宮連消顆粒質(zhì)量標準研究

張克良 劉雪蓮 張 雯 朱 姝

（南京醫(yī)科大學(xué)附屬常州市婦幼保健院，常州，213003）

宮連消顆粒質(zhì)量標準研究

張克良 劉雪蓮 張 雯 朱 姝

（南京醫(yī)科大學(xué)附屬常州市婦幼保健院，常州，213003）

目的：研究并制定宮連消顆粒的質(zhì)量標準。方法：對江蘇江陰天江藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的宮連消顆粒劑中主要影響質(zhì)量的赤芍、白芍、鹽續(xù)斷以及酒山茱萸進行薄層色譜鑒別，采用高效液相色譜法法檢測方中君藥赤芍、白芍含量，并完成中國藥典顆粒劑下要求項目的檢查，在此基礎(chǔ)上建立質(zhì)量標準。結(jié)果：色譜圖上相應(yīng)位置出現(xiàn)相同斑點，實驗中三批宮連消顆粒中芍藥苷的含量在5.12～6.06 mg/g之間。結(jié)論：宮連消顆粒中必須含有主要影響質(zhì)量的赤、白芍、鹽續(xù)斷以及酒山茱萸，含赤芍、白芍以芍藥苷計，含量暫定不得少于3.50mg/g。

宮連消顆粒；薄層色譜；高效液相色譜法；質(zhì)量標準

宮連消顆粒是由丹參、赤芍、白芍、醋鱉甲、酒山茱萸、熟地黃、鹽續(xù)斷、杜仲、鹿角霜、紅花、雞血藤、陳皮、川芎、醋五靈脂、木香等15味中藥材制成的顆粒劑，具有養(yǎng)血柔肝，緩中止痛，斂陰收汗的功效[1]，用于月經(jīng)不調(diào)，腰膝酸痛，自汗盜汗，產(chǎn)后體虛等。本復(fù)方藥劑中赤芍、白芍為君藥，鹽續(xù)斷、酒山茱萸為臣藥，對以上4味藥進行薄層色譜鑒別；采用HPLC法檢測方中君藥赤芍和白芍含量，以芍藥苷作為含量測定的指標成分。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 薄層自動成像儀（CAMAG，REPROSTAR 3）；萬分之一天平（賽多利斯，BS110S）；KQ－250B型超聲清洗器（昆山超聲電子廠）；Agilent1260高效液相色譜儀；Agilent－G1311A四元泵；Agilent－G1322A真空脫氣器；Agilent－G1314B可變波長檢測器；CHEMSTATION B.04.02化學(xué)工作站；KQ－250B型超聲清洗機（昆山超聲儀器有限公司）；色譜柱：Lichrospher－C18（江蘇漢邦科技有限公司，200 mm×4.6 mm，5μm）；紫外分光光度計。

1.2 試藥 宮連消顆粒（由江蘇江陰天江藥業(yè)有限公司生產(chǎn)）；赤芍對照藥材，白芍對照藥材，芍藥苷（110736－200732）對照品，續(xù)斷對照藥材、川續(xù)斷皂苷Ⅵ對照品均購自于中國藥品生物制品檢定所，供鑒別用；乙腈為色譜純；水為重蒸餾水；其他試劑均為分析純；硅膠G板（青島海洋化工廠，規(guī)格10 cm×10 cm）。

2 方法與結(jié)果

2.1 TLC鑒別

2.1.1 赤芍、白芍 1）供試品溶液的制備：取本品適量，研細，取1 g，加乙醇20mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30 mL使溶解，用正丁醇振搖提取2次，15 m L/次，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，10 m L/次，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。2）對照藥材、對照品溶液的制備：另取赤芍對照藥材、白芍對照藥材各0.5 g，同法制成對照藥材溶液。再取芍藥苷對照品，加乙醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作為對照品溶液。3）薄層鑒別條件[1]：薄層板：硅膠G板（青島海洋化工廠）。點樣：供試品溶液，干浸膏溶液，對照藥材溶液各5μL，對照品溶液10μL；點狀點樣，原點距底邊15 mm。展開劑：三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開劑。展開缸：雙槽展開缸，10 cm×10 cm。展開：展開劑預(yù)平衡15 min，上行展開，展距為8 cm。檢視：噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。置日光下檢視。結(jié)果供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，主斑點一致；在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍紫色斑點。陰性樣品無干擾，色譜圖見圖1。

