3.6 Hz，端基質(zhì)子信號(hào))。13C NMR(DMSO-d6)δ:161.4(C-2)，103.2 (C-3)，182.1 (C-4)，161.3 (C-5)，99.3 (C-6)，162.5 (C-7)，94.7 (C-8)，157.0 (C-9)，105.6 (C-10)，126.1 (C-1')，128.7 (C-2')，116.1 (C-3')，164.1 (C-4')，116.1 (C-5')，128.7 (C-6')。糖的碳信號(hào)δ:99.1 (C-1″)，75.5 (C-2″)，75.2 (C-3″)，75.1 (C-4″)，72.1 (C-5″)，169.2 (C-6″)，52.1 (-CH3)。在HMBC 譜中，δ 3.71 (3H，s)與169 (C-6″)相關(guān)，提示該糖是葡萄糖醛酸甲酯，并且在1H NMR 譜中給出了端基質(zhì)子信號(hào)δ 5.30(1H，d，J=3.6 Hz)，顯示為α 糖苷鍵。在HMBC譜中端基質(zhì)子信號(hào)δ 5.30 (1H，d，J=3.6 Hz)與δ162.5 (C-7)相關(guān)，說(shuō)明葡萄糖醛酸甲酯連接在芹菜素的7 位。根據(jù)該化合物核磁數(shù)據(jù)分析鑒定為芹菜素-7-O-α-D-葡萄糖醛酸甲酯苷。

化合物9 黃色粉末(甲醇)，鹽酸-鎂粉反應(yīng)為陽(yáng)性，Molish 反應(yīng)為陽(yáng)性，提示該化合物為一黃酮苷。1H NMR(DMSO-d6)δ:12.65 (1H，s，5-OH)，10.27 (1H，s，7-OH)，5.37 (1H，brs 葡萄糖的端基氫)，5.15 (1H，brs 鼠李糖的端基氫)，6.20 (1H，s，H-6)，6.41 (1H，s，H-8)，6.88 (1H，brs，H-5')，7.54(2H，brs，H-6'，2')。13C NMR(300MHz DMSO-d6)δ:157.7 (C-2)，134.1 (C-3)，177.5 (C-4)，161.3 (C-5)，99.1 (C-6)，161.8 (C-7)，94.2 (C-8)，156.7(C-9)，104.7 (C-10)，121.6 (C-1')，115.8 (C-2')，145.8 (C-3')，149.4 (C-4')，116.5 (C-5')，121.1(C-6')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］報(bào)道一致，且與蘆丁對(duì)照品共TLC 鑒別，Rf值相同，故確定該化合物為蘆丁。

化合物10 黃色粉末(甲醇)，鹽酸-鎂粉反應(yīng)為陽(yáng)性，Molish 反應(yīng)為陽(yáng)性，提示該化合物為一黃酮苷。1H NMR(DMSO-d6)δ:7.93 (2H，d，J=7.8 Hz，H-2'，6')，6.91 (2H，d，J=7.8 Hz，H-3'，5')，6.85 (1H，d，J=1.2 Hz，H-8)，6.45 (1H，d，J=1.2 Hz，H-6)，6.83 (1H，s，H-3)，12.60 (1H，s，5-OH)，10.41 (1H，s，4'-OH)，5.27 (1H，d，J=3.6 Hz，端基質(zhì)子信號(hào))。13C NMR(DMSO-d6)δ:161.2(C-2)，103.3 (C-3)，181.8 (C-4)，161.1 (C-5)，99.3 (C-6)，162.3 (C-7)，94.5 (C-8)，157.2 (C-9)，105.3 (C-10)，126.0 (C-1')，127.5 (C-2')，116.3 (C-3')，163.9 (C-4')，116.3 (C-5')，127.5 (C-6')。糖的碳信號(hào)δ:99.7 (C-1″)，75.1 (C-2″)，74.9 (C-3″)，74.5 (C-4″)，72.0 (C-5″)，171.0 (C-6″)?；衔?0 的1H NMR 和13C NMR 與化合物8基本一致，不同點(diǎn)是化合物10 中沒(méi)有甲基(δ52.1)的碳信號(hào)，并且在1H NMR 譜中給出了端基質(zhì)子信號(hào)δ 5.27 (1H，d，J=3.6 Hz)，顯示為α 糖苷鍵。在HMBC 譜中端基質(zhì)子信號(hào)δ 5.27 (1H，d，J=3.6 Hz)與δ162.3 (C-7)相關(guān)，說(shuō)明葡萄糖醛酸連接在芹菜素的7 位。根據(jù)該化合物核磁數(shù)據(jù)分析鑒定為芹菜素-7-O-α-D-葡萄糖醛酸苷。

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