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    脫氫紫堇堿對內(nèi)毒素血癥大鼠心肌保護作用研究*

    2014-02-06 06:25:48黃小民蔣旭宏周晶晶
    中國中醫(yī)急癥 2014年5期
    關鍵詞:內(nèi)毒素心肌細胞血癥

    李 杏 黃小民 蔣旭宏△ 周晶晶

    (1.浙江中醫(yī)藥大學第一臨床醫(yī)學院,浙江 杭州 310053;2.浙江中醫(yī)藥大學附屬第一醫(yī)院,浙江 杭州 310006)

    內(nèi)毒素血癥是臨床急診常見的危重病。心肌損傷是內(nèi)毒素血癥的常見并發(fā)癥,死亡率極高[1]。研究發(fā)現(xiàn)脫氫紫堇堿(DHC)有明顯的抗心肌缺氧缺血作用,減少心肌細胞鈣超載,有效擴張冠狀動脈,改善循環(huán)、降低耗氧量[2]。本研究旨在探討DHC防治內(nèi)毒素血癥性心肌損傷的作用機制。現(xiàn)報告如下。

    1 材料與方法

    1.1 試劑 DHC為大連美侖生物技術有限公司產(chǎn)品;脂多糖(LPS)為 Sigma 公司產(chǎn)品;心肌酶(CK)、心肌同工酶(CK-MB)、心肌肌鈣蛋白(TnI)試劑為北京利德曼有限公司產(chǎn)品;腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)ELISA檢測試劑盒為杭州誠維生物科技有限公司產(chǎn)品。

    1.2 動物及分組 健康雄性Wistar大鼠50只,體質(zhì)量200~220 g,SPF級,由浙江中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供。按隨機數(shù)字隨機分為對照組、模型組、DHC低、中、高(2.5、5、10mg/kg)劑量組,每組 10 只。

    1.3 造模及給藥 采用一次性尾靜脈注射LPS溶液的方法,制備大鼠內(nèi)毒素血癥模型。LPS模型組、DHC各組均注射LPS溶液5mg/kg,用生理鹽水稀釋至1mL。對照組、模型組注射等容積生理鹽水。造模結(jié)束后,DHC各組予尾靜脈注射相應劑量DHC溶液。

    1.4 標本采集與檢測 給藥1 h后25%水合氯醛溶液麻醉大鼠,取左心室心肌組織,以10%甲醛固定,用于制作常規(guī)病理組織切片;腹主動脈取血,分離血清,采用酶學速率法進行測定CK、CK-MB、TnI,根據(jù)吸光度的變化,計算出酶的活性。ELISA法測定TNF-α、IL-1β,操作過程嚴格按試劑盒的說明書進行操作。

    1.5 統(tǒng)計學處理 應用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包。計量資料以(±s)表示。各組均數(shù)比較采用單因素方差分析,均數(shù)間兩兩比較用最小的顯著差異法分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結(jié) 果

    圖1 各組心肌組織變化觀察

    2.1 心肌組織病理學觀察 見圖1。HE染色后鏡下觀察提示對照組大鼠心肌細胞結(jié)構(gòu)清晰,心肌纖維完整,排列整齊,未見明顯的炎細胞及滲出物。模型組可見心肌細胞水腫明顯,心肌纖維結(jié)構(gòu)紊亂,心肌組織內(nèi)布滿炎性細胞,部分壞死灶。DHC低、中劑量組心肌細胞輕度水腫,結(jié)構(gòu)可辨,心肌組織內(nèi)少量炎性細胞浸潤,少量壞死灶;DHC高劑量組心肌細胞水腫情況及壞死狀況介于模型組與中劑量組之間。

    2.2 血清中CK、CK-MB、TnI含量的測定 見表1。與對照組相比,模型組CK、CK-MB、TnI的含量增加,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。而在DHC各組中CK、CK-MB、TnI的含量增加相對較少,低、中劑量組與模型組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01),而高劑量組與LPS模型組相比差異無統(tǒng)計學意義。

    表 1 大鼠血清中 CK、CK-MB、TnI水平比較(±s)

    表 1 大鼠血清中 CK、CK-MB、TnI水平比較(±s)

    與對照組比較, *P<0.05, **P<0.01; 與模型組比較,#P<0.05,##P<0.01。下同。

    組 別 n TnI(μg/L)對照組 10 0.016±0.005模型組 10 0.256±0.018**DHC低劑量組 10 0.116±0.309**##CK(U/L) CK-MB(U/L)1121.1±252.3 924.8±174.6 2216.2±412.1**2007.1±435.9**1802.9±376.7**#1613.0±401.6**#DHC中劑量組 10 0.067±0.012**##1475.7±349.8*##1328.3±362.2*##DHC 高劑量組 10 2035.8±468.3**1741.3±383.9**0.251±0.026**

