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    MMP-2和MMP-9在Hp陽(yáng)性的腦梗死患者血清中的表達(dá)

    2014-01-30 02:25:56王淑華
    中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥 2014年30期
    關(guān)鍵詞:螺桿菌幽門重度

    王淑華

    山東省菏澤市立醫(yī)院檢驗(yàn)科,山東菏澤 274000

    MMP-2和MMP-9在Hp陽(yáng)性的腦梗死患者血清中的表達(dá)

    王淑華

    山東省菏澤市立醫(yī)院檢驗(yàn)科,山東菏澤 274000

    目的 探討幽門螺桿菌(Hp)感染陽(yáng)性的腦梗死(CI)患者血清中MMP-2和MMP-9的表達(dá)情況。 方法 選取2012年1月~2014年3月在菏澤市立醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院的CI患者100例,患者均經(jīng)頭顱CT檢查、頸動(dòng)脈造影檢查并結(jié)合病史確診,同時(shí)選取無(wú)CI體征的健康體檢者100例為對(duì)照組,用ELISA法測(cè)定兩組的Hp細(xì)胞毒素相關(guān)基因蛋白(Hp-CagA-IgG),比較各組的Hp-CagA-IgG陽(yáng)性率。再把Hp-CagA-IgG陽(yáng)性的CI患者分為Hp重度感染CI組、Hp輕度感染CI組,把對(duì)照組中Hp-CagA-IgG陰性的受試者作為Hp陰性對(duì)照組。用ELISA法測(cè)定MMP-2、MMP-9,比較各組的MMP-2、MMP-9。 結(jié)果 CI組的Hp-CagA-IgG陽(yáng)性率為72.1%,明顯高于對(duì)照組的 44.6%(P<0.01)。 Hp 重度感染 CI組的 MMP-2 為(373±126)μg/L、MMP-9 為(399±137)μg/L,Hp 輕度感染CI組的 MMP-2 為(267±139)μg/L、MMP-9 為(316±132)μg/L,均明顯高于 Hp 陰性對(duì)照組(P<0.01);Hp 重度感染CI組與Hp輕度感CI組的MMP-2、MMP-9比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.01)。 結(jié)論 Hp感染能使CI患者的MMP-2和MMP-9表達(dá)量增高,從而使其發(fā)生CI的概率增高。

    腦梗死;幽門螺桿菌;感染;基質(zhì)金屬蛋白酶-2;基質(zhì)金屬蛋白酶-9

    Hp是世界上感染最普遍最廣泛的細(xì)菌之一。Hp感染導(dǎo)致消化系統(tǒng)疾病已有大量的研究,并且也已被全世界公認(rèn),但是,對(duì)Hp感染導(dǎo)致腦梗死(cerebral infarction,CI)的研究國(guó)內(nèi)外報(bào)道較少,并且還存在爭(zhēng)議,需要做大量、深入的試驗(yàn)研究來(lái)證實(shí)CI與Hp感染之間的關(guān)系和其可能的發(fā)病機(jī)制,從而為CI的早期防治提供一個(gè)新的手段和依據(jù)。本研究通過(guò)檢測(cè)Hp細(xì)胞毒素相關(guān)基因蛋白(Hp-CagA-IgG)及基質(zhì)金屬蛋白酶2和9(MMP-2和 MMP-9)在血清中的表達(dá),來(lái)探討Hp感染與CI形成之間關(guān)系及其可能的發(fā)病機(jī)制。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    選取2012年1月~2014年3月在菏澤市立醫(yī)院神內(nèi)科住院的CI患者,回顧性分析行頭顱CT/MRI檢查、頸動(dòng)脈造影檢查并結(jié)合臨床病史診斷為CI的患者100例,其中男51例,女49例,年齡49~82歲,平均(65.3±10.6)歲,患者均符合第四屆全國(guó)腦血管疾病會(huì)議制訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)。并同時(shí)選取無(wú)CI體征的健康體檢者100例為對(duì)照組,其中男50例,女50例,年齡50~85歲,平均(68.0±9.4)歲。兩組均除外消化系統(tǒng)疾病、結(jié)締組織病、肝腎系統(tǒng)疾病、免疫系疾病、合并感染性疾病、腫瘤、甲狀腺功能亢進(jìn)或減低、貧血、抗Hp治療史的患者及近期服用過(guò)抗氧化藥物 (如B族維生素或葉酸)患者。

    1.2 試劑及儀器

    1.2.1 試劑 Hp-CagA-IgG試劑盒,購(gòu)自朗頓生物科技有限公司,MMP-2和MMP-9試劑盒,購(gòu)自上海研謹(jǐn)生物科技有限公司。

    1.2.2 儀器 離心機(jī):北京醫(yī)用離心機(jī)廠,型號(hào)為L(zhǎng)D-42;酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀:美國(guó)Instruments.Inc,型號(hào)為EL×800;低溫冰箱:日本 Sanyo公司,型號(hào)為 MDF-U332;洗板機(jī):BIO-RAD公司,型號(hào)為1575;孵育箱:HIRA SAWA公司,型號(hào)為WJ-6C。

