河北大棗總黃酮的提取工藝

田秀紅，田文軒，張慧姣，閆峰，高文玲，黎梅，*

（1.河北師范大學旅游學院，河北石家莊050024；2.石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，河北石家莊050035；3.河北師范大學化學與材料科學學院，河北石家莊050024）

紅棗，又名中華大棗、小棗，棗為鼠李科（Rhamnaceae）棗屬植物（Ziziphusjujuba Mill）的果實。紅棗果肉營養(yǎng)豐富且含大量生物活性成分，如大棗皂甙Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ（ziziphus saponin Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ）、酸棗仁皂甙B（jujuboside B）、光千金藤堿（stepharine）、葡萄糖、果糖、蔗糖、環(huán)磷腺苷（cAMP）、環(huán)磷烏苷（cGMP）等，具有獨特的營養(yǎng)和藥用價值[1-4]。其中黃酮類有效成分，具有預防心腦血管疾病、防癌抗癌及抗氧化等功效[5-6]。

近年來，現(xiàn)代提取技術微波輔助、超聲波輔助等在環(huán)境、生化、食品及天然產(chǎn)物等領域得到了廣泛的應用，已廣泛用于天然產(chǎn)物中揮發(fā)油、苷類多糖、生物堿等成分的提取[7-9]。本實驗以乙醇為溶劑，用紫外分光光度法分析大棗總黃酮的含量，比較了超聲波輔助提取、常溫浸泡提取、水浴加熱提取和微波輔助提取等4 種方法，旨在獲得最佳數(shù)據(jù)，為確定紅棗總黃酮的提取工藝提供實驗參考。

1 材料與儀器

1.1 樣品和試劑

樣品：河北贊皇大棗。

試劑：蘆丁標準品由中國藥品生物制品檢定所提供；甲醇、乙醇、亞硝酸鈉、三氯化鋁、氫氧化鈉，以上試劑均為分析純試劑。

1.2 儀器

KQ-500DE 數(shù)控超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；MK-2485M 微波爐：青島海爾微波制品有限公司；HH-4 恒溫水浴鍋：金壇市科興儀器廠；T6 世紀紫外可見分光光度計：北京普析通用儀器有限責任；公司AUY220 分析天平：日本島津制作所。

2 方法

2.1 樣品前期處理方法

棗果去核后切成薄片均勻鋪在洗凈的托盤上，于60 ℃電熱鼓風干燥箱中烘至恒重，然后用研缽粉碎成粉末狀，粉碎后的樣品置于試劑瓶中，在干燥器中儲存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 分析方法

用紫外分光光度法[10]測定總黃酮含量。

2.2.1 標準曲線的繪制

準確稱取干燥至恒重的蘆丁標準品9.3 mg，加入60%乙醇，用超聲分散溶解，定量轉(zhuǎn)移至25 mL 容量瓶中，再用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即蘆丁儲備液。用吸量管吸取上述溶液0.0、0.3、0.5、0.8、1.0、1.3、1.5、1.8、2.0 mL，分別置于10 mL 容量瓶中，加60%乙醇溶液至5 mL，準確加入5%亞硝酸鈉0.3 mL，搖勻，放置6 min，再加入10%三氯化鋁溶液0.3 mL，搖勻，放置10 min，再加入4%氫氧化鈉溶液4 mL，最后加60%乙醇至刻度，搖勻，放置10 min。以未加標準品的溶液作空白，在510 nm 處測吸光度（A）。平行測定3次取平均值。測定回歸方程。

2.2.2 樣品測定

取待測大棗樣品兩份，按測標準曲線的方法測定吸光度，其中有一份不加NaOH 作為消除底色的對照液，用加NaOH 的吸光值減去對照液的吸光值，根據(jù)回歸方程計算總黃酮的含量。平行實驗3 次取平均值。

2.3 實驗方法

2.3.1 超聲波提取法

準確稱取大棗粉3 份，每份2 g。用90%甲醇、60%乙醇、去離子水各30 mL 溶解，超聲提取3 h。提取后用60%乙醇定容至50 mL 比色管中，過濾，保留濾液待用。超聲溫度分別為30 ℃和50 ℃。

