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    HPV檢測在宮頸病變病理診斷及CIN術(shù)后隨訪中的臨床意義

    2014-02-02 02:05:34馮曉潔
    關(guān)鍵詞:亞型感染率雜交

    馮曉潔

    (云南省昆明市第一人民醫(yī)院 昆明 650011)

    HPV檢測在宮頸病變病理診斷及CIN術(shù)后隨訪中的臨床意義

    馮曉潔

    (云南省昆明市第一人民醫(yī)院 昆明 650011)

    目的:探討宮頸脫落細(xì)胞人乳頭瘤病毒(HPV)亞型檢測在宮頸疾病診斷和宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)術(shù)后隨訪的意義。方法:選擇我院婦科行HPV病理檢測患者533例,其中HPV陽性120例,采用導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)進(jìn)行HPV亞型檢測,29例手術(shù)治療CIN患者隨訪3~12個月。結(jié)果:CIN及宮頸癌高危HPV感染率分別為93.3%、100%,均顯著高于宮頸炎組(P<0.05);隨著CIN宮頸病變程度的加重,HPV亞型轉(zhuǎn)陰率降低,但不同級別術(shù)后3、5、12個月的轉(zhuǎn)陰率相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論:HPV分型檢測用于宮頸疾病的篩查,可確定HPV類型,判斷是否為多重感染,為宮頸病變轉(zhuǎn)歸提供警示,也可作為CIN患者術(shù)后監(jiān)測的重要指標(biāo)。

    HPV亞型;宮頸病變;病理診斷;CIN;隨訪

    本文以2009年4月~2010年12月于我院病理科行HPV檢測患者533例作為研究對象,旨在探討HPV分型檢測在宮頸疾病診斷與治療中的意義以及在CIN術(shù)后隨訪的價(jià)值?,F(xiàn)報(bào)道如下:

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 選取2009年4月~2010年12月期間于我院婦科行HPV病理檢測的533例宮頸病變患者,從中篩選出HPV陽性患者120例(陽性率22.5%),年齡21~73歲,平均39.5歲;病理診斷結(jié)果:宮頸炎81例,CINⅠ11例,CINⅡ10例,CINⅢ9例,宮頸癌9例。120例患者均接受21種HPV亞型檢測。

    1.2 方法

    1.2.1 樣本采集 樣本采集前3 d叮囑患者不得陰道內(nèi)放藥或做陰道沖洗。患者取膀胱截石位,窺陰器擴(kuò)開陰道,暴露宮頸,宮頸或陰道殘端分泌物過多時(shí),無菌生理鹽水棉球擦拭。專用取樣器在宮頸外口2 cm處輕柔搓動,順時(shí)針旋轉(zhuǎn)5圈,慢慢取出采樣器,置入盛有專用細(xì)胞保存液的取樣管中,擰斷刷頭入管中,擰緊瓶蓋送檢。

    1.2.2 HPV基因分型檢測 采用醫(yī)用核酸分子快速雜交基因分型試劑盒(凱普生物科技有限公司生產(chǎn))檢測21種HPV亞型,包括16種高危亞型(HPV16亞型、18亞型、31亞型、33亞型、35亞型、39亞型、45亞型、51亞型、52亞型、53亞型、56亞型、58亞型、59亞型、66亞型、68亞型及HPVCP8304亞型)和5種低危亞型(HPV6亞型、11亞型、42亞型、43亞型、44亞型)。

    1.2.3 DNA提取 均勻震蕩取樣管,取0.5 mL樣本,12 000 rmp離心3 min,去除上清液,加生理鹽水漂洗1~2次,再去上清液,加裂解酶50 μL,煮沸裂解,DNA釋放。

    1.2.4 HPV-DNA聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增 按照23.5 μL∶0.75 μL的比例兌PCR-Mix與DNA Taq酶,搖勻后加入1 μL DNA模板,均勻混合后進(jìn)行PCR擴(kuò)增,儀器采用美國PE9600PCR擴(kuò)增儀。95℃變性20 s,55℃退火30 s,72℃延伸30 s,擴(kuò)增40個循環(huán)后繼續(xù)72℃延伸,計(jì)時(shí)5 min停止。

