馬齒莧水提取物的平喘作用研究?

王國玉, 王 璐,李 偉,趙 翠,王浩宇,佟繼銘

(1. 承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，河北 承德 067000；2.河北省中藥研究與開發(fā)重點實驗室，河北 承德 )

馬齒莧是馬齒莧科馬齒莧屬一年生草本植物，《中華人民共和國藥典》收載馬齒莧具有清熱解毒、涼血止血等作用，對癰腫疔瘡、濕疹、丹毒等也具有治療作用，對于皮膚粗糙干燥、夜盲癥、矽肺、肺結(jié)核、皮炎、各種癰腫等治療有效。本試驗對馬齒莧水提取物(Water Extract of Portulaca oleraceaL，WEPO)平喘作用進行研究，為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物

馬齒莧干燥地上部分采自河北省承德市，經(jīng)承德醫(yī)學(xué)院藥用植物研究室鑒定為馬齒莧科植物Portulaca oleracea L.的干燥地上部分。藥材標(biāo)本[1]保存于承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所藥理毒理研究室。

1.2 試劑

磷酸組織胺(Histamine diphospate，His)為上海恒盛生物科技有限公司生產(chǎn)(批號20100224)，氯化乙酰膽堿(Acetylcholine chloride，AchC)為上海藍(lán)源生物科技有限公司生產(chǎn)(批號20101024)，氨茶堿溶液(Aminophylline，Ami)為內(nèi)蒙古蒙欣藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(批號100904)。

1.3 實驗儀器

MacLab/4e 生理記錄儀源于澳大利亞，恒溫離體浴槽源于澳大利亞，張力換能器(Made in Spain by PRNL，S.L：LE 13206)來自澳大利亞。

1.4 實驗動物

昆明種豚鼠，體質(zhì)量160～180 g、300～350 g，來源于承德醫(yī)學(xué)院動物研究所繁育場。

1.5 方法

1.5.1 WEPO 平喘作用 采用整體豚鼠平喘實驗[2]，取白色幼年豚鼠，體質(zhì)量160～180 g，雌雄兼用，分別置于4000 ml容積的密閉鐘罩內(nèi)，以超聲霧化器噴霧2%氯化乙酰膽堿和0.1%磷酸組織胺等容積混合液15 s，立即取出豚鼠，觀察豚鼠的引喘潛伏期(從噴霧開始到哮喘發(fā)作、呼吸極度困難，直至抽搐跌倒的時間)，選取引喘潛伏期<120 s豚鼠50只供試驗用。第2天將引喘潛伏期合格的豚鼠隨機分為WEPO 5 g/kg、2.5 g/kg、1.25 g/kg組和Ami 20 mg/kg組及NS對照組5組各10只，灌胃給藥(ig)，空白對照組ig等容積蒸餾水。藥后45 min以藥前同樣方法引喘。觀察引喘潛伏期及發(fā)生抽搐跌倒動物數(shù)，不喘者引喘潛伏期以360 s計。

1.5.2 WEPO平喘機制 采用離體完整氣管法(毛細(xì)管法)[3]，取體質(zhì)量300～350 g豚鼠共60只，雄雌兼用，擊后腦處死，取下從喉頭至氣管分叉處的整條氣管，快速放入盛有氧飽和Krebs-Henseleit營養(yǎng)液中，輕輕剝?nèi)テ渫庵芙M織，用營養(yǎng)液沖凈管腔內(nèi)容物，按照文獻(xiàn)方法將氣管固定于離體完整氣管描記裝置上。用注射器將整個系統(tǒng)充滿營養(yǎng)液，排出氣泡。將整個描記裝置放入20 ml恒溫麥?zhǔn)显〔蹆?nèi)，恒溫為37℃，從浴槽底部通入95%O2+5%CO2,15～20個氣泡/min，等待毛細(xì)管內(nèi)液面恒定20 min，將此時液面作為原點。分別給予不同劑量的WEPO(終濃度分別為300 μg/ml、150 μg/ml、75 μg/ml)；Ami(終濃度為30 μg/ml)和His(終濃度為 0.01 μg/ml)。觀察用藥后10 min毛細(xì)管內(nèi)液面高度的變化。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 WEPO對Ach-His誘發(fā)豚鼠喘息潛伏期及動物跌倒比率的影響

