大鼠腦缺血再灌注損傷中細(xì)胞凋亡相關(guān)調(diào)控因子的研究進(jìn)展

林海平 王 永 沈 燕 王 舒

(天津中醫(yī)藥大學(xué)研究生院，天津 300073)

腦缺血再灌注損傷(CIRI)是指腦缺血一定時間再恢復(fù)血液供應(yīng)后，大腦功能不僅沒有得到及時恢復(fù)，反而出現(xiàn)更加嚴(yán)重的功能活動障礙。缺血再灌注損傷是一種常見、復(fù)雜的病理生理過程，其主要的損傷形式是細(xì)胞凋亡(apoptosis)。細(xì)胞凋亡是指在一定的生理和病理?xiàng)l件下，機(jī)體為了維護(hù)內(nèi)外環(huán)境的穩(wěn)定，通過多基因的調(diào)控使細(xì)胞主動死亡的過程，屬于一種生理性的細(xì)胞死亡。

近年來國內(nèi)外的很多學(xué)者從多種角度研究腦缺血再灌注后的細(xì)胞凋亡機(jī)制，發(fā)現(xiàn)多種因素參與細(xì)胞凋亡。目前研究認(rèn)為細(xì)胞凋亡主要存在兩種途徑：細(xì)胞外的死亡受體途徑和細(xì)胞內(nèi)的線粒體途徑。在缺血性腦血管病中，神經(jīng)元的細(xì)胞凋亡與壞死一樣，對神經(jīng)元的功能損害具有重要作用〔1〕。細(xì)胞凋亡主要發(fā)生在缺血程度較輕的半暗影區(qū)，是一種涉及多因素調(diào)控的復(fù)雜的主動死亡過程，其中主要包括：Caspase-3、NF-κB、Bcl-2/Bax等因子的調(diào)控。

1 Caspase-3與細(xì)胞凋亡

1.1Caspase家族 Caspase家族是一大類凋亡調(diào)控因子，最初有學(xué)者發(fā)現(xiàn)線蟲屬動物的細(xì)胞凋亡需要一種名為CED-3的蛋白，這種蛋白和哺乳動物白細(xì)胞介素-1轉(zhuǎn)換酶(ICE)是同源物，因它們均特異性地在P1位點(diǎn)的天冬氨酸殘基后切割底物，所以命名為Caspase。按其分子結(jié)構(gòu)可將Caspase家族分為3大類：I類是ICE亞家族，作用于四肽序列WEHD，主要包括Caspase-1、4、5、11和13；Ⅱ類是CPP32亞家族，最易識別DEXD序列，包括Caspase-2、3、7和10；Ⅲ類是ICE-1亞家族，作用于EXD序列，包括Caspase-6、8和9；其后兩類在細(xì)胞凋亡中起重要作用〔2，3〕。

1.2Caspase-3的激活及對細(xì)胞凋亡的作用 在Caspase家族中，Caspase-3是Caspase級聯(lián)“瀑布下游”最關(guān)鍵的凋亡執(zhí)行蛋白酶,其在正常細(xì)胞(包括神經(jīng)細(xì)胞)中以酶原形式存在，受凋亡刺激因素作用后激活，參與腦缺血再灌注后神經(jīng)元損傷的病理過程，引起細(xì)胞凋亡。研究證明Caspase-3在各種因素啟動的凋亡程序中起最后樞紐作用〔4〕，是細(xì)胞凋亡的重要執(zhí)行者和哺乳動物細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵蛋白酶，被稱作是“殺手蛋白”。