圖1 宮連消顆粒中赤芍與白芍的TLC鑒別圖譜

2.1.2 鹽續(xù)斷 1）供試品溶液的制備：取本品適量，研細，取約2 g，加甲醇10 m L，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 m L使溶解，作為供試品溶液。2）對照藥材溶液的制備：另取續(xù)斷對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。3）對照藥材溶液的制備：再取川續(xù)斷皂苷Ⅵ對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。4）薄層鑒別條件[1]薄層板：硅膠G板（青島海洋化工廠）；點樣：供試品溶液，對照藥材溶液，對照品溶液各5μL；點狀點樣，原點距底邊15 mm；展開劑：正丁醇－醋酸－水（4∶1∶5）的上層溶液為展開劑；展開缸：雙槽展開缸，10 cm×10 cm；展開：展開劑預(yù)平衡15 min，上行展開，展距為8 cm；檢視：噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置日光和紫外光燈（365 nm）下檢視；結(jié)果樣品與對照藥材、對照品斑點相對應(yīng)，分離度佳，重現(xiàn)性好。陰性樣品無干擾，色譜圖見圖2。

2.1.3 酒山茱萸 取本品4 g，研細，加無水乙醇20 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取[山茱萸對照]山茱萸對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。再取[馬錢苷對照]馬錢苷對照品，加無水乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄ⅥB）試驗[1]，吸取上述兩種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯－乙醇－冰醋酸（50∶10∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紫紅色斑點。由于陰性對照有干擾，故未將該系統(tǒng)收入正文。色譜圖見圖3。

圖2 宮連消顆粒鹽續(xù)斷的TLC鑒別圖譜

圖3 宮連消顆粒酒山茱萸的TLC鑒別圖譜

2.2 芍藥苷含量測定

2.2.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈－0.1%磷酸溶液（14∶86）為流動相；檢測波長：230 nm。理論板數(shù)按[芍藥苷的峰]芍藥苷峰計算應(yīng)不低于3 000[1]。

2.2.2 對照品溶液的制備 取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 m L含0.1 mg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取裝量差異項下的本品，取適量，研細，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 m L，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率50 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.3 專屬性試驗 取樣品（批號：1303323）與缺赤芍、白芍陰性樣品各1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，按擬定的供試品制備方法制備供試品溶液和陰性對照溶液。吸取上述兩種溶液及芍藥苷對照品溶液（0.224 62 mg/mL）各10μL，注入液相色譜儀。結(jié)果陰性對照色譜圖中在與芍藥苷對照品相同的保留時間未出現(xiàn)無芍藥苷峰，說明陰性對照無干擾。見圖4、圖5、圖6。

圖4 芍藥苷對照品的HPLC圖譜

圖5 宮連消顆粒的HPLC圖譜

圖6 陰性對照樣品的HPLC圖譜

由上圖可知：陰性沒有干擾。

2.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取芍藥苷對照品溶液（0.224 62 mg/mL）1、2、4、6、8、10μL，注入液相色譜儀，測定，以峰面積積分值為縱坐標，芍藥苷進樣量（μg）為橫坐標，繪制標準曲線，求得回歸方程：Y＝1 241.745 1X-5.910 6，R＝0.999 9，結(jié)果見表1，圖譜見圖7。

表1 對照品峰面積積分值與進樣量關(guān)系

2.5 重復(fù)性試驗 取宮連消顆粒（批號：1303323），平行6份，分別按正文供試品溶液制備方法制成樣品供試液，分別進樣10μL，測定芍藥苷峰面積值，計算芍藥苷含量，計算其RSD，結(jié)果見表2。

圖7 芍藥苷對照品的線性關(guān)系圖

表2 樣品的重復(fù)性試驗結(jié)果

2.6 加樣回收率試驗 取已知含量的樣品（批號：1303323，含量：6.06 mg/g）0.5 g，精密稱定，分別加入芍藥苷適量，按正文供試品溶液制備方法制成加樣回收供試品溶液，按上文[含量測定]項下的色譜條件，分別進樣10μL，以下列公式計算回收率，RSD，結(jié)果見表3。

表3 芍藥苷加樣回收率試驗

試驗結(jié)果表明：回收率在95%～100%之間，準確度試驗良好。

表4 穩(wěn)定性試驗結(jié)果

2.7 穩(wěn)定性試驗 取樣品1份（批號：1303323），按正文供試品溶液的制備方法制備供試品溶液供試液，每隔2 h進樣10μL，測定峰面積值，計算其RSD，共測定10 h，結(jié)果見表4。

結(jié)果表明：樣品供試液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 樣品測定 取樣品約1 g，精密稱定，按質(zhì)量標準上文[含量測定]項下操作，結(jié)果見表5。