2.3.2 常溫浸泡法

準確稱取大棗粉3 份，每份2 g。用90%甲醇、60%乙醇、去離子水各30 mL 溶解，常溫（28 ℃）浸泡3 h。提取后用60%乙醇定容至50 mL 比色管中，過濾，保留濾液待用。

2.3.3 水浴加熱法

準確稱取大棗粉3 份，每份2 g。用90%甲醇、60%乙醇、去離子水各30 mL 溶解，水浴加熱3 h。水浴溫度為70 ℃。提取后用60%乙醇定容至50 mL 比色管中，過濾，保留濾液待用。

2.3.4 微波提取法

準確稱取大棗粉3 份，每份2 g。用90%甲醇、60%乙醇、去離子水各30 mL 溶解，然后用微波爐提取。提取后用60%乙醇定容至50 mL 比色管中，過濾，保留濾液待用。微波時間分別為90、120、150 s。

3 結果與分析

3.1 紫外分光光度法檢測總黃酮并測定其含量

總黃酮含量分析方法，以活性成分蘆丁為標準品，在其紫外最大吸收峰510 nm 處測定總黃酮的含量。

3.1.1 標準曲線

由蘆丁標準品配制標準系列，用紫外分光光度法在510 nm 處測定蘆丁標準品的吸光度，測定的標準曲線如圖1?；貧w方程為y=22.73x+0.01873，R=0.9993。

圖1 蘆丁標準曲線Fig.1 The standard curve of rutin density

3.1.2 超聲波提取法

在不同溫度下，采用不同溶劑以超聲波輔助提取大棗中的總黃酮，結果見圖2。

圖2 溶劑和溫度對超聲波輔助提取總黃酮的影響Fig.2 Effect of solvent and temperature on ultrasound-assisted extraction of total flavonoids

圖2 表明在超聲溫度為50 ℃時，用水提取的總黃酮的提取量最高，為2.176 mg/g。而用甲醇從大棗中提取的總黃酮的量最低，為0.507 6 mg/g。

當超聲溫度為30 ℃時，用水提取大棗中的總黃酮的提取量與其它溶劑差別不大。

3.1.3 常溫浸泡法

大棗粉末樣品，以加入不同溶劑，于室溫下浸泡提取，實驗結果見圖3。

圖3 常溫浸泡和水浴加熱法提取總黃酮的對比Fig.3 Comparasion of extraction of total flavonoids with the normal temperature immersion method and the water bath heating

由圖3 可見，在常溫浸泡的條件下，用60%的乙醇從大棗中提取的總黃酮含量最高，為1.437 mg/g。

3.1.4 水浴加熱法

大棗粉末樣品，溶解在不同溶劑中，水浴加熱3 h。水浴溫度為70 ℃見圖3，可知，在水浴加熱的條件下，水浴溫度為70 ℃時，用90%的甲醇從大棗中提取的總黃酮的含量最高，為1.144 mg/g，而以60%的乙醇為溶劑提取，提取量比常溫浸泡法低。而以水為溶劑，該方法又比超聲波提取法的提取量低。

3.1.5 微波提取法

大棗粉末樣品，溶解在不同溶劑中，在微波爐中加熱不同時間提取總黃酮。結果如圖4 所示。

圖4 溶劑和微波時間對微波輔助提取總黃酮的影響Fig.4 Effect of solvent and temperature on microwave-assisted extraction of total flavonoids

微波時間為90 s 時，用水提取大棗中的總黃酮的含量最高，為1.144 mg/g，隨著微波加熱時間的增長，以水為溶劑的提取量下降。而以甲醇和乙醇作溶劑時，則微波加熱時間為120 s，總黃酮提取量比90 s 和150 s 時要高。微波加熱時間為150 s 時，各溶劑的提取量差別不大。

4 結論

采用超聲波提取法、常溫浸泡法、水浴加熱法、微波提取法4 種方法提取大棗中的總黃酮，在超聲波提取法中溫度為變量，在微波提取法中時間為變量。在超聲波提取的條件下，溫度為50 ℃時，用水作溶劑，從大棗中提取的總黃酮的含量最高，為2.176 mg/g。由此可知：從大棗中提取總黃酮的最佳方法是采用超聲波輔助的水提取方法。該方法綠色環(huán)保無污染，且方法簡便，條件溫和，易于推廣。

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