研究表明Caspase-3主要通過細(xì)胞凋亡的線粒體通路、死亡受體通路和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路來介導(dǎo)細(xì)胞凋亡〔5～7〕。(1)線粒體通路：當(dāng)缺血再灌注造成線粒體損傷后，細(xì)胞色素C(Cyt-C)作為應(yīng)激傳感器從線粒體中被誘導(dǎo)釋放到胞質(zhì)中，在ATP/dATP存在的情況下，Cyt -c能與凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)結(jié)合，使Apaf-1構(gòu)象發(fā)生改變繼而寡聚化，接著和procaspase-9 結(jié)合形成“凋亡體”，從而激活Caspase-9，活化的Caspase-9又進(jìn)一步激活下游的Caspase-3等，完成其相應(yīng)底物的剪切，引起細(xì)胞凋亡〔8〕。(2)死亡受體通路：腫瘤壞死因子超家族的死亡配體TNF-α和細(xì)胞表面的死亡受體FasL/CD95L相結(jié)合，使受體三聚化，然后通過DD(death domain)域募集銜接蛋白(如FADD)，銜接蛋白通過死亡效應(yīng)域(DED)與procaspase-8 形成一個超分子復(fù)合物(死亡誘導(dǎo)信號復(fù)合物)，然后激活Caspase-8，進(jìn)而啟動Caspase級聯(lián)反應(yīng)，激活下游的Caspase-3等，引起細(xì)胞凋亡。(3)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中由于鈣平衡的破壞和自由基蓄積引起其壓力的改變，誘導(dǎo)Caspase-12(位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜)的表達(dá)，進(jìn)而激活下游的Caspase-3，引起細(xì)胞凋亡。關(guān)于Caspase-3與腦缺血再灌注后細(xì)胞凋亡的具體作用機(jī)制，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，激活后的Caspase-3可裂解細(xì)胞內(nèi)相關(guān)酶類,破壞細(xì)胞骨架和核骨架，改變細(xì)胞形態(tài)，介導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

近年來國內(nèi)外很多學(xué)者都通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)：大鼠腦缺血再灌注后Caspase-3表達(dá)明顯增強(qiáng)，凋亡細(xì)胞明顯增加，二者之間存在明顯的時空相關(guān)性〔9，10〕；而通過向大鼠腦室內(nèi)注射Caspase-3抑制劑z-DEVD-fmk后，發(fā)現(xiàn)梗死區(qū)細(xì)胞凋亡的數(shù)量明顯減少〔11〕。這些研究均證明了腦缺血再灌注后Caspase-3的表達(dá)及其與腦缺血損傷的密切關(guān)系：在腦缺再灌注損傷的Caspase級聯(lián)反應(yīng)中，Caspase-3作為下游凋亡效應(yīng)因子起著關(guān)鍵性作用。

2 核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)與細(xì)胞凋亡

2.1NF-κB NF-κB首先是由Rwiansen在1986年發(fā)現(xiàn)的。他在成熟B細(xì)胞和漿細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)一種新的蛋白，能與免疫球蛋白κ輕鏈內(nèi)含增強(qiáng)子的特異性序列結(jié)合，該序列由10個核苷酸組成(5-GGGACTTTCC-3)，故命名為κB，是一種廣泛存在于神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞中的核轉(zhuǎn)錄因子〔12〕。其家族成員在氨基末端部位均含有一段大約300個氨基酸所組成的保守區(qū)，被稱為Rel同源結(jié)構(gòu)域，包含有DNA結(jié)合區(qū)、二聚體形成區(qū)、核定位信號(NLS)、前激肽釋放酶激活劑(PKA)磷酸化區(qū)域。根據(jù)C-末端的不同，可以將NF-κB家族成員分為兩組：第一組包括P50和P52，分別由其蛋白前體P105和Pl00裂解而來；第二組包括沒有前體的P65/RelA 、RelB 和c-Rel，其中發(fā)揮主要生理功能的是由P50-P65所形成的異源二聚體，即我們通常所指的NF-κB。

2.2NF-κB的激活及對細(xì)胞凋亡的作用 在靜息狀態(tài)下，NF-κB家族形成的二聚體與IκB-α(NF-κB的抑制蛋白)以三聚體的形式存在于胞質(zhì)中，此時的NF-κB不具有調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄的能力〔13〕，當(dāng)受到激活的蛋白激酶刺激時，IκB-α發(fā)生磷酸化,磷酸化后的IκB-α使NF-κB游離于胞漿中，迅速發(fā)生核移位，誘導(dǎo)白細(xì)胞介素-1、細(xì)胞間黏附分子、腫瘤壞死因子-α等的表達(dá)和鈣超載、氧自由基的形成，參與細(xì)胞凋亡的調(diào)控〔14，15〕，這是NF-κB主要激活途徑。此外，酪蛋白激酶2(CK2) 激活后引起IκB-α的C端磷酸化，從而使NF-κB的激活不依賴IκB，而是通過p38絲裂原活化蛋白激酶，因此p38-CK2-IκB-α也是激活NF-κB的途徑之一〔16〕。