    1.2.5 導(dǎo)流雜交基因分型 雜交儀預(yù)熱45℃,雜交平臺上放入配套的21種HPV基因寡核苷酸探針的低密度基因芯片,單次可同時(shí)檢測15個樣本。雜交反應(yīng)前,將23.5 μL生物素標(biāo)記的PCR擴(kuò)增物加熱至95℃,變性10 min,置入冰水浴2 min,加入雜交液。導(dǎo)流雜交儀HybriMax TM上25℃孵育10 min,進(jìn)行導(dǎo)流雜交。雜交后,0.5 mL雜交液沖洗3次,封阻液25℃環(huán)境下封阻孵育5 min,再加入0.5 mL酶標(biāo)液,孵育3 min。沖洗液反復(fù)沖洗雜交膜,徹底去除未結(jié)合酶標(biāo)液。調(diào)節(jié)溫度至36℃,加入0.5 mL NBT/BCIP底物(Roche)顯色劑,至顯色完成。1 h內(nèi)觀察檢測結(jié)果。

    1.3 評定與分級 顯色劑顯示出藍(lán)紫色圓點(diǎn)視為陽性,根據(jù)膜條上HPV亞型分布判定感染的HPV亞型,一個圓點(diǎn)陽性為單一HPV亞型感染,兩個或兩個以上圓點(diǎn)陽性則為HPV亞型多重感染。病理檢查結(jié)果按照細(xì)胞異型性程度和范圍分為:宮頸上皮細(xì)胞正常良性細(xì)胞改變(BCC)、CINⅠ級、CINⅡ級、CINⅢ級以及鱗狀上皮癌(SCC)。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 不同宮頸疾病與HPV感染關(guān)系 120例HPV陽性患者21種HPV亞型全部檢出。隨著病變程度的加重,高危亞型HPV檢出率逐漸增高。CIN不同分級患者HPV感染率相比無顯著性差異(P>0.05);CIN及宮頸癌高危HPV感染率分別為93.3%、100%,均顯著高于宮頸炎組(P<0.05)。見表1。

    表1 不同宮頸病變組織活檢病理結(jié)果與HPV感染的關(guān)系 例

    2.2 術(shù)后不同時(shí)間內(nèi)HPV亞型檢測結(jié)果 術(shù)后隨訪12個月,其中術(shù)后6個月內(nèi)1例患者失訪,至術(shù)后12個月,失訪8例,均因聯(lián)系方式更改。見表2。

    表2 CIN患者治療后3個月、6個月、12個月HPV亞型檢測結(jié)果 例

    3 討論

    高危性HPV亞型是宮頸癌發(fā)生的主要因素,早期檢測診斷,提高宮頸癌檢出率對女性的健康意義重大[1~2]。本研究中CIN不同分級的高危HPV亞型感染率為90.9%、90.0%和100%,呈現(xiàn)增高的趨勢,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;宮頸炎、CIN及宮頸癌高危HPV感染率分別為80.2%、93.3%、100%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。因此,高危亞型HPV感染所致CIN和宮頸癌發(fā)病率明顯高于低危型,且隨著宮頸病變的加重,患者高危HPV感染率增高,與卓曉娟等的報(bào)道一致[3]。

    本研究全部CIN接受LEEP治療,術(shù)后嚴(yán)密隨訪。術(shù)后3個月CINⅠ轉(zhuǎn)陰率100%,CINⅡ轉(zhuǎn)陰率90.0%,CINⅢ轉(zhuǎn)陰率77.8%;術(shù)后6個月轉(zhuǎn)陰率分別為100%、88.9%和77.8%;術(shù)后1年隨訪22例,轉(zhuǎn)陰率分別為100%、87.5%、80.0%。提示LEEP手術(shù)對各級CIN的HPV均有清除能力,可徹底解除CINⅠ的HPV感染情況,對CINⅡ和CINⅢ的HPV清除能力略低,但這一情況可隨著術(shù)后隨訪時(shí)間的延長得到改善。建議在CIN患者接受治療后,應(yīng)當(dāng)定期復(fù)查,提高重視。

    [1]支園園,尹格平.HPV檢測在宮頸病變診斷及CIN術(shù)后隨訪中的價(jià)值[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展,2012,21(7):563-564,567

    [2]侯文靜,張蓉,朱華.TCT聯(lián)合HPV亞型檢測在CIN診斷和隨訪中的臨床意義[J].中國婦幼保健,2010,25(33):4 853-4 855

    [3]卓曉娟,陳昭日,李陽明,等.高危型HPV檢測在CINⅡ-Ⅲ治療后隨訪中的意義[J].濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2012,34(2):128-129

    R711.74

    B

    10.13638/j.issn.1671-4040.2014.02.039

    2013-10-25)

    ●研究生論壇●

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