表1顯示，WEPO 1.25 g/kg、2.5 g/kg和5 g/kg劑量組動物引喘潛伏期分別為(108.2±19.1、211.3±45.2和226.9±41.5) s，與NS組(59.5±10.8) s比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05,P<0.01)。表2顯示，中、大劑量組抽搐跌倒動物的比率分別為40%和30%，與NS組(100%)比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。小劑量組抽搐跌倒動物的比率為70%，與NS組(100%)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 WEPO對離體完整氣管平滑肌張力影響

表3顯示，WEPO 75 μg/ml、150 μg/ml、300 μg/ml劑量組藥前離體氣管平滑肌裝置毛細(xì)管內(nèi)液面高度分別為(25.1±4.5、24.6±3.7、23.9±4.3) mm，藥后毛細(xì)管內(nèi)液面高度分別為(20.1±3.2、15.8±4.1、13.6±3.1) mm，用藥前后比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05,P<0.01)，提示W(wǎng)EPO具有松弛氣管平滑肌作用。

表1 WEPO對Ach-His誘發(fā)豚鼠喘息潛伏期的影響

注：WEPO 各組與Dw對照組比較：*P<0.05,**P<0.01

表2 WEPO對Ach-His誘發(fā)豚鼠喘息動物跌倒比率的影響

注：WEPO 各組與Dw對照組比較：*P<0.05；WEPO 各組與氨茶堿組比較：△P<0.05

表3 WEPO 對豚鼠離體氣管平滑肌張力的影響

注：藥前與藥后比較：*P<0.05，**P<0.01；與His比較：△△P<0.01

3 討論

支氣管哮喘是一種常見病、多發(fā)病，近年來發(fā)病率逐漸增加，嚴(yán)重危害人類健康。文獻(xiàn)報道，馬齒莧具有抗菌、抗炎、抗過敏等作用，且經(jīng)試驗證明其具有明顯的鎮(zhèn)咳作用。本實驗對新型平喘藥物研制進行了初步探討，并通過制備整體豚鼠喘息模型及離體完整氣管法觀察WEPO的平喘療效。聯(lián)合應(yīng)用His 和Ach誘發(fā)哮喘是一種常用的評價藥物平喘作用的喘息模型，His和Ach霧化噴霧誘發(fā)豚鼠支氣管痙攣，使動物窒息，導(dǎo)致抽搐跌倒。具有松弛氣管平滑肌作用的藥物可減輕由于支氣管痙攣引起的動物窒息、抽搐跌倒動物的比率。本研究結(jié)果顯示，WEPO延長引喘潛伏期，減少抽搐跌倒動物數(shù)，證明WEPO可抑制His、Ach誘發(fā)的支氣管痙攣，其作用機制尚需進一步研究。以豚鼠離體氣管平滑肌的液面高度為指標(biāo)，直接觀察用藥前后液面高度的變化。結(jié)果顯示，用藥后氣管平滑肌液面的高度明顯低于用藥前，WEPO可降低氣管平滑肌張力，說明其可抑制氣管平滑肌的興奮性，對正常完整離體氣管平滑肌有松弛作用，松弛氣管平滑肌是其平喘作用的重要環(huán)節(jié)，說明WEPO具有平喘作用，但其具體機制有待進一步研究。

[1] 賀圣文,尤敏,苗乃法,等.野生馬齒莧對PHA誘導(dǎo)的家兔淋巴細(xì)胞增殖的影響[J].廊坊醫(yī)學(xué)院報,1996,18(3):206-207.

[2] 陳安山,劉志超,夏婷,等.地枇杷水煎液對小鼠鎮(zhèn)咳作用的實驗研究[J].右江民族醫(yī)學(xué)院報,2009,5:784-785.

[3] 張會宇，向紹杰，孟莉，等.中藥細(xì)辛不同提取物平喘活性分析[J].遼寧中醫(yī)雜志，2011,38(3)：551-552.