常見臨床標(biāo)本的微生物檢驗(yàn)程序分析

閻莉范

（大連市金州區(qū)第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧 大連 116100）

常見臨床標(biāo)本的微生物檢驗(yàn)程序分析

閻莉范

（大連市金州區(qū)第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧 大連 116100）

目的 為進(jìn)一步提高本文臨床標(biāo)本微生物檢驗(yàn)陽性率，對常見臨床標(biāo)本的微生物檢驗(yàn)程序進(jìn)行分析。方法 以大腸埃希菌、腦膜炎奈瑟菌舉例說明，對其微生物檢驗(yàn)程序和注意事項(xiàng)進(jìn)行逐一說明。結(jié)果 糞便樣本在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上存在黑色中心有光澤的菌落，在平板上挑選出典型菌落，玻片凝聚試驗(yàn)為不凝聚，其臨床報(bào)告結(jié)果為：“該標(biāo)本未培養(yǎng)出致病性大腸埃希菌”。該血液標(biāo)本在巧克力色血平板上有濕潤、光滑、黏性、透明、中等大小的菌落存在，經(jīng)革蘭染色呈陰性反應(yīng)，并經(jīng)相關(guān)生化檢驗(yàn)均符合腦膜炎奈瑟菌相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，其臨床檢驗(yàn)報(bào)告結(jié)果為“該標(biāo)本發(fā)現(xiàn)腦膜炎奈瑟菌生長”。結(jié)論 所有常見臨床標(biāo)本的微生物檢驗(yàn)都要本著安全、準(zhǔn)確、快速、敏感、低耗的原則，以標(biāo)準(zhǔn)化的檢驗(yàn)程序保證微生物檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性。

臨床標(biāo)本；微生物檢驗(yàn)；檢驗(yàn)程序

隨著臨床對于抗生素合理使用以及醫(yī)院感染控制等意識的顯著增強(qiáng)，對常見臨床標(biāo)本進(jìn)行微生物檢驗(yàn)已經(jīng)成為臨床醫(yī)院的一項(xiàng)重要工作[1]，該項(xiàng)工作的質(zhì)量高低可以直接反映該院的醫(yī)院感染防控水平以及相關(guān)疾病的診斷、治療情況，為進(jìn)一步提高本文臨床標(biāo)本微生物檢驗(yàn)陽性率，對常見臨床標(biāo)本的微生物檢驗(yàn)程序進(jìn)行分析?，F(xiàn)將研究情況報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料：糞便標(biāo)本、血液標(biāo)本、伊紅美藍(lán)瓊脂平板（EMB）、培養(yǎng)箱、雙糖、蔗糖胨水、胰胨肉湯、培養(yǎng)基瓶、巧克力色血平板、顯微鏡。

1.2 方法

1.2.1 大腸肝菌檢驗(yàn)：選取患者有膿血或者黏液的糞便2 g，將糞便樣本放置在滅菌的廣口瓶中，及時(shí)送檢。將糞便標(biāo)本劃線接種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，放置在（35±1） ℃的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，時(shí)間在16～24 h，培養(yǎng)后觀察菌落，在菌落中挑取大腸桿菌可疑菌落，將其移種在雙糖、蔗糖胨水中，觀察大腸桿菌生化反應(yīng)，如果符合大腸桿菌的生化反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)，再將該菌挑取下和致病性大腸桿菌的多家診斷血清聯(lián)合進(jìn)行玻片凝聚性實(shí)驗(yàn)[2]。

1.2.2 腦膜炎奈瑟菌檢驗(yàn)：在患者的擬采血位置扎好止血帶，在選擇的靜脈穿刺位置用碘酊進(jìn)行消毒，碘酊干后再使用乙醇脫碘消毒，抽取血液標(biāo)本5 mL，將血液標(biāo)本立即注入經(jīng)的液體培養(yǎng)基內(nèi)，輕輕搖晃使血液標(biāo)本和經(jīng)預(yù)熱的胰胨肉湯培養(yǎng)基液充分混合，放置在濃度為10%的二氧化碳環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)[3]，如果發(fā)現(xiàn)存在可疑細(xì)菌，挑取可疑細(xì)菌移種在巧克力色血平板上進(jìn)行劃線分離，注意要對巧克力色血平板進(jìn)行事先的預(yù)熱處理，將接種好的巧克力色血平板放置在濃度為5%～10%，溫度為35 ℃的二氧化碳環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)，時(shí)間為18～48 h，觀察是否有腦膜炎奈瑟菌生長，再提取菌落繼續(xù)進(jìn)行相關(guān)生化檢驗(yàn)以區(qū)分其他奈瑟菌。

2 結(jié) 果

2.1 大腸肝菌檢驗(yàn)：該糞便樣本在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上存在黑色中心有光澤的菌落，在平板上挑選出典型菌落，玻片凝聚試驗(yàn)為不凝聚，其臨床報(bào)告結(jié)果為：“該標(biāo)本未培養(yǎng)出致病性大腸埃希菌”。

2.2 腦膜炎奈瑟菌檢驗(yàn)：該血液標(biāo)本在巧克力色血平板上有濕潤、光滑、黏性、透明、中等大小的菌落存在，經(jīng)革蘭染色呈陰性反應(yīng)，并經(jīng)相關(guān)生化檢驗(yàn)均符合腦膜炎奈瑟菌相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，其臨床檢驗(yàn)報(bào)告結(jié)果為“該標(biāo)本發(fā)現(xiàn)腦膜炎奈瑟菌生長”。

