巴西莓對急性酒精中毒小鼠的解酒及保肝作用研究

王林元 陳紹紅 屈勝勝 李 偉 黃銀峰 張建軍

（北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京，100029）

巴西莓對急性酒精中毒小鼠的解酒及保肝作用研究

王林元 陳紹紅 屈勝勝 李 偉 黃銀峰 張建軍

（北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京，100029）

目的：研究巴西莓解酒防醉及對急性酒精性肝損傷的影響。方法：急性酒精中毒實驗：小鼠按0.15 mL/10 g灌胃50%乙醇，建立急性酒精中毒動物模型，觀察小鼠活動狀況，醉酒潛伏期，醒酒時間。急性酒精性肝損傷實驗：小鼠按0.12 mL/10 g灌胃50%乙醇，建立小鼠急性酒精性肝損傷模型，觀察巴西莓對小鼠肝細胞膜通透性，肝臟脂質(zhì)過氧化反應(yīng)等的影響。結(jié)果：巴西莓可以延長醉酒潛伏期（P＜0.05），縮短醉酒動物睡眠時間，且可降低血清ALT、AST（P＜0.01），升高肝臟GSH（P＜0.05）、SOD水平，降低肝臟MDA、TG含量（P＜0.05），結(jié)論：巴西莓具有解酒防醉作用，且對酒精性肝損傷具有一定的保護作用。

巴西莓；酒精中毒；肝損傷；抗氧化

巴西莓（英文名：Acai，阿薩伊）來源于棕櫚科植物阿薩伊棕櫚樹（Euterpe Oleraceae Mart.）的新鮮果實。巴西莓原產(chǎn)于南美，秘魯傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)用該植物治療糖尿病、發(fā)燒、脫發(fā)、出血、肝炎、黃疸、腎臟疾病、肝臟疾病、瘧疾、月經(jīng)不調(diào)、經(jīng)期疼痛和肌肉酸痛等［1］。研究表明巴西莓主要具有降低氧化應(yīng)激、抗炎、調(diào)節(jié)免疫力、降低血脂、降低血糖等作用。目前巴西莓在世界范圍內(nèi)引起廣泛關(guān)注，具有巨大的開發(fā)前景。

巴西莓已于2013年作為新資源食品引入我國［2］。鑒于國外有用巴西莓的相關(guān)產(chǎn)品減輕飲酒后的不適癥狀，本研究擬探討巴西莓的防醉及保肝作用，為將其開發(fā)為解酒保肝產(chǎn)品提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 巴西莓凍干粉，由蒙維（上海）貿(mào)易有限公司提供，用蒸餾水調(diào)成糊狀置于膠體磨研磨，稀釋成0.16 g/mL、0.08 g/mL、0.04 g/mL的溶液；鹽酸納洛酮注射液，北京凱因科技有限公司（批號：20120107）；聯(lián)苯雙酯滴丸，北京協(xié)和藥廠（批號：11090203），用蒸餾水配成濃度為20 mg/mL的溶液。

1.2 試劑及儀器 95%乙醇，分析純，北京化工廠，批號：20110918，用時用蒸餾水稀釋到50%；GOT測定試劑盒，購自南京建成生物研究所（批號：20121121）；GPT測定試劑盒，購自南京建成生物研究所（批號：2121119）；GSH測定試劑盒，南京建成生物研究所（批號：20120629）；SOD測定試劑盒，購自南京建成生物研究所（批號：20121119）；TG測定試劑盒，購自北京北化康泰臨床試劑有限公司（批號：20121105）；JMS膠體磨，廊坊市冠通機械有限公司；752-C紫外-可見分光光度計：上海第三分析儀器廠；WD-2102A型自動酶標儀：北京六一儀器廠；CM1850冰凍切片機，上海徠卡儀器有限公司；Nikon Eclipse Ti-SR倒置熒光顯微鏡，日本尼康。