NF-κB對細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制主要體現(xiàn)在通過調(diào)控一系列凋亡相關(guān)因子的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的。有研究認(rèn)為腦缺血再灌注可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣超載、氧自由基形成等，激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)，進(jìn)而激活NF-κB，活化后的NF-κB則誘導(dǎo)凋亡基因(如TRAIL-1和TRAIL-2 死亡受體)表達(dá)上調(diào)，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡〔17〕；而NF-κB的活化還可以通過誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)凋亡抑制蛋白c-IAP1和c-IAP2的表達(dá)，上調(diào)抗凋亡基因Bcl-2的表達(dá)，抑制線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔的開放，進(jìn)而阻止Caspase-3，7，9的活化而抑制細(xì)胞凋亡。NF-κB還可以通過對其自我吞噬作用的抑制來發(fā)揮抗凋亡作用〔18〕。Nijboer等〔19〕則認(rèn)為NF-κB在細(xì)胞凋亡中起雙重作用，早期NF-κB的激活加重腦損傷，而NF-κB的持續(xù)激活則能產(chǎn)生內(nèi)源性神經(jīng)保護(hù)因子，上調(diào)抗凋亡因子的表達(dá)，抑制細(xì)胞凋亡。Crack等〔20〕認(rèn)為NF-κB對細(xì)胞凋亡起促進(jìn)還是抑制作用主要和NF-κB的產(chǎn)生部位、刺激信號、產(chǎn)生量以及持續(xù)時間有關(guān)。

NF-κB在細(xì)胞凋亡中究竟起何種作用，目前還沒有定論。Peter等〔21〕在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)腦缺血再灌注后，與野生型老鼠比較，抗氧化劑Gpx1敲除鼠的NF-κB表達(dá)含量顯著增加，腦缺血損傷范圍明顯擴(kuò)大，大腦皮層和紋狀體區(qū)域的神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)量也相應(yīng)增加，由此推斷腦缺血再灌注后腦區(qū)的超氧化狀態(tài)引起NF-κB的過表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。通過抑制IκB-α的降解及磷酸化可以顯著降低NF-κB的活性，從而減輕缺血再灌注所引起的腦組織損傷〔22〕；而Hill等〔23〕在大鼠腦缺血再灌注損傷實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)NF-κB對細(xì)胞凋亡起抑制作用。因此NF-κB對細(xì)胞凋亡的具體作用還有待進(jìn)一步的研究。

3 Bcl-2/Bax與細(xì)胞凋亡

3.1Bcl-2家族蛋白 Bcl-2作為目前首個被確認(rèn)有抑制細(xì)胞凋亡作用的因子〔24〕，近些年成為腦缺血再灌注損傷的研究熱點(diǎn)之一，其家族成員之間的相互作用對腦缺血再灌注后神經(jīng)細(xì)胞的凋亡起了重要的調(diào)節(jié)作用。

按其結(jié)構(gòu)和對細(xì)胞凋亡的不同作用可將Bcl-2家族分為兩大類：一類為抗凋亡蛋白，主要包括Bcl-2、Bcl-xl、Bcl-w等；另一類為促凋亡蛋白，主要包括Bax、Bak、Bid等。其中Bcl-2和Bax作為Bcl-2家族蛋白的最主要成員，其表達(dá)的變化對細(xì)胞凋亡起重要的調(diào)節(jié)作用〔25〕。Bcl-2由239個氨基酸組成，主要位于線粒體膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和核膜等處，Bax是一種跨膜蛋白，主要存在于細(xì)胞內(nèi)膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中，與Bcl-2抑制細(xì)胞凋亡的作用正好相反，Bax作為Bcl-2家族中最重要的促細(xì)胞凋亡因子，能與Bcl-2形成異源二聚體，從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。