表5 樣品測定結(jié)果

以上三批宮連消顆粒中芍藥苷的含量在5.12～6.06 mg/g，考慮到原料來源的差異，再加上樣品批次比較少，因此在最低含量的基礎(chǔ)上，再下浮30%，即暫定宮連消顆粒中含赤芍、白芍以芍藥苷計，含量不得少于3.50 mg/g。

3 討論

中藥制劑作為一種特殊藥品，廣發(fā)應(yīng)用于臨床，但其質(zhì)量標準建立復(fù)雜，難以達到與臨床療效具有一致性的質(zhì)量標準，中藥制劑質(zhì)量控制方法關(guān)系著中藥的發(fā)展，是中藥材擴大市場的重要課題及任務(wù)[2－3]。宮連消顆粒屬于中藥顆粒劑，以赤芍、白芍為君藥，同時含有丹參、酒山茱萸、鹽續(xù)斷、陳皮等15味中藥材，且赤芍、白芍、鹽續(xù)斷、酒山茱萸藥材的含量與臨床療效密切相關(guān)，故本研究選取赤芍、白芍、鹽續(xù)斷、酒山茱萸4種藥材為主要鑒別藥材。

赤芍、白芍的TLC鑒別方法參照《中華人民共和國藥典》2010年版第一部，選擇硅膠G板，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開劑，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱顯色藍紫色斑點，且陰性藥材無干擾。鹽續(xù)斷TLC鑒別方法選擇正丁醇－醋酸－水（4∶1∶5）的上層溶液為展開劑，噴10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰，置日光和紫外光燈（365 nm）下檢視，與中國藥典鑒別方法一致，且分離度佳，重現(xiàn)性好，顯色清晰。酒山茱萸TLC方法以馬錢苷作為對照品，照薄層色譜法進行試驗，由于陰性對照有干擾，故未采用藥典方法，而是選擇以乙酸乙酯－乙醇－冰醋酸（50∶10∶1）為展開劑，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點顯色，該方法不僅排除了干擾，且分離度佳，重現(xiàn)性好[4－7]。

芍藥苷的HPLC含量測定方法，藥典方法為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇－0.05 mmol/L磷酸二氫鉀溶液（40∶65）為流動相，檢測波長為230 nm[8－13]，且進行重復(fù)性試驗、專屬性試驗等，具體方法參照文獻[14－16]，因?qū)m連消顆粒成分復(fù)雜，本研究選擇以乙腈－0.1%磷酸溶液（14∶86）為流動相，分離度良好，專屬性試驗良好，無雜質(zhì)峰干擾芍藥苷的測定，且重復(fù)性試驗良好，加樣回收率穩(wěn)定，提取液穩(wěn)定，不同批次含量測定結(jié)果顯示均在5.12～6.06 mg/g，由此可暫定宮連消顆粒中含赤芍、白芍以芍藥苷計，含量不得少于3.50 mg/g。

綜合分析，本方法具有簡便、快速、分離度及重現(xiàn)性好等優(yōu)點，可準確測定芍藥苷總量，可用于宮連消顆粒的質(zhì)量控制方法。

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（2014－03－06收稿 責(zé)任編輯：徐穎）

Study on Quality Standards of Gonglianxiao Granu les

Zhang Keliang，Liu Xuelian，ZhangWen，Zhu Shu
（Changzhou Maternal and Child Health Care Hospital，Changzhou 213003，China）

Objective：To build up quality standards of Gonglianxiao granules.Methods：Themain influentialmedicinal herbs of Radix Paeoniae Rubra，Radix Paeoniae Alba，Radix Dipsaciand Fructus Corni from Tianjiang Pharmaceutical Ltd.in Jiangyin，Jiangsu Province were determined and submitted to TLC identification and HPLC identification.On the basis of the examinations，the quality standard of Gonglianxiao Keliwas built up.Results：We could get the corresponding spot of the testing and positive control samples at the corresponding p lace in the thin layer plate.The average content of paeoniflorin was between 5.12mg/g and 6.06mg/g.Conclusion：It is suggested by the present study that the quality standards of Gonglianxiao granules should be arranged as follows：Radix Paeoniae Rubra，Radix Paeoniae Alba，Radix Dipsaci and Fructus Cornimust be included，and the average content of paeoniflorin shall not be lower than 3.50 mg/g.

Gonglianxiao granules；TLC；HPLC；Quality Standard

R286

A

10.3969/j.issn.1673－7202.2014.07.032

常州衛(wèi)生局青年項目（編號：QN201205）

張克良，男，中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)師，副主任中藥師，E－mail：zkl4248＠163.com

朱姝（1981.11—），女，博士，中醫(yī)師，研究方向：中西醫(yī)結(jié)合婦科，E－mail：919389017＠qq.com