1.3 動物 健康雄性昆明種小鼠，體重（20±2）g，由斯貝福（北京）實驗動物中心提供，合格證號：SCXK（京）2011-0004。

1.4 方法

1.4.1 巴西莓對急性酒精中毒小鼠翻正反射的影響

雄性小鼠隨機均分成模型組，鹽酸納洛酮組，巴西莓凍干粉0.4 g/kg，0.8 g/kg，1.6 g/kg 3個劑量組，每組16只。實驗前12 h禁食不禁水，模型組按0.1 mL/10 g灌胃給予生理鹽水，巴西莓凍干粉組按0.1 m L/10 g灌胃給予不同濃度巴西莓凍干粉（0.4 g/kg，0.8 g/kg，1.6 g/kg），30 min后，模型組與巴西莓凍干粉組小鼠按0.15 mL/10 g分別灌胃給予50%乙醇，30 min后陽性藥組腹腔注射鹽酸納洛酮2 mg/kg。觀察小鼠活動狀況，以翻正反射消失時間為醉酒潛伏期，翻正反射恢復(fù)時間為醒酒時間。

1.4.2 巴西莓對急性酒精性肝損傷的保護作用 所用動物隨機分成正常對照組、模型組，聯(lián)苯雙酯組，巴西莓凍干粉0.4 g/kg，0.8 g/kg，1.6 g/kg組，每組10只。正常對照組和乙醇模型對照組均0.1 mL/10 g給予蒸餾水，陽性對照組給予聯(lián)苯雙酯200 mg/kg，巴西莓凍干粉組按0.1 mL/10 g灌胃給予不同濃度巴西莓凍干粉（0.4 g/kg，0.8 g/kg，1.6 g/kg），連續(xù)30 d。末次經(jīng)口灌胃給予受試物0.5 h后，陽性藥、巴西莓各劑量組和乙醇模型對照組經(jīng)口1次給予50%乙醇0.12 mL/10 g［3］，正常對照組給予蒸餾水。禁食16 h后，摘眼球取血，3 500 r/min離心10 min分離血清，按試劑盒方法檢測ALT、AST。取肝臟左葉，OCT包埋，并運用冰凍組織切片油紅O染色技術(shù)對肝細胞進行染色，觀察肝細胞脂肪滴的變化，利用Image Pro Plus 6.0軟件測定陽性細胞累積光密度（IOD值），分析肝臟的脂肪病變程度［4］。取部分肝組織勻漿按試劑盒方法測定GSH、SOD、MDA、TG含量［5］。

1.5 統(tǒng)計處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行處理，結(jié)果以（±s）表示，數(shù)據(jù)采用采用單因素方差分析（One-WayANOVA）進行統(tǒng)計學(xué)分析和Dunnet t檢驗，以P＜0.05作為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 巴西莓對急性酒精中毒小鼠翻正反射的影響

與模型組相比，巴西莓0.4 g/kg、0.8 g/kg、1.6 g/kg醉酒潛伏期延長，巴西莓0.8 g/kg具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），與模型組相比，巴西莓0.8 g/kg、1.6 g/kg的醒酒時間有所縮短（見表1）。

表1 巴西莓對急性酒精中毒小鼠翻正反射的影響（±s）

表1 巴西莓對急性酒精中毒小鼠翻正反射的影響（±s）

注：藥物組與模型組比較，△為P＜0.05。

組別劑量（g/kg）例數(shù)醉酒潛伏期（min）例數(shù)醒酒時間（min）15 16.4±13.5 6 298.1±66.6鹽酸納洛酮組0.002 13 22.8±19.7 13 232.7±40.6巴西莓低劑量組0.4 16 19.2±17.6 9 300.9±59.5巴西莓中劑量組0.8 13 36.2±24.0△6 297.1±33.4巴西莓高劑量組模型組1.6 15 23.7±16.7 9 261.1±85.5

2.2 巴西莓對急性酒精性肝損傷小鼠血清ALT、AST的影響 實驗期間小鼠活動正常，精神狀態(tài)、進食以及排便情況未見異常。模型組的ALT、AST均明顯高于空白組（P＜0.01）。與模型組相比，巴西莓3個劑量組ALT值均顯著降低，其中0.4 g/kg（P＜0.01）、0.8 g/kg（P＜0.05）、1.6 g/kg（P＜0.01）；巴西莓0.4 g/kg、0.8 g/kg、1.6 g/kg AST值均顯著降低（P＜0.01），見表2。

表2 巴西莓對急性酒精性肝損傷小鼠血清ALT、AST的影響（±s，N＝10）

表2 巴西莓對急性酒精性肝損傷小鼠血清ALT、AST的影響（±s，N＝10）

注：模型組與空白組比較，**為P＜0.01；藥物組與模型組比較，△為P＜0.05，△△為P＜0.01。

組別劑量（g/kg）ALT（卡門氏單位）AST（卡門氏單位）27.9±1.3 31.5±4.3模型組51.7±19.9**51.1±6.5**聯(lián)苯雙酯組0.2 41.1±5.4△44.5±10.3△巴西莓低劑量組0.4 38.2±11.8△△39.6±8.6△△巴西莓中劑量組0.8 39.9±4.3△40.0±6.2△△巴西莓劑量組1.6 38.7±9.6△△39.8±3.6空白組△△

