范 震 王偉明 張云凌 王汝俊

（黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院·150036）

潰瘍性結(jié)腸炎（Ulcerative Colitis, UC）是一種原因未明的結(jié)腸慢性、非特異性炎癥，病變主要累及粘膜及粘膜下層，因缺少理想的治療藥物，且有癌變傾向，屬于現(xiàn)代難治性疾病之一。研究表明：在UC病情的發(fā)生、發(fā)展過程中，同時存在結(jié)腸粘膜的炎性損傷及損傷上皮的修復(fù)[1]。潰結(jié)靈是治療潰瘍性結(jié)腸炎的中藥復(fù)方，臨床效果頗佳，本文旨在前期實驗研究基礎(chǔ)上，探討中藥復(fù)方潰結(jié)靈對UC模型大鼠血清GLP-2、IL-13表達(dá)的影響，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料

1.1 藥品

潰結(jié)靈（含救必應(yīng)、水蛭、白術(shù)、白芍、炙甘草等中藥）濃縮液由廣州固志醫(yī)藥科技有限公司制備，批號080321。每1g濃縮液含21g生藥，藥物用蒸餾水配成1830g生藥/L。維柳芬（柳氮磺吡啶，SASP），上海三維制藥有限公司，批號：200906005。藥物用蒸餾水配成50g/L。

1.2 實驗動物

SD大鼠，SPF級，雄性，體重180～220g，由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供，合格證號：粵監(jiān)證字2008A003。

1.3 試劑

三硝基苯磺酸（TNBS，美國Sigma）；大鼠胰高血糖素肽酶-2試劑盒，（上海西唐生物科技有限公司）；IL-13 ELISA試劑盒（武漢博士德試劑公司）

1.4 儀器

3k-20z型高效冷凍離心機(jī)，美國sigma公司；A5002型酶標(biāo)儀Tecan公司

2 方法

2.1 動物分組和UC模型的建立

將32只SD大鼠隨機(jī)分為四組，每組8只，分別為正常組、模型組、陽性藥組（柳氮磺胺吡啶）、潰結(jié)靈組。大鼠禁食不禁水24h，乙醚麻醉，將大鼠灌胃針頭輕輕從肛門插入，深度為8cm，正常對照組注入等體積的生理鹽水0.2mL/100g體重，其余組別分別推入相同容量的TNBS溶液（含2.5%TNBS和50%乙醇），復(fù)制潰瘍性結(jié)腸炎模型，將大鼠肛門捏住倒提5min后將大鼠平放待其自然清醒即可，術(shù)后常規(guī)飼養(yǎng)[2]。

2.2 給藥方法、標(biāo)本采集

造模后24h，對大鼠進(jìn)行灌胃治療。潰結(jié)靈組給藥劑量為18.3g/Kg，給藥體積為10mL/Kg，每日給藥1次；SASP組給藥劑量為0.5g/Kg，給藥體積為10mL/Kg，每日給藥1次；正常對照組及模型對照組給等容積蒸餾水，以上均給藥10天。末次給藥后2小時，各組大鼠禁食不禁水，戊巴比妥鈉30mg/Kg，腹腔注射麻醉，腹主動脈采血，血液經(jīng)3000r.min-1離心10min，分離血清，-20℃保存，

2.3 指標(biāo)檢測

檢測程序嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行，采用ELISA法檢測血清GLP-2、IL-13水平。

2.4 統(tǒng)計學(xué)處理

3 結(jié)果

3.1 一般狀況

正常組大鼠活潑好動，食欲、體重、大便均正常；模型組大鼠出現(xiàn)精神萎靡，皮毛稀疏，活動量少，進(jìn)食量少，體重下降，反應(yīng)遲緩及腹瀉、粘液膿血便；潰結(jié)靈組及SASP組大鼠上述癥狀明顯改善。

3.2 潰結(jié)靈對UC模型大鼠血清GLP-2、L-13表達(dá)的影響

與正常對照組比較，模型組大鼠血清GLP-2表達(dá)增高（P＜0.05）；與模型組比較，潰結(jié)靈組血清GLP-2含量明顯增高（P＜0.05）；與正常對照組比較，模型組大鼠血清IL-13表達(dá)顯著降低（P＜0.01）；與模型組比較，潰結(jié)靈組、SASP組血清IL-13表達(dá)量明顯增高（P＜0.01），結(jié)果見表.1。

