銅綠假單胞菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素耐藥狀況及相關(guān)耐藥基因檢測(cè)

黎忠貴

（那坡縣人民醫(yī)院，廣西 百色 533900）

銅綠假單胞菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素耐藥狀況及相關(guān)耐藥基因檢測(cè)

黎忠貴

（那坡縣人民醫(yī)院，廣西 百色 533900）

銅綠假單細(xì)胞菌（Pa）是目前臨床中較為常見(jiàn)的致病病菌之一，隨著各種抗菌藥物及抗生素與各類(lèi)侵入性手術(shù)的廣泛應(yīng)用，該病菌引起的各類(lèi)醫(yī)院感染情況日益突出，且耐藥性呈上升趨勢(shì)發(fā)展。因此，對(duì)銅綠假單細(xì)胞菌類(lèi)對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素耐藥狀及相關(guān)耐藥基因檢測(cè)具有十分重要的意義。本文就對(duì)以上內(nèi)容進(jìn)行分析及闡述。

銅綠假單細(xì)胞；β-內(nèi)酰胺酶；耐藥性；基因檢測(cè)

銅綠假單細(xì)胞菌（Pseudomon asareuginosa，Pa）對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗 生素產(chǎn)生耐藥機(jī)制主要與產(chǎn)生的β-內(nèi)酰胺酶、外膜主動(dòng)外排系統(tǒng)的表達(dá)、外膜膜通透性大幅度降低有關(guān)，可導(dǎo)致各類(lèi)醫(yī)院感染情況出現(xiàn)[1]。據(jù)2002年至2003年間，我國(guó)14家醫(yī)院對(duì)革蘭陰性細(xì)菌進(jìn)行耐藥性檢測(cè)的結(jié)果顯示，因Pa引起的感染位于革蘭陰性菌檢測(cè)結(jié)果的前三位[2]。因此，加強(qiáng)對(duì)Pa的臨床研究十分必要。下面就Pa對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素耐藥狀況及相關(guān)耐藥基因檢測(cè)進(jìn)行詳盡分析。

1 銅綠假單細(xì)胞耐藥機(jī)制

臨床研究表明，Pa耐藥機(jī)制較為復(fù)雜，且一直在被深入研究與發(fā)現(xiàn)，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的有以下幾種機(jī)制：①β-內(nèi)酰胺酶的產(chǎn)生：β-內(nèi)酰胺酶是Pa產(chǎn)生耐藥性的最主要原因，β-內(nèi)酰胺酶是一種可以將β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素水解的一種β-內(nèi)酰胺環(huán)，對(duì)滲入菌體內(nèi)部的抗生素產(chǎn)生破壞作用，而導(dǎo)致耐藥[3]；②外膜主動(dòng)外排系統(tǒng)的表達(dá)：大量研究文獻(xiàn)均表明，目前已知的主動(dòng)外排系統(tǒng)就有7種之多，這些已經(jīng)具備耐藥性的外排系統(tǒng)能夠?qū)B入細(xì)菌胞質(zhì)的抗生素排出，不同的主外排系統(tǒng)之間所作用的抗生素均有所不同；③外膜通透性大幅度下降，在細(xì)菌外膜中，蛋白質(zhì)的低滲透性能夠?qū)е露喾N抗生素不能滲入而出現(xiàn)耐藥[4]；④氨基糖苷類(lèi)鈍化酶的產(chǎn)生，氨基糖苷類(lèi)鈍化酶的產(chǎn)生是細(xì)菌對(duì)氨基糖苷類(lèi)藥物產(chǎn)生耐藥性的主要原因；⑤細(xì)菌生物膜的形成：細(xì)菌表面形成一層生物膜不但可以阻止與妨礙抗生素滲入，還能讓生物膜內(nèi)深層細(xì)菌難以得到代謝的營(yíng)養(yǎng)與氧氣，不能正常代謝，代謝物不能正常排出，對(duì)外界抗生素敏感度大幅度降低，從而產(chǎn)生耐藥性[5]。

2 銅綠假單胞菌產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶的特性

隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展與進(jìn)步，β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素，各種免疫抑制劑、腫瘤化療藥物的廣泛應(yīng)用，由于Pa引起的各種醫(yī)院感染情況日益得到人們注意與關(guān)注，其中最為主要的是Pa產(chǎn)生的多重耐藥性，給臨床診治帶來(lái)極大阻礙，特別是β-內(nèi)酰胺酶的產(chǎn)生在Pa的耐藥機(jī)制中占據(jù)最大比例[6]，下面就對(duì)Pa產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶的特性進(jìn)行詳盡分析。