3.2Bcl-2/Bax的激活及對細(xì)胞凋亡的作用 Bcl-2和Bax作為一組重要的細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)因子，二者在正常狀態(tài)下構(gòu)成一個平衡體系。當(dāng)細(xì)胞受到各種刺激因素作用后，他們的表達(dá)就會發(fā)生變化，二者的比值決定了細(xì)胞是否凋亡：當(dāng)Bcl-2表達(dá)占優(yōu)時抑制細(xì)胞凋亡，Bax表達(dá)占優(yōu)時則促進(jìn)細(xì)胞凋亡〔26〕。當(dāng)受到凋亡刺激時，Bcl-2與其他家族成員如Bax等通過磷酸化、蛋白水解等方式，最終定位于線粒體膜，通過調(diào)節(jié)膜的通透性〔27〕，使得Bcl-2能在線粒體膜上通過多種途徑抑制細(xì)胞凋亡：(1)Bcl-2蛋白作為線粒體PT孔道的有效組成成分，其高表達(dá)后可以阻止Cyt-c等穿過線粒體膜，進(jìn)而阻止由Cyt-c所引起的凋亡程序(Caspase級聯(lián)反應(yīng))〔28〕，抑制細(xì)胞凋亡。(2)Bcl-2高表達(dá)后可以阻止bax/bak的寡聚化，從而抑制Cyt-c和AIF(凋亡介導(dǎo)因子)等重要蛋白的釋放，使細(xì)胞免于凋亡〔29〕。(3)Bcl-2還可以調(diào)節(jié)線粒體巰基的氧化還原狀態(tài)，控制其膜電位，阻斷氧化作用對細(xì)胞的破壞，改變鈣離子分布，從而激活內(nèi)源性內(nèi)切酶，抑制谷胱甘肽(GSH)的外移以降低胞內(nèi)的氧化還原電位，進(jìn)而抑制細(xì)胞凋亡。此外，Bcl-2還可以將凋亡蛋白前體Apaf-1等定位至線粒體膜上，使其不能發(fā)揮凋亡作用從而保護(hù)細(xì)胞。而 Bax當(dāng)受到凋亡刺激后，由胞質(zhì)向線粒體外膜轉(zhuǎn)位，與膜上的電壓依賴性離子通道結(jié)合， 拮抗Bcl-2對線粒體通透性的抑制作用，從而開放線粒體通透轉(zhuǎn)換孔(MPT)，最終啟動Caspase相關(guān)的凋亡級聯(lián)反應(yīng)，促進(jìn)細(xì)胞凋亡〔30〕。綜上所述，Bcl-2/Bax主要通過調(diào)節(jié)線粒體膜的通透性來調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡，二者通過在線粒體外膜形成離子通道，阻止或促進(jìn)細(xì)胞色素C的釋放，進(jìn)而調(diào)節(jié)一系列凋亡因子，完成對細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)。Hetz〔31〕通過研究發(fā)現(xiàn)，腦缺血再灌注后，Bcl-2和Bax之間的平衡狀態(tài)被打破，二者表達(dá)的比率決定了腦缺血再灌注后細(xì)胞凋亡與否：當(dāng)Bcl-2過表達(dá)時抑制細(xì)胞凋亡，相反則促進(jìn)細(xì)胞凋亡，并且還發(fā)現(xiàn)通過抑制Bax通道活性可以降低缺血再灌注后的細(xì)胞凋亡。近期國內(nèi)外研究同樣證實(shí)了Bcl-2和Bax對細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)作用，與之前的大量研究結(jié)果相似：Bcl-2對于腦缺血再灌注損傷中細(xì)胞凋亡的抑制作用十分明顯，其與Bax之間的相互作用以及二者之間表達(dá)比值的變化共同決定細(xì)胞凋亡與否〔32，33〕。

4 結(jié) 語

腦缺血再灌注損傷是一種機(jī)制復(fù)雜而又臨床常見的病理生理過程，細(xì)胞凋亡是其嚴(yán)重的損傷形式之一。有學(xué)者認(rèn)為細(xì)胞凋亡是涉及多種凋亡相關(guān)因子共同表達(dá)的結(jié)果，同時又受到多種內(nèi)外因素的調(diào)節(jié)，如細(xì)胞內(nèi)鈣失穩(wěn)態(tài)、能量代謝障礙、炎性反應(yīng)、興奮性氨基酸釋放增加、氧自由基的生成等〔34〕。

長期的研究發(fā)現(xiàn)Caspase-3、NF-κB、Bcl-2 /Bax等多種凋亡調(diào)控因子均參與了腦缺血再灌注后細(xì)胞凋亡的發(fā)生，這些因子分別作用于不同的環(huán)節(jié),對神經(jīng)細(xì)胞的凋亡起調(diào)控作用。此外，在腦缺血再灌注損傷中這些凋亡調(diào)控因子并不是單獨(dú)表達(dá)的，它們之間通過相互作用，共同構(gòu)成一個復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)體系調(diào)控細(xì)胞凋亡的發(fā)生。如Caspase-3作為Bcl-2的生理性半胱氨酸蛋白酶，對Bcl-2蛋白具有重要的酶解修飾作用，在細(xì)胞發(fā)生凋亡時，通過酶切Bcl-2蛋白來抑制Bcl-2的抗凋亡作用；另一方面，Bcl-2作為Caspase-3的上游調(diào)控因子，其過度表達(dá)可以有效抑制各種因素誘導(dǎo)的Caspase-3激活和由此產(chǎn)生的細(xì)胞凋亡〔35〕。Bax可以誘導(dǎo)Cyt-c的釋放，通過細(xì)胞凋亡的線粒體通路激活Caspase-3蛋白酶，引起細(xì)胞凋亡；同時又可以誘導(dǎo)Bcl-2等抗凋亡相關(guān)基因的表達(dá)下調(diào)〔36〕，加速細(xì)胞凋亡。NF-κB激活后可以通過相關(guān)途徑上調(diào)抗凋亡基因Bcl-2的表達(dá)，阻止Caspase-3等的活化而抑制細(xì)胞凋亡。總之，這些凋亡調(diào)控因子通過相互作用來共同完成對細(xì)胞凋亡的調(diào)控，而不僅僅是在各自凋亡通路上單獨(dú)發(fā)揮作用。因此，對這些細(xì)胞凋亡調(diào)控因子的深入研究，尤其是將其作為一個整體來綜合研究，將有利于我們進(jìn)一步探索腦缺血再灌注損傷的機(jī)制，為臨床上腦血管病的預(yù)防及治療提供新的科學(xué)依據(jù)。