2.3 巴西莓對急性酒精性肝損傷小鼠肝臟勻漿GSH、SOD、MDA、TG的影響 模型組的GSH明顯低于空白組（P＜0.05），具有統(tǒng)計學(xué)意義；與模型組相比巴西莓0.8 g/kg、1.6 g/kg GSH明顯升高，均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。模型組的SOD低于空白組；與模型組相比巴西莓0.4 g/kg、0.8 g/kg、1.6 g/kg SOD具有一定的升高趨勢，但不明顯。模型組的MDA及TG均明顯高于空白組（P＜0.01）；與模型組相比，巴西莓0.4 g/kg、0.8 g/kg、1.6 g/kg MDA及TG明顯降低（P＜0.05）見表3。

2.4 巴西莓對急性酒精性肝損傷小鼠肝組織病理改變的影響 油紅O染色結(jié)果顯示，模型組大量棕色脂滴浸潤到肝細胞中，肝細胞脂肪變性，模型組陽性染色細胞的IOD值明顯高于空白組，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）（見表4）。巴西莓各劑量具有一定的改善作用，巴西莓0.4 g/kg、0.8 g/kg、1.6 g/kg與模型組相比具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01，P＜0.01）（見圖1）。

表3 巴西莓對急性酒精性肝損傷小鼠肝臟GSH、SOD、MDA、TG的影響（±s，N＝10）

表3 巴西莓對急性酒精性肝損傷小鼠肝臟GSH、SOD、MDA、TG的影響（±s，N＝10）

注：模型組與空白組比較，*為P＜0.05，**為P＜0.01；藥物組與模型組比較，△為P＜0.05。

組別劑量（g/kg）GSH（mgGSH/gprot）SOD（U/mgprot）MDA（nmol/mgprot）TG（nmol/L）3.79±0.85 462.0±95.2 1.24±0.36 0.54±0.24模型組2.49±0.58*402.8±58.6 4.75±2.03**1.22±0.42**聯(lián)苯雙酯組0.2 2.64±1.01 469.3±129.6 3.16±1.09△0.76±0.29△巴西莓低劑量組0.4 2.89±1.32 459.3±140.8 3.50±1.108△0.86±0.28△巴西莓中劑量組0.8 3.46±1.07△421.6±123.7 3.61±1.04△0.87±0.23△巴西莓高劑量組1.6 3.42±0.70△436.1±91.0 3.06±1.35△0.85±0.18空白組△

表4 巴西莓對急性酒精性肝損傷小鼠病理改變的影響（±s，N＝6）

表4 巴西莓對急性酒精性肝損傷小鼠病理改變的影響（±s，N＝6）

注：模型組與空白組比較，**為P＜0.01；藥物組與模型組比較，*為P＜0.05，△△為P＜0.01。

組別劑量（g/kg）IOD值44660.1±4890.1模型組71000.3±10092.6**聯(lián)苯雙酯組0.2 47525.6±3003.3△△巴西莓低劑量組0.4 63267.5±12470.7*巴西莓中劑量組0.8 61206.0±9089.0△△巴西莓高劑量組1.6 53071.9±14717.6空白組△△

圖1 巴西莓對急性酒精性肝損傷小鼠病理改變的影響

3 討論

回歸自然的熱潮使得各國競相挖掘本民族的天然植物用于醫(yī)療保健。數(shù)百年來南美土著使用植物治療疾病成為一種傳統(tǒng)，而這些傳統(tǒng)草藥也越來越多的進入國際市場，是傳統(tǒng)藥物學(xué)將科研轉(zhuǎn)化成生產(chǎn)力的成功范例［6］。近年來我國相繼引入了一些南美藥食兩用品種如巴西莓（阿薩伊果）、瑪咖等。它們做為新資源食品合法進入我國，經(jīng)過了嚴格的檢驗和審批，其安全性有充分的保證，如在我國成功引種，對繁榮我國經(jīng)濟具有重要意義。

