利用RNA干擾技術(shù)治療中蜂囊狀幼蟲病新方法取得進展

夏曉翠張馮斌楊勤宏方?jīng)_偉馮 棟魏太云周冰峰

（1福建農(nóng)林大學，福州 350002；2陜西黃龍縣養(yǎng)蜂試驗站，715700；3陜西延安市養(yǎng)蜂試驗站，716000）

中蜂囊狀幼蟲病自1972年在我國廣東省發(fā)生后，迅速蔓延至全國的中華蜜蜂主產(chǎn)區(qū)，成為飼養(yǎng)的中華蜜蜂毀滅性病害。雖然經(jīng)40多年人工選育和自然進化，中蜂囊狀幼蟲病已不再具有毀滅性，但仍是中華蜜蜂飼養(yǎng)最主要的病害。中蜂囊狀幼蟲病的病原是中蜂囊狀幼蟲病病毒（Chinese sacbrood virus,CSBV），其感染1～3日齡幼蟲，幼蟲體內(nèi)聚集大量的液體和病毒粒體，使其巢房不能封蓋，病蟲呈尖頭狀，體顏色由珍珠白色逐漸變?yōu)闇\黃色。感病幼蟲死亡之后，蟲體會逐漸變得干枯，形成一個暗褐色如龍船狀的鱗片。中蜂囊狀幼蟲病尚無有效的治療藥物，采用的預防措施主要有選育抗病蜂種，加強蜂群管理等。

RNA干擾（RNA interference,RNAi）是指一種分子生物學上由雙鏈RNA（dsRNA）誘發(fā)的基因沉默現(xiàn)象，其機制是通過阻礙特定基因的翻譯或轉(zhuǎn)錄來抑制基因表達。為解決中蜂囊狀幼蟲病危害，本研究嘗試將RNAi技術(shù)應用在中蜂囊狀病的治療，現(xiàn)已取得了理想的結(jié)果。在實驗室條件下，利用RNAi技術(shù)合成中蜂囊狀幼蟲病病毒同源的特異dsRNA，抑制中蜂囊狀幼蟲病病毒在蟲體內(nèi)的侵染，該基因藥能有效地抑制中華蜜蜂囊狀幼蟲病病毒。

為了在生產(chǎn)實踐中檢驗此項技術(shù)治療中蜂囊狀幼蟲病的效果，2014年6～7月，我們在國家蜂產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系延安綜合試驗站、陜西省黃龍示范縣養(yǎng)蜂試驗站的支持和配合下，在黃龍縣石堡鎮(zhèn)廟河村劉長有蜂場和石堡鎮(zhèn)楊窯科村王慶華蜂場，通過將中蜂囊狀幼蟲病病毒同源的特異dsRNA飼喂給自然條件下罹患中華蜜蜂囊狀幼蟲病的蜂群，開展中蜂囊狀幼蟲病治療效果的實驗。

將中蜂囊狀幼蟲病病毒同源的特異dsRNA按3個不同的濃度（低濃度、中濃度和高濃度）飼喂給蜂群作為3個不同的處理組；以未飼喂中蜂囊狀幼蟲病病毒同源的特異dsRNA的患有中華蜜蜂囊狀幼蟲病的蜂群為對照組。每個實驗組10群中華蜜蜂。

實驗結(jié)果表明，與對照組相比，除了低濃度組效果不明顯外，中濃度組和高濃度組均取得了明顯效果。

1.病蟲數(shù)量減少

對照組病蟲數(shù)量7天后增加65.82%，14天后增加29.88%，21天后增加35.37%的前提下，與飼喂藥物之前對比，中濃度組和高濃度組病蟲數(shù)7天后分別減少85.03%和87.91%，14天后減少91.44%和94.87%，21天后減少97.33%和99.63%。

2.封蓋子數(shù)量變化

對照組封蓋子數(shù)量7天后減少28.12%，14天后減少33.01%，21天后減少44.25%的前提下，與飼喂藥物之前對比，7天后中濃度組封蓋子數(shù)量減少0.49%和高濃度組增加1.71%，14天后分別增加9.56%和20.60%，21天后分別增加23.68%和30.10%。

3.群勢增長

對照組群勢7天后下降16.67%，14天后下降16.67%，21天后下降27.78%的前提下，與飼喂藥物之前對比，中濃度組和高濃度組群勢7天后分別增長13.64%和9.09%，14天后分別增長22.73%和27.27%，21天后分別增長40.91%和59.10%。

為了進一步研究該藥物療效的穩(wěn)定性，我們將進一步深入研究，擴大治療試的范圍。