    1.3 研究方法

    用ELLSA法檢測(cè)Hp-CagA-IgG及基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2、MMP-9,嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書的操作規(guī)范去操作。

    所有受試者于清晨空腹抽取靜脈血4 ml,沿管壁緩慢注入潔凈的玻璃試管內(nèi),以3000 r/min的速度離心10 min,離心半徑為14 cm,取淡黃色上清液存于封閉玻璃試管中備用。①檢測(cè)CI組及對(duì)照組的血清Hp-CagA-IgG,比較兩組的Hp-CagA-IgG陽(yáng)性率。②根據(jù)檢測(cè)Hp-CagA-IgG的OD值大小,把Hp-CagA-IgG陽(yáng)性的CI患者分為Hp輕度感染CI組 (100≤OD≤400),Hp 重度感染 CI組(OD>400);把對(duì)照組中 Hp-CagA-IgG陰性的受試者作為Hp陰性對(duì)照組。③用ELISA法分別檢測(cè)MMP-2和MMP-9在3組(Hp陰性對(duì)照組、Hp輕度感染CI組、Hp重度感染CI組)血清中的表達(dá)。比較各組的MMP-2、MMP-9。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    數(shù)據(jù)使用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn),多個(gè)樣本均數(shù)比較采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)資料的方差分析,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 CI組與對(duì)照組Hp-CagA-IgG陽(yáng)性率的比較

    CI組的Hp-CagA-IgG陽(yáng)性率(72.1%)明顯高于對(duì)照組的44.6%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

    2.2 Hp陰性對(duì)照組、Hp輕度感染CI組、Hp重度感染 CI組 MMP-2、MMP-9的比較

    Hp輕度感染CI、Hp重度感染CI組的 MMP-2、MMP-9均明顯高于Hp陰性對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);Hp重度感染CI組與Hp輕度感染CI組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(表1)。

    表1 Hp陰性對(duì)照組、Hp輕度感染CI組、Hp重度感染CI組MMP-2、MMP-9 的比較(μg/L,±s)

    表1 Hp陰性對(duì)照組、Hp輕度感染CI組、Hp重度感染CI組MMP-2、MMP-9 的比較(μg/L,±s)

    組別 MMP-2 MMP-9 Hp陰性對(duì)照組Hp輕度感染CI組Hp重度感染CI組F值P值142±72 267±139 373±126 37.4<0.01 155±87 316±132 399±137 28.7<0.01

    3 討論

    研究表明,Hp感染后的致病作用與其菌型有關(guān)。Hp-CagA-IgG和空泡毒素(VacA)是Hp的毒力標(biāo)志。VacA可能是導(dǎo)致消化性潰瘍的重要因子,Hp-CagAIgG是一種高分子Hp抗體,Hp-CagA-IgG陽(yáng)性菌株脂多糖是一種特殊的內(nèi)毒素,其增強(qiáng)的毒力和細(xì)胞毒素性產(chǎn)物可能與CI相關(guān)[1]。Hp-CagA-IgG是Hp的一個(gè)標(biāo)志性毒力因子,具有很強(qiáng)的毒性,與致病力關(guān)系密切,雖然含量甚微,卻能引起強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答[2]。Pasceri等[3]通過(guò)對(duì)缺血性心腦血管疾病總結(jié)了10個(gè)回顧性研究、3個(gè)前瞻性研究,對(duì)Hp及其毒力菌株?duì)顩r與心腦血管疾病的關(guān)系進(jìn)行分析,結(jié)果顯示心腦血管病與Hp-CagA-IgG菌株感染之間存在相關(guān)性,Hp-CagA-IgG菌株感染極有可能是相關(guān)心腦血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。本研究結(jié)果顯示,CI組的Hp-CagA-IgG陽(yáng)性率均明顯高于對(duì)照組,顯示CI與Hp感染可能呈正相關(guān),尤其是Hp-CagA-IgG菌株感染與CI的發(fā)病機(jī)制可能有更重要的關(guān)系。Hp感染后,Hp-CagA-IgG抗體與頸動(dòng)脈血管壁相關(guān)抗原發(fā)生交叉反應(yīng),啟動(dòng)炎癥過(guò)程,誘導(dǎo)急性炎性產(chǎn)物的表達(dá)和免疫反應(yīng),導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞受損和功能障礙,進(jìn)而啟動(dòng)頸動(dòng)脈粥樣硬化的病理演變過(guò)程,誘發(fā)CI的發(fā)生[4-5]。Hp感染導(dǎo)致全身性炎癥反應(yīng),加劇粥樣硬化的發(fā)展和臨床癥狀的加重[6]。

    基質(zhì)金屬蛋白酶是一個(gè)大家族,因其需要Ca2+、Zn2+等金屬離子作為輔助因子而得名,是主要的蛋白水解酶。目前MMPs家族已分離鑒別出26個(gè)成員,編號(hào)分別為MMP-1~26。根據(jù)作用底物以及片斷同源性,將MMPs分為6類,為膠原酶、明膠酶、基質(zhì)降解素、基質(zhì)溶解素、furin活化的MMP和其他分泌型MMP。

