改良離心柱法檢測ALP-L3在原發(fā)性肝細(xì)胞癌診斷中的應(yīng)用研究

肖九長，謝海燕，肖小惠

(贛州市人民醫(yī)院、南昌大學(xué)附屬贛州醫(yī)院檢驗科，江西贛州341000)

改良離心柱法檢測ALP-L3在原發(fā)性肝細(xì)胞癌診斷中的應(yīng)用研究

肖九長，謝海燕，肖小惠

(贛州市人民醫(yī)院、南昌大學(xué)附屬贛州醫(yī)院檢驗科，江西贛州341000)

目的探討甲胎蛋白異質(zhì)體(AFP-L3)在診斷原發(fā)性肝細(xì)胞癌中的臨床意義。方法選擇原發(fā)性肝細(xì)胞癌(HCC)患者117例、肝硬化患者46例、慢性肝炎患者58例，采用改良離心柱法分離血清AFP-L3，電化學(xué)發(fā)光法檢測甲胎蛋白(AFP)和AFP-L3，并計算AFP-L3與AFP含量比值[AFP-L3/AFP(%)]，以比值≥10%作為陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，分析AFP-L3(%)水平與原發(fā)性肝細(xì)胞癌的關(guān)系。結(jié)果HCC患者血清中AFP-L3(%)明顯高于其它肝病患者(P＜0.001)，靈敏度為83.8%；不同濃度AFP的HCC患者之間，AFP-L3(%)的濃度差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但隨著AFP濃度的升高，AFP-L3的陽性率也逐慚升高。結(jié)論改良離心柱法檢測AFP-L3對HCC和良性肝病的診斷具有重要意義，尤其是在低濃度AFP的原發(fā)性肝細(xì)胞癌和良性肝病的鑒別診斷方面。

原發(fā)性肝細(xì)胞癌；甲胎蛋白異質(zhì)體；改良離心柱法

原發(fā)性肝細(xì)胞癌(HCC)是我國常見惡性腫瘤之一，死亡率高，死亡率居惡性腫瘤的第二位，占全世界肝癌死亡人數(shù)的45%。HCC的實驗室診斷指標(biāo)以AFP的特異性和敏感性最高，通常認(rèn)為AFP大于400 ng/ml可以診斷為HCC，但陽性率約為64%[1]，而且部分肝炎、肝硬化、孕婦、轉(zhuǎn)移性肝癌等也可測出小量AFP，少數(shù)病例甚至大于400 ng/ml。AFP異質(zhì)體或稱AFP亞型，為肝細(xì)胞癌所特有，本研究通過改良離心柱法分離AFP-L3，并用電化學(xué)發(fā)光法檢測221例原發(fā)性肝細(xì)胞癌、肝硬化、慢性肝炎患者的AFP及AFP-L3，以探討AFP-L3在HCC診斷及鑒別診斷中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料2011年12月至2013年6月的本院住院患者和門診患者，包括原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者117例，確診符合國家衛(wèi)計委《原發(fā)性肝細(xì)胞癌診療規(guī)范(2011年版)》的診斷標(biāo)準(zhǔn)，男77例，女40例，年齡31～74歲，平均55歲；肝硬化患者46例，男34例，女12例，年齡26～67歲，平均48歲；慢性肝炎患者58例，男41例，女17例，年齡24～62歲，平均43歲；肝硬化及慢性肝炎患者經(jīng)臨床結(jié)合檢驗、影像、病理等進(jìn)行診斷。另外，選擇本院健康體檢者40名，男30例、女10例，年齡20～58歲，排除心、肝、肺、腎功能異常。