3 討 論

大腸桿菌為一種常見的革蘭陰性短桿菌，可以發(fā)酵多種糖類，可以產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，大腸埃希菌致病物質(zhì)是血漿凝固酶，可以導(dǎo)致食物中毒及成人腹瀉的發(fā)生。腦膜炎奈瑟菌是流腦的病原菌，經(jīng)革蘭染色呈陰性，并呈雙排列，需氧，在臨床培養(yǎng)中對于營養(yǎng)基的要求很高，分解糖類不產(chǎn)氣，但是產(chǎn)酸，在進(jìn)行人工培養(yǎng)中如果不進(jìn)行及時(shí)的移種，會被自身產(chǎn)生的自溶酶所溶解。

常見的臨床標(biāo)本有血液、骨髓液、糞便、尿液、痰液等，要想達(dá)到微生物檢驗(yàn)的理想標(biāo)準(zhǔn)就一定要從標(biāo)本的采集、送檢、培養(yǎng)等各個(gè)環(huán)節(jié)入手，嚴(yán)格規(guī)范相關(guān)程序，避免由于人為原因?qū)е碌臋z驗(yàn)失敗。例如本文對于糞便標(biāo)本的采集，就要在采集后立即送檢，如果沒有及時(shí)送檢很容易出現(xiàn)雜菌的過度生長，同時(shí)在采集時(shí)要對患者進(jìn)行詳細(xì)的健康教育，避免由于糞尿混合而導(dǎo)致的陽性檢出率錯(cuò)誤，在臨床標(biāo)本的采集上需要注意無菌操作的規(guī)范性、采集時(shí)間的合理性，做好安全防護(hù)，并對樣本進(jìn)行及時(shí)的檢驗(yàn)；血液標(biāo)本的培養(yǎng)要注意血液和培養(yǎng)基的比例，通常為1∶10，并在檢驗(yàn)前要對患者的服藥情況進(jìn)行了解，如患者在檢驗(yàn)前曾經(jīng)服用過磺胺類的藥物也可以進(jìn)行檢驗(yàn)，可以在培養(yǎng)基中加入5 mL的對氨苯甲酸。

實(shí)踐中我們發(fā)現(xiàn)可以顯著提高臨床標(biāo)本微生物檢驗(yàn)質(zhì)量和水平的方法是：加速細(xì)菌生長，例如在培養(yǎng)基中加入營養(yǎng)物質(zhì)，改善培養(yǎng)環(huán)境，保持培養(yǎng)溫度的恒定，或者加入一些可以抵消標(biāo)本中抗菌物質(zhì)的藥物；快速分離，例如多次移種，可以提高標(biāo)本微生物檢驗(yàn)的陽性率；簡易快速的鑒定，例如通過簡單、快速的生化反應(yīng)及時(shí)檢驗(yàn)，避免感染的進(jìn)一步擴(kuò)散；對細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)單的復(fù)核，例如對于送檢單的標(biāo)本來源科室、目的等信息進(jìn)行再一次的核實(shí)，避免進(jìn)行的操作未達(dá)到送檢目的。臨床微生物檢驗(yàn)中另一個(gè)經(jīng)常遇到的問題就是污染菌的干擾，這也是臨床標(biāo)本微生物檢驗(yàn)陽性率始終較低的問題之一[4]，我們臨床主要應(yīng)用的方法是：首先對菌落的位置進(jìn)行觀察，如是否出現(xiàn)在標(biāo)本的劃線部位；通過相關(guān)知識對于細(xì)菌的特點(diǎn)是否符合常規(guī)進(jìn)行判斷；對于培養(yǎng)的時(shí)間長短是否符合常規(guī)情況進(jìn)行分析[5]；對可以細(xì)菌進(jìn)行圖片觀察，利用形態(tài)來識別是否是目的菌。

目前，本院的微生物實(shí)驗(yàn)室依舊處于儀器落后、設(shè)備不全、檢驗(yàn)水平低、檢驗(yàn)速度慢以及缺乏專業(yè)化人員的問題，根據(jù)這種情況，我們必須克服困難，在標(biāo)準(zhǔn)化程序處理上提高水平，作為檢驗(yàn)人員也要積極、不斷學(xué)習(xí)各種常見臨床標(biāo)本微生物的特性、檢驗(yàn)流程、注意事項(xiàng)，細(xì)心、耐心的完成各項(xiàng)微生物檢驗(yàn)工作，對于臨床中所出現(xiàn)的問題及時(shí)尋求答案，積極克服所面臨的困難，最大程度提高本院常見臨床標(biāo)本的微生物檢驗(yàn)質(zhì)量，為臨床治療、診斷提供最為可靠的參考依據(jù)。綜上所述，所有常見臨床標(biāo)本的微生物檢驗(yàn)都要本著安全、準(zhǔn)確、快速、敏感、低耗的原則，以標(biāo)準(zhǔn)化的檢驗(yàn)程序保證微生物檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性。

[1] 段曉丹.常見臨床標(biāo)本的微生物檢驗(yàn)程序[J].按摩與康復(fù)醫(yī)學(xué), 2012,3(10):6.

[2] 孫大惠.臨床微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥,2013,32 (24):98-99.

[3] 郭基平,袁暉蓉,陳幼紅,等.標(biāo)本涂片革蘭染色在臨床微生物檢驗(yàn)中的作用[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2010,3(32):155.

[4] 顏曉寧,周志敏.加強(qiáng)臨床微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制和生物安全管理[J].中國社區(qū)醫(yī)師(醫(yī)學(xué)專業(yè)),2010,14(23):140.

[5] 周正任.醫(yī)學(xué)微生物學(xué)[M].6版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2003:108, 152-152.

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：1671-8194（2014）32-0381-02