    膠原酶為其中重要的一類,它主要有兩種形式,一種被糖化,分子量為92 kD,命名為MMP-9;另一種非糖化,分子量為72 kD,被稱為MMP-2。

    近年來(lái),動(dòng)脈粥樣硬化的“感染學(xué)說(shuō)”受到醫(yī)學(xué)界的關(guān)注[7]。炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)分泌多種炎性反應(yīng)因子和脂質(zhì)過(guò)氧化物,誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞大量分泌MMP-2、MMP-9,而MMP-2和MMP-9降解內(nèi)皮細(xì)胞基底膜參,加速低密度脂蛋白滲透,有利于單核細(xì)胞入侵,并且與內(nèi)皮細(xì)胞黏附,使內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榕菽?xì)胞,這是動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)這一[8]。此外,在泡沫化過(guò)程中,多種細(xì)胞因子調(diào)節(jié)其他細(xì)胞分泌大量的MMP-2和MMP-9,進(jìn)一步降解細(xì)胞外基質(zhì),促使脂質(zhì)條紋的形成,并且加速動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)展[9]。本研究結(jié)果顯示,Hp輕度感染 CI、Hp重度感染 CI組的MMP-2、MMP-9均明顯高于Hp陰性對(duì)照組(P<0.01);Hp重度感染CI組與Hp輕度感染CI組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),說(shuō)明Hp感染在CI的發(fā)生、發(fā)展中可能起更重要的作用。大量深入地研究Hp-CagAIgG菌株感染與炎性反應(yīng)及MMP-2和MMP-9的濃度與CI的發(fā)生、發(fā)展之間的內(nèi)在聯(lián)系必定會(huì)為CI的防治策略開拓更新的思路。

    [1]鄭東明,王金春,郝慶,等.幽門螺桿菌感染對(duì)腦梗死患者血脂及纖維蛋白原水平的影響[J].中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2004,33(1):59-60.

    [2]劉明瑜.幽門螺桿菌感染與心腦血管病關(guān)系的探討[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2011,21(8):1599-1601.

    [3]王玉梅,白彩琴.慢性產(chǎn)細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白A幽門螺桿菌感染與動(dòng)脈硬化性腦梗死的發(fā)病關(guān)系探討[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志,2004,33(9):779-781.

    [4]許先進(jìn),金立軍.幽門螺桿菌感染與冠心病相關(guān)性的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述,2010,16(2):244-248.

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    [8]周波,劉利慧.冠心病患者血清炎癥因子水平測(cè)定及其臨床意義[J].實(shí)用醫(yī)藥,2014,31(2):121-122.

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    Expression of MMP-2 and MMP-9 in serum of patients with cerebral infarction infected with Hp

    WANG Shu-hua
    Department of Clinical Laboratory,Heze Municipal Hospital of Shandong Province,Heze 274000,China

    ObjectiveTo discuss the expression of MMP-2 and MMP-9 in serum of patients with cerebral infarction(CI)infected with Helicobacter pylori(Hp).Methods100 hospitalized patients with CI in department of neurology of Heze city were selected from January 2012 to March 2014,and the patients were diagnosed exactly by skull CT and carotid arteries anglography with medical history,meanwhile,100 people conducted health examination without CI sign were selected as the control group,Hp cytotoxin associated gene protein (Hp-CagA-IgG)in the two groups was determined using ELISA method,the positive rate of Hp-CagA-IgG was compared in the two groups.Then patients with CI(positive Hp-CagA-IgG)were divided into the Hp with severe infection CI group and Hp with mild infection CI group,the negative Hp-CagA-IgG from the control group were selected as the negative Hp control group,MMP-2,MMP-9 were determined using ELISA method,MMP-2,MMP-9 in the three groups were compared.ResultsThe positive rate of Hp-CagA-IgG in the CI group(72.1%)was significantly higher than that in the control group(44.6%)(P<0.01).MMP-2 was (373±126)μg/L,MMP-9 was (399±137)μg/L in the Hp with severe infection CI group,and it was (267±139),(316±132)μg/L in the Hp with mild infection CI group,MMP-2,MMP-9 in the in the Hp with severe and mild infection CI group were higher than those in the negative Hp control group (P<0.01);there was a statistical difference of MMP-2,MMP-9 in the Hp with(P<0.01).ConclusionHp infection can cause the expression of MMP-2,MMP-9 in atients with CI to increase to increased the probability of occurrence of patients with CI.

    Cerebral infarction;Helicobacter pylori;Infection;Matrix metalloproteinase-2;Matrix metalloproteinase-9

    R743.9

    A

    1674-4721(2014)10(c)-0089-03

    王淑華(1974-),女,主管檢驗(yàn)師

    2014-08-01 本文編輯:許俊琴)

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