表1 潰結(jié)靈對UC大鼠血清GLP-2、IL-13表達(dá)的影響（±s，n=8）

表1 潰結(jié)靈對UC大鼠血清GLP-2、IL-13表達(dá)的影響（±s，n=8）

注：與正常對照組比較：*P＜0.05；與模型組比較：△P＜0.05

組別動物數(shù)（只）劑量（g/Kg）GLP-2（ng/mL）IL-13（pg/mL）正常對照組8等體積水2.34±0.19105.41±8.21模型組8等體積水3.51±0.17*64.43±6.27*SASP組818.33.34±0.20*86.37±6.16*△潰結(jié)靈組80.54.08±0.22*△83.35±5.37*△

3 討論

GLP-2是一種腸道特異性的生長因子，通過與GLP-2受體結(jié)合，調(diào)節(jié)正常小腸的生長、細(xì)胞凋亡等，并可劑量依賴性的促進(jìn)新生仔豬小腸重量、長度及腸絨毛高度的增加[3-5]。研究表明，GLP-2可以增加成年小鼠小腸、大腸濕重，促進(jìn)腸隱窩細(xì)胞增殖[6]。此外，GLP-2可增加UC大鼠體重、減少TNF-α、IL-1β等炎癥介質(zhì)釋放、減輕DDS誘導(dǎo)的小鼠UC結(jié)腸組織的炎癥及黏膜損傷程度[7]。臨床試驗研究表明，GLP-2可劑量依賴性的提高UC臨床緩解率，療效高于安慰劑組，在UC治療方面有著廣闊的應(yīng)用前景[8]。

UC發(fā)病機(jī)制尚不完全明確，Th1/Th2亞群失衡導(dǎo)致結(jié)腸粘膜免疫功能異常與UC的發(fā)病密切相關(guān)。IL-1、TNF-α等多種Th1細(xì)胞因子參與了UC的免疫反應(yīng)和炎癥過程。IL-13由Th2細(xì)胞產(chǎn)生，是一種抑炎細(xì)胞因子，與腸上皮細(xì)胞的緊密連接等密切相關(guān)。臨床研究表明：UC患者結(jié)腸粘膜組織中IL-13mRNA表達(dá)降低，重度或活動期UC患者血漿IL-13明顯低于輕度或靜止期患者[9，10]。

潰結(jié)靈是脾胃研究所在多年臨床經(jīng)驗基礎(chǔ)上總結(jié)出治療UC的驗方，臨床治療效果良好[11]。該方主要由救必應(yīng)、白術(shù)、白芍等中藥組成，具有清熱、健脾、活血之功效。前期動物實驗研究表明，潰結(jié)靈對多種UC模型大鼠有較好的治療作用，可減輕UC模型大鼠的炎癥程度、減少潰瘍發(fā)生，并具有抗炎、鎮(zhèn)痛等藥理作用；可降低UC模型大鼠結(jié)腸粘膜TNF-α、IL-1β等促炎細(xì)胞因子的表達(dá)，并可上調(diào)結(jié)腸損傷后修復(fù)密切相關(guān)的ITF、EGF等因子有關(guān)[12,1]。本研究結(jié)果表明，潰結(jié)靈可促進(jìn)UC大鼠血清GLP-2、IL-13表達(dá)，即潰結(jié)靈既可以通過上調(diào)具有黏膜保護(hù)作用的GLP-2表達(dá)，促進(jìn)損傷后黏膜的修復(fù)，加快其愈合，又可上調(diào)抑炎細(xì)胞因子IL-13的表達(dá)，抑制炎性細(xì)胞因子的黏附、聚集，以減少其對結(jié)腸粘膜的炎性損傷和破壞。體現(xiàn)了中藥多途徑、多靶點治療UC的優(yōu)勢，本研究為潰結(jié)靈治療UC提供了實驗依據(jù)。

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