Pa產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶種類(lèi)較多，目前已知的主要有以下幾種：SHV、TEM、OXA、PER、VEB、GES、β-內(nèi)酰胺酶等幾種，其外還有染色體與質(zhì)粒AmpC酶、VIM、IMP型金屬酶。目前我國(guó)發(fā)現(xiàn)最為重要的Pa產(chǎn)生的VIM-2、IMP-1型金屬酶，VEB-1、VEB-3、OXA-10、PER-1、ESBLs、SHV、TEM-1型β-內(nèi)酰胺酶[7]。其中因?yàn)門(mén)EM-1編碼基因突變而出現(xiàn)的ESBLs已經(jīng)多達(dá)80多種，這些已經(jīng)存在的突變對(duì)酶產(chǎn)生了主要以下兩種影響[8]：①增大催化腔空間，讓第三代頭孢菌素能夠充分進(jìn)入細(xì)菌內(nèi)，且被水解；②提升了第三代頭孢菌素親和力。但是在不同的人群中，因?yàn)閼?yīng)用藥物均有所不同，生活結(jié)構(gòu)不同，ESBLs基因型號(hào)均有所不同。

3 耐藥基因檢測(cè)

3.1 耐藥酶表型的檢測(cè)

Pa因?yàn)榇嬖谝欢ǖ哪さ蜐B透性與天然的耐藥性，單因藥敏結(jié)果來(lái)推測(cè)耐藥酶的表型是極為不可靠的，需要運(yùn)用多種檢測(cè)方法共同檢測(cè)才能得出準(zhǔn)確結(jié)果，下面就對(duì)幾種主要表型的檢測(cè)方法進(jìn)行一一敘述。

3.1.1 ESBL檢測(cè)：目前檢測(cè)ESBL的表型方法主要有E試驗(yàn)、雙紙片協(xié)同檢測(cè)方法。其中E試驗(yàn)是應(yīng)用較為廣泛的一種檢測(cè)方法，具有操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)，但存在容易漏檢、檢測(cè)敏感度較低等缺點(diǎn)；雙紙片檢測(cè)方法試驗(yàn)器材較為常見(jiàn)，檢測(cè)過(guò)程可控制程度較高，但是檢測(cè)結(jié)果存在重復(fù)性差，結(jié)果判斷主觀(guān)性較強(qiáng)，假陰性較高，敏感性較低等缺點(diǎn)[9]，特別值得注意的一點(diǎn)是紙片之間的距離控制是影響結(jié)果準(zhǔn)確性的一大影響因素。

3.1.2 AmpC酶檢測(cè)：AmpC酶表型的檢測(cè)主要是雙紙片氯唑西林增效實(shí)驗(yàn)，其主要依據(jù)在于：耐藥譜表型可以推斷出，假如待檢測(cè)Pa對(duì)亞胺培南存在敏感，對(duì)三代頭孢菌素耐藥，對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素、酶抑制劑復(fù)合物中介或產(chǎn)生耐藥，則可以推斷其高產(chǎn)AmpC酶。如氯唑西林指示物與頭孢類(lèi)菌素中任意一種產(chǎn)生協(xié)同現(xiàn)象，則可以推斷出Pa產(chǎn)生的AmpC酶屬陽(yáng)性，此種檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果主觀(guān)性較低，具有較高的準(zhǔn)確性與敏感性[10]。

3.1.3 金屬酶檢測(cè)：根據(jù)耐藥譜表型可以推斷，如對(duì)亞胺培南、美洛培南均產(chǎn)生耐藥，那么此類(lèi)菌株可高度推測(cè)為金屬酶產(chǎn)菌株[11]。對(duì)金屬酶表型的檢測(cè)主要方法有E試驗(yàn)與MP-EDTA紙片協(xié)同法。兩種檢測(cè)方法優(yōu)劣點(diǎn)與ESBL表型檢測(cè)相若。

3.2 耐藥酶的基因檢測(cè)

對(duì)耐藥酶進(jìn)行基因檢測(cè)是確定Pa是否存在或產(chǎn)生耐藥的最準(zhǔn)確方法。目前對(duì)耐藥酶基因檢測(cè)的方法主要有脈沖場(chǎng)凝膠電泳法（PFCE）與PCR法與核苷酸序列測(cè)定法。