    2.3 血清中TNF-α、IL-1β含量的測定 見表2。與對照組相比較,模型組、DHC干預組的大鼠血清中TNF-α、IL-1β 的含量均有顯著增加 (P<0.01)。 而在DHC低、中、高劑量組中TNF-α、IL-1β的含量增加與模型組相比顯著減少(P<0.01),中劑量減少最明顯。

    表 2 大鼠血清中 TNF-α、IL-1β 的測定結(jié)果(pg/mL,±s)

    表 2 大鼠血清中 TNF-α、IL-1β 的測定結(jié)果(pg/mL,±s)

    組 別 n對照組 10模型組 10 DHC低劑量組 10 TNF-α IL-1β 141.45±3.49 29.35±1.62 221.24±7.81** 40.09±1.55**179.48±7.54**## 35.73±1.47**##DHC 中劑量組 10 167.76±7.19**## 32.98±1.38**##DHC 高劑量組 10 189.25±10.77**## 36.93±1.37**##

    3 討 論

    研究表明,內(nèi)毒素血癥早期即存在心血管功能異常,臨床表現(xiàn)為心室擴張、心肌收縮功能及射血分數(shù)降低,并伴有嚴重外周血管舒張、血容量反應性降低[3]。臨床實踐中,心肌酶可反映心肌細胞的完整性,故常用心肌酶檢測法來測定心肌受損程度。CK、CK-MB及TnI是目前常用的與心肌損害有關的酶學檢查,CK主要分布在骨骼肌、心肌中,而CK-MB絕大部分存在于心肌細胞內(nèi),心肌以外的組織含量甚微,因而能更特異性的反映心肌損害嚴重程度;TnI對心肌損傷的敏感性和特異性都較高,是目前診斷心肌損傷的確定標志物,血清心肌酶濃度與心肌損害范圍呈正相關。

    內(nèi)毒素血癥心肌損傷的機制復雜多樣,TNF-α、IL-1β已被證實是內(nèi)毒素血癥發(fā)病過程中重要的炎性介質(zhì),共同參與膿毒癥心肌功能障礙的病理生理改變[3],其機制主要是通過抑制鈣離子轉(zhuǎn)運、刺激病理學NO增多、心肌能量代謝障礙[4]、影響心肌細胞興奮收縮偶聯(lián),使心肌收縮力降低。Calson等[5]發(fā)現(xiàn)TNF-α亦能誘導心肌細胞凋亡,從而促進心功能障礙。IL-1β可由內(nèi)毒素直接刺激產(chǎn)生,也可由TNF-α誘導產(chǎn)生,產(chǎn)生相同的協(xié)同作用。

    延胡索味苦、辛,性溫,歸心、肝、脾經(jīng),主要功效為活血、行氣、止痛,臨床多用于氣血瘀滯痛證?!独坠谥苏摗贩Q“心痛欲死,速覓延胡”。DHC為其生物堿提取物,為其主要生物堿之一,近代臨床多用于心腦血管疾病的治療。本研究采用DHC干預內(nèi)毒素血癥心肌損傷大鼠,實驗表明DHC低、中、高劑量組均能顯著降低TNF-α、IL-1β含量,但在心肌損傷方面,低、中劑量組明顯降低心肌酶的表達,對內(nèi)毒素心肌損傷有保護作用,其保護機制可能與下調(diào)炎癥因子TNF-α、IL-1β有關,提示抑制炎癥因子可以很好的保護心肌組織。高劑量組并沒有降低心肌酶的表達,其作用機制還不明確,有待進一步研究。

    [1] Angus DC,Linde-ZwirbleWT,Lidicker J,etal.Epidemiology of severe sepsis in the United States: analysis of incidence,outcome, and associated costs of care[J].Crit Care Med,2001,29:1303-1310.

    [2] 李杏,蔣旭宏,黃小民.脫氫紫堇堿的研究概況[J].中國中醫(yī)急癥,2013,22(12):2076-2078.

    [3] Prabhu SD.Cytok ine-inducedm odu lat ion of card iac function[J].Circ Res,2004,95(12): 1140-1153.

    [4] Merx MW,Weber C.Sepsis and the heart[J].Circulation,2007,116(7):793-802.

    [5] Carlson DL,Willis MS,White DJ, et al.Tumor necrosis factor-alpha-induced caspase activationmediates endotoxinrelated cardiac dysfunction[J].Crit Care Med,2005,33(5):1160-1162.

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