5 參考文獻(xiàn)

1Danial NN，Korsmeyer SJ.Cell death：critical control points〔J〕.Cell，2004；116(2):205-19.

2Alnemri ES，Livingston DJ，Nicholson DW,etal.HumanICE/CED-3 protease nomenclature 〔J〕.Cell，1996；87(2):171.

3Hu S，Snipas SJ，Vincenz C,etal.Caspase-14 is a novel develop-mentally regulated protease 〔J〕.J Biol Chem，1998；273(45):29648-53.

4Broughton BR，Reutens DC，Sobey CG.Apoptotic mechanisms after cerebral ischemia 〔J〕.Stroke，2009；40(5):331-9.

5Solaroglu I，Tsubokawa T，Cahill J,etal.Anti-apoptotic effect of granulocyte-colony stimulating factor after focal cerebral ischemia in the rat〔J〕.Neuroscience，2006；143(4):965-74.

6Rao RV，Hermel E，Castro-Obregon S,etal.Coupling endoplasmic reticulum stress to the cell death program.Mechanism of caspase activation〔J〕.J Biol Chem，2001；276 (36):33869-74.

7Boujrad H，Gubkina O，Robert N，etal.IF-mediated programmed necrosis：a highly regulated way to die〔J〕.Cell Cycle,2007；6(21):2612-9.

8Kroemer G，Galluzzi L，Brenner C.Mitochondrial membrane permeabilization in cell death〔J〕.Physiol Rev，2007；87(1):99-163.

9Ferrer I，F(xiàn)riguls B，Dalf O,etal.Caspase- dependent and caspase- independent signaling of apopt osis in the penumbra following middle cerebrsl artery occlusion in the adult rat 〔J〕.Neuropathol Appl Neurobiol,2003；29(5):472-81.

10Zhou HP，Wang MS，Shi F，etal.Effects of acupuncture pre-conditioning on apoptosis in hippocampal neurons following ischemia-reperfusion injury in aged rats〔J〕.Zhong Hua Yi Xue Za Zhi，2011；91(17) :1203-6.

11Harrison DC，Davis RP，Bond BC,etal.Caspase mRNA expression in a rat model of focal cerebral ischemia 〔J〕.Mol Brain Res,2001；89 (1-2):133-46.

12Sen R，Baltimore D.Multiple nuclear factor interact with the immunoglobulin enhancer sequences 〔J〕.Cell，1986；46(5):705.

13Iwai K，Lee BR，Hashiguchi M,etal.IkB-alpha-specific transcript regulation by the C-terminal end of c-Rel〔J〕.FEBS Lett，2005；579(1):141-4.

14Nurmi A，Lindsberg PJ，Koistinaho M,etal.Nuclear factor-kappa B contributes to infarction after permanent focal ischemia〔J〕.Stroke,2004；35(4):987-91.

15Schwaninger M，Inta I，Herrmann O.NF-kappa B signalling in cerebral ischaemia 〔J〕.Biochem Soc Trans，2006；34(Pt6):1291-4.

16Escarcega RO，F(xiàn)uentes-Alexandro S，Carcia-Carrasco M，etal.The transcription factor nuclear factor-kappa B and caner〔J〕.Clin Oncol(R Coll Radial)，2007；19(2)：154-61.