3.2.1 PFCE法：它對(duì)限制性酶切片進(jìn)行分離，然后通過(guò)對(duì)每一株菌中染色體DNA進(jìn)行指紋圖譜分析比較，可以得出其克隆構(gòu)成，從而了解其流行情況。該種檢測(cè)方法具有檢測(cè)結(jié)果清楚、結(jié)果重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，但是也存在檢測(cè)過(guò)程耗費(fèi)時(shí)間多、操作過(guò)程費(fèi)力、檢測(cè)成本高、相關(guān)技術(shù)要求高等缺點(diǎn)[12]。

3.2.2 PCR法與核苷酸序列測(cè)定法：PCR能夠?qū)δ退幟钢谢虍a(chǎn)生擴(kuò)增效果，從而對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化測(cè)序。PCR進(jìn)行基因分型具有特異性與敏感度高等優(yōu)點(diǎn)，但是只能對(duì)已知的基因進(jìn)行序列對(duì)比分析，對(duì)于新型基因則容易出現(xiàn)漏檢[13]。核苷酸序列測(cè)定法主要是對(duì)耐藥酶中基因檢測(cè)結(jié)果與核苷酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)中已知基因進(jìn)行對(duì)比，是一種較為精確的檢測(cè)方法，但是也存在新型基因漏檢情況。

4 結(jié)束語(yǔ)

從上文分析可知，Pa耐藥機(jī)制較為復(fù)雜，目前眾多研究文獻(xiàn)均有一定深度與見(jiàn)解，但是對(duì)于β-內(nèi)酰胺酶抗生素耐藥機(jī)制還需要進(jìn)一步分析與深入，主要在于多種耐藥機(jī)制是否存在協(xié)同作用方面與新型準(zhǔn)確耐藥酶表型檢測(cè)方面。

[1] 崔偉歷,王露霞,林翠玲,等.銅綠假單胞菌和不動(dòng)桿菌屬對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素的耐藥分析[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2010,26(12):2220-2222.

[2] 周秀珍,劉建華,孫繼梅,等.銅綠假單胞菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素的耐藥性變遷[J].中國(guó)感染控制雜志,2010,9(1):43-45.

[3] 楊菁菁,艾效曼,胡云建,等.泛耐藥銅綠假單胞菌對(duì)β內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素的耐藥機(jī)制研究[J].中國(guó)感染與化療雜志,2013,13(1):14-18.

[4] 張齊武,牛淼,劉姝,等.361株呼吸道銅綠假單胞菌對(duì)β內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素耐藥機(jī)制分析[J].臨床肺科雜志,2009,14(5):690-691.

[5] 梁艷梅.銅綠假單胞菌產(chǎn)Ampc酶及對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素耐藥性的實(shí)驗(yàn)觀(guān)察[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)刊,2011,38(22):107-108.

[6] 陳澤恒,歐惠珍.銅綠假單胞菌β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素耐藥基因的研究[J].醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)與臨床,2012,23(1):22-25.

[7] 陶紅.銅綠假單胞菌耐藥性分析及β-內(nèi)酰胺類(lèi)耐藥基因檢測(cè)[J].中國(guó)基層醫(yī)藥,2010,17(6):833-834.

[8] 蔡興俊,吳華,黃奕江,等.體外誘導(dǎo)泛耐藥銅綠假單胞菌與臨床分離株產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶差異分析[J].臨床內(nèi)科雜志,2013,30(1):57-58.

[9] 馬穎,桓新.臨床標(biāo)本中黏液型銅綠假單胞菌的分離及耐藥性分析[J].臨床合理用藥雜志,2013,6(5):107.

[10] 高清華,萬(wàn)瑩.銅綠假單胞菌臨床感染特征及控制對(duì)策的研究進(jìn)展[J].湖北中醫(yī)雜志,2013,35(2):79-80.

[11] 韋柳華.不同標(biāo)本分離的耐碳青霉烯銅綠假單胞菌的耐藥性分析[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2013,29(1):117-119.

[12] 王芬,王朝暉,邰宏明,等.106株銅綠假單胞菌耐藥性分析及金屬β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2013,10(1):31-32.

[13] 楊菁菁,艾效曼,胡云建,等.泛耐藥銅綠假單胞菌對(duì)β內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素的耐藥機(jī)制研究[J].中國(guó)感染與化療雜志,2013,13(1):14-18.

R978.1

A

1671-8194（2014）14-0062-02