1.2 標(biāo)本采集采集受檢者空腹靜脈血3ml分離血清待檢。

1.3 檢測方法AFP-L3的分離采用改良微量離心柱法，試劑盒由北京熱景生物技術(shù)有限公司提供，分離AFP-L3時嚴(yán)格按照試劑盒中操作說明書進(jìn)行。最后離心洗脫后獲得的AFP-L3及患者血清總AFP，使用羅氏公司Cobas e601電化學(xué)發(fā)光儀及該公司生產(chǎn)的配套試劑盒[國食藥監(jiān)械(進(jìn))字2011第3401508]進(jìn)行檢測，并計算AFP-L3占總AFP的百分比，以AFP-L3/AFP(%)≥10%作為AFP-L3異常升高標(biāo)準(zhǔn)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析用SPSS11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料以(x±s)表示，計數(shù)資料χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組患者AFP-L3檢測結(jié)果原發(fā)性肝細(xì)胞癌組血清中AFP-L3(%)明顯高于肝硬化組和慢性肝炎組(P＜0.01)；原發(fā)性肝細(xì)胞癌組AFP-L3(%)陽性率明顯高于肝硬化組和慢性肝炎組(P＜0.001)；AFP-L3(%)診斷HCC的敏感性為83.8%，見表1。

2.2 原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者不同AFP濃度的AFPL3測定結(jié)果比較見表2。

3 討論

甲胎蛋白是一種單鏈糖蛋白，在凝膠電泳中具有不同的遷移率，依其分子在糖鏈部分的不同亞結(jié)構(gòu)，甲胎蛋白可分為AFP-L1、AFP-L2、AFPL3，這種分子結(jié)構(gòu)上的差異可通過與外源性植物凝集素親和力的不同將其檢出。目前AFP-L3的檢測方法有免疫交叉電泳技術(shù)、親和印跡法、植物凝集素親和層析等，但上述方法由于技術(shù)要求較高、操作繁瑣、試劑昂貴等，限制了它們在臨床上的使用。本研究采用國產(chǎn)的微量凝柱法試劑，結(jié)合羅氏電化學(xué)發(fā)光檢測方法，可以快速、簡便、經(jīng)濟(jì)地獲得AFP、AFP-L3的含量及AFP-L3與AFP比值。

表1 各組患者AFP-L3檢測結(jié)果比較

表1 各組患者AFP-L3檢測結(jié)果比較

注：與原發(fā)性肝細(xì)胞癌相比，*P<0.001。

組別總例數(shù)AFP-L3陽性例數(shù)陽性率(%)原發(fā)性肝細(xì)胞癌肝硬化慢性肝炎健康體檢者117 46 58 40 19.52±10.25 9.24±4.84*7.45±4.21*4.15±4.85*98 660 83.8 13.0*10.3*0

表2 原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者不同AFP濃度的AFP-L3測定結(jié)果比較

表2 原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者不同AFP濃度的AFP-L3測定結(jié)果比較

注：各組間比較，*P>0.05，**P<0.001。

組別(ng/ml)總例數(shù)AFP-L3陽性例數(shù)陽性率(%)≥400 200～400≤200合計66 28 23 117 19.94±11.74*18.26±10.69*17.25±9.76*66 21 11 98 100**75**47.8**

肝癌是我國常見的惡性腫瘤之一，在惡性腫瘤中的死亡率排第三，僅次于胃癌和肺癌，我國每年因患肝癌死亡的人數(shù)占全世界肝癌死亡人數(shù)的40%，是一種嚴(yán)重威脅人民生命健康的疾病[2]。肝癌起病隱匿，癌細(xì)胞形成到發(fā)展成有自覺癥狀，約需2年，在此期間，患者可無任何癥狀和體征，相當(dāng)部分患者是在肝病隨訪或健康體檢的時候，通過影像法如B超、CT偶然發(fā)現(xiàn)的?；颊咭坏┏霈F(xiàn)癥狀，大部分患者已到了肝癌的中晚期。

治療肝癌患者的關(guān)鍵是早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療。AFP作為原發(fā)性肝細(xì)胞癌的診斷標(biāo)志物，盡管在臨床上已應(yīng)用多年，也得到了廣大臨床工作者的普遍認(rèn)可，但它也存在著不足：肝炎、肝硬化等良性肝病患者及胃癌、肺癌、胰腺腫瘤等非HCC患者，AFP會升高；臨床上有30%～40%的HCC患者血清AFP含量在正常范圍內(nèi)[3]。這給用AFP作為HCC患者的早期實驗室診斷帶來困難，從而延誤病情。