17Hu P，Han Z，Couvillon AD，etal.Autocrine tumor necrosis factor alpha links endoplasmic reticulum stress to the membrane death receptor pathway through IRE1alpha-mediated NF-kappa B activation and down- regulation of TRAF2 expression 〔J〕.Mol Cell Biol，2006；26(8):3071-84.

18Djavaheri-Mergny M，Amelotti M，Mathieu J,etal.NF-kappa B activation represses tumor necrosis factor- alpha-induced autophagy〔J〕.J Biol Chem，2006；281(41):30373-82.

19Nijboer CH，Heijnen CJ，Groenendaal F,etal.A dual Role of the NF-kappa B pathway in neonatal hypoxic-ischemic brain damage〔J〕.Stroke,2008；39(9):2578-86.

20Crack PJ，Taylor JM.Reactive oxygen species and the modulation of stroke〔J〕.Free Radic Biol Med，2005；38(11):1433-44.

21Peter JC，Juliet MT，Ugur A,etal.Potential contribution of NF-κB in neuronal cell death in the glutathione peroxidase-1 knockout mouse in response to ischemia-reperfusion injury〔J〕.Stroke,2006；37(6):1533-8.

22Nurmi A，Lindsberq PJ，Koistinaho M,etal.Nuclear factor-kappa B contributes to infarction after permanent focal ischemia 〔J〕.Stroke,2004；35(4):987-91.

23Hill WD，Hess DC，Carroll JE,etal.The NF-kappa B inhibitor diethyl dithiocarbamate(DDTC) increases brain cell death in a transient middle cerebral artery occlusion model of ischemia〔J〕.Brain Res Bull，2001；55(3):375-86.

24Park SE，Kim SH，Hossain MA，etal.Korean red ginseng extract induces apoptosis and decreases telomerase activity in human leukemia cells〔J〕.J Ethnopharmacol，2009；121(2):304-12.

25Martin LJ.Neuronal cell death in nervous system development，disease and injury (Review)〔J〕.2011；7(5):455-78.

26Burguillos MA，Hajji N，Englund E，etal.Apoptosis-inducing factor mediates dopaminergic cell death in response to LPS-induced inflammatory stimulus：evidence in Parkinson's disease patients 〔J〕.Neurobiol Dis，2011；41(1):177-88.

27Li YZ，Lu DY，Tan WQ,etal.p53 initiates apoptosis by transcriptionally targeting the antiapoptotic protein ARC 〔J〕.Mol Cell Biol，2008；28(2):564-74.

28Sprick MR，Walczak H.The interplay between the Bcl-2 family and death receptor- mediated apoptosis 〔J〕.Biochim Biophys Acta，2004；1644 (2-3):125-32.

29Scorrano L，Korsmeyer SJ.Mechanisms of cytochrome C release by proapoptotic Bcl-2 family members〔J〕.Biochem Biophys Res Commun，2003；304(3):437-44.

30Wu C，F(xiàn)ujihara H，Yao J,etal.Different expression patterns of Bcl-2,Bcl-xl，and Bax proteins after sublethal forebrain ischemia in C57Black/Crj6 mouse striatum 〔J〕.Stroke,2003；34(7):1803-8.

31Hetz C，Vitte PA，Bombrun A,etal.Bax channel inhibitors prevent mitochondrion -mediated apoptosis and protect neurons in a model of global brain ischemia[J].J Biol Chem,2005；280(52):42960-70.

32Abas F，Alkan T，Goren B，etal.Neuroprotective effects of postconditioning on lipid peroxidation and apoptosis after focal cerebral ischemia/reperfusion injury in rats 〔J〕.Turk Neurosurg，2010；20(1):1-8.

33趙 航，王 敏，曲麗瑩，等.缺血再灌注大鼠腦皮質(zhì)Bcl-2、Bax和Caspase-3的動態(tài)表達(dá)〔J〕.中國老年學(xué)雜志,2012；7(32):2801-3.

34Taoufik E，Probert L.Ischemic neuronal damage 〔J〕.Curr Pharm Des，2008；14(33):3565-73.

35Cooke DT，Hoyt EG，Robbins RC,etal.Over expression of human Bcl-2 in syngeneic rat donor lungs preserves post transplant function and reduces intragraft caspase activity and interleukin-1 beta production 〔J〕.Transplantation，2005；79(7):762-7.

36Haddad JJ.The role of Bax/Bcl-2 and pro-caspase peptides in hypoxia / reperfusion -dependent regulation of MAPK (ERK)：discordant proteomic effect of MAPK (p38) 〔J〕.Protein Pept Lett，2007；14(4):361-71.