隨著人民生活水平的提高，酒精的消費逐年增加，酒精中毒造成的神經(jīng)及消化系統(tǒng)損害也與日俱增［7］，如何能利用世界各種植物資源開發(fā)解酒保肝的藥物及保健品受到醫(yī)藥及食品行業(yè)的廣泛關(guān)注。進入人體的乙醇對人體的損害是多方面的，一方面，大量飲酒后酒精的吸收大于代謝，過量的乙醇就會通過循環(huán)作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)而導(dǎo)致生理及行為異常，另一方面，乙醇在肝臟氧化代謝時產(chǎn)生大量的自由基，可引起肝臟脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，使肝細胞膜及細胞器結(jié)構(gòu)遭到破壞從而引起肝細胞代謝和功能的障礙，導(dǎo)致轉(zhuǎn)氨酶升高。乙醇在代謝過程中產(chǎn)生大量的乙醛，可以直接與肝臟內(nèi)的抗氧化物質(zhì)如還原型谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）結(jié)合降低其活性，造成內(nèi)源性抗氧化劑耗竭，產(chǎn)生大量的丙二醛（MDA）等氧化物，肝臟進一步損傷，其脂肪代謝隨之發(fā)生紊亂，三酰甘油（TG）升高［8］。

巴西莓富含花青素，原花青素，黃酮，植物甾醇等成分［9］，其活性主要為抗氧化，抗炎，降脂作用等［10-12］。本研究顯示小鼠服用酒精前給予巴西莓可以延長急性酒精中毒小鼠醉酒潛伏期，并縮短其昏睡時間，具有一定的解酒作用。巴西莓可以顯著降低急性酒精性肝損傷小鼠血清ALT、AST，改善肝功能。同時，可以升高SOD、GSH活性，且能降低MDA、TG含量，說明巴西莓可以增強機體清除自由基能力，使肝臟受自由基攻擊程度降低，脂代謝趨于正常。病理結(jié)果也顯示巴西莓對急性酒精性肝損傷造成的肝臟脂代謝紊亂具有一定的改善作用。

我國傳統(tǒng)中藥很多具有保肝作用，如五味子，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，有收斂固澀，益氣生津，補腎寧心之功效［13］，是常用中藥之一。本研究保肝實驗所用陽性對照藥聯(lián)苯雙酯是合成五味子中木質(zhì)素類成分五味子丙素的中間體，是我國研究五味子時創(chuàng)制的一種治療肝炎的降酶藥物［14］。

巴西莓是南美洲地區(qū)常用草藥［1］，其引入極大豐富了我國藥食同源原料資源。加強對這些品種的活性成分，藥理作用等方面的基礎(chǔ)研究，可以促進傳統(tǒng)植物資源的有效利用，同時也促進國外天然資源與我國特有中藥資源相融合，進行更加合理的應(yīng)用。本研究表明巴西莓具有一定的解酒及保肝作用，其機制有待深入研究。

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（2014-06-25收稿 責(zé)任編輯：張文婷）

The Detoxication and Protective Effect of Acai Against Acute A lcohol Toxication and Acute A lcohol Liver Injury in M ice

Wang Linyuan，Chen Shaohong，Qu Shengsheng，LiWei，Huang Yinfeng，Zhang Jianjun
（Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China）

Objective：To study the effects of Acai（Euterpe Oleraceae Mart.）on acute alcohol toxication and protective effecton acute alcohol liver injury inm ice.Methods：Acute alcohol toxication animalmodelwas established by alcohol gavaged（50%at15 mL/kg）. The acute liver injury animalmodelwasestablished by alcohol gavaged（50%at12mL/kg）.The serum levels of ALT，AST and the content ofMDA，TG，the activity of GSH，SOD in liver of themice weremeasured.Results：Acai can shorten the recovery time of rightening reflex compared with themodel groups（P＜0.05）.The groups of Acai significantly reduced the levels of serum ALT，AST（P＜0.01）which were induced by ethanol，and the content of MDA，TG（P＜0.05），the activity of GSH in liver were significantly different compared with those of themodel groups（P＜0.05）.Conclusion：Acaihas effectof relieving alcohol toxicity and a protectiveeffecton acute alcohol liver injury inmice and itsmechanism may relate to the capacity of anti-oxidant.

Acai；Ethanol；Toxication；Liver injury；Anti-oxidant

R285.5；R575

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2014.10.024

王林元（1961.10—），男，碩士，副教授，中藥開發(fā)與產(chǎn)業(yè)化，Tel：（010）64287912，E-mail：wangly＠bucm.edu.cn