2005年，美國FDA批準(zhǔn)將AFP-L3應(yīng)用于HCC的診斷，并將10%作為診斷閾值，即使患者血清AFP只有輕微的升高但AFP-L3≥10%，也高度提示HCC發(fā)生的可能[4]。本結(jié)果顯示,以AFP-L3/ AFP(%)≥10%作為HCC的陽性診斷標(biāo)準(zhǔn)，其敏感性為83.8%，均值為19.9，HCC患者的AFP-L3均值及陽性率均顯著高于肝硬化組、慢性肝炎組，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義，提示檢測AFP-L3有助于鑒別HCC與非HCC患者。

按不同的AFP濃度，將117例原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者分成三組，分別檢測AFP-L3。由表2可見，當(dāng)AFP≤200ng/ml時，AFP-L3的陽性率為47.8%；當(dāng)AFP的濃度在200ng/ml及400ng/ml之間時，AFP-L3的陽性率為75%；當(dāng)AFP濃度大于400ng/ ml時，AFP-L3的陽性率為100%，即在原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者中，隨著AFP濃度的升高，AFP-L3的陽性率也逐慚升高，三者之間存在統(tǒng)計學(xué)差異，與胡敏華等[5]報道存在差異，可能是本研究AFP低濃度HCC患者的病例過少所致。不同AFP濃度HCC患者的AFP-L3濃度差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，HCC患者的AFP-L3濃度與AFP濃度無相關(guān)性，因此，AFP-L3更適用于AFP低濃度陽性良、惡性肝病的鑒別診斷，與曹立等[6]報道一致。

文獻(xiàn)報道，AFP-L3陽性對HCC的正確預(yù)警率達(dá)94%，在臨床診斷、影像學(xué)檢查尚未發(fā)現(xiàn)肝癌特征性占位病變時，對AFP低濃度陽性病例進(jìn)行AFP-L3檢測，可以早期預(yù)警肝癌的發(fā)生，使HCC患者的診斷可提前3～28個月[4，7]。

因此，作者認(rèn)為臨床上檢測AFP-L3對于鑒別良惡性肝臟病變是很有幫助的，特別對于小肝癌的早期診斷及在低AFP含量肝病患者的鑒別診斷中，具有重要的臨床應(yīng)用價值。

[1]唐菁娟.聯(lián)合檢測血清ALP，GGT和AFP對肝癌的診斷價值[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué),2010,28(5):495.

[2]彭承宏,李松崗,劉穎斌,等.肝癌研究現(xiàn)狀[J].肝膽外科雜志,2001,9 (5):386.

[3]殷正豐.甲胎蛋白異質(zhì)體作為肝癌標(biāo)志物的臨床應(yīng)用[J].實用腫瘤雜志,2004,19(1):1-4.

[4]李冰,范公忍,曹建彪.甲胎蛋自異質(zhì)體對肝細(xì)胞癌早期診斷的臨床意義[J].醫(yī)學(xué)綜述,2012,18(19):3284-3286.

[5]胡敏華,陳燕,梁亞,等.新微量離心柱法測定甲胎蛋白異質(zhì)體對原發(fā)性肝細(xì)胞癌診斷的價值(附297例分析)[J].福建醫(yī)藥雜志, 2009,31(4):95-96.

[6]曹立,孫華寶,敖琴芳,等.ROC曲線評價甲胎蛋白異質(zhì)體對原發(fā)性肝細(xì)胞癌的診斷價值[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué),2010,28(5):465-467.

[7]何蘭香,毛智趣,黃海深,等.AFP-L3對肝癌鑒別診斷的臨床價值[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué),2013,31(3):258-259.

R735.7，R446.62

A

1674-1129(2014)05-0536-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2014.05.016

2014-06-03；

2014-06-30)

江西省贛州市科技局2011年指導(dǎo)性課題項目(編號：2011127)

肖久長，男，1969年9月生，學(xué)士學(xué)位，副主任技師，研究方向為臨床生物化學(xué)及腫瘤標(biāo)志物。