浙江麗水市男性肛門生殖器疣患者人乳頭瘤病毒基因型研究

蔣衛(wèi)平 張嵩韜 蔣慧玲 龔偉 吳紹芳 俞新民 宋欣

浙江麗水市男性肛門生殖器疣患者人乳頭瘤病毒基因型研究

蔣衛(wèi)平 張嵩韜 蔣慧玲 龔偉 吳紹芳 俞新民 宋欣

目的了解浙江麗水市男性肛門生殖器疣患者感染人乳頭瘤病毒(HPV)基因型的分布狀況。方法PCR-反向斑點雜交技術(shù)對150例男性肛門生殖器疣患者標本進行HPV基因分型,包括3種低危型HPV-6、11、43和16種中高危型HPV-16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、CP8304。結(jié)果150例男性肛門生殖器疣患者中91例(60.67%)檢出HPV,其中有74例(81.32%)為低危型HPV-6、11、43的單一或多重感染,另有17例(18.68%)為中高危型的單一或多重感染。31例(34.07%)為多重感染(包括2～5種基因型混合感染),其中低危型合并中高危型的多重感染20例占64.52%,低危型之間的二重感染6例占19.35%; HPV-6、11合并中高危型感染分別為13例(41.94%)和6例(19.35%)。各HPV基因型感染136例,感染率從高到低依次為:HPV-6(39例,28.68%)、11(36例,26.47%)、16(11例,8.09%)、52(7例,5.15%)、53(7例,5.15%)、51(6例,4.41%)、58(6例,4.41%)和43(6例,4.41%)。結(jié)論男性生殖器疣患者HPV基因型感染中,低危型HPV感染占絕對優(yōu)勢,多重感染及各基因型的分布狀況差異較大。

乳頭狀瘤病毒感染;生殖器;肛門;基因型

肛門生殖器疣(anogenital warts)大多為人乳頭瘤病毒(HPV)感染引發(fā)的肛門和生殖器鱗狀上皮疣狀增生,屬性傳播疾病,主要與低危型HPV-11、HPV-6等的感染有關(guān)。為了解浙江麗水市男性肛門生殖器疣患者HPV感染的基因型及分布狀況,建立相關(guān)數(shù)據(jù)庫,我們進行了相關(guān)研究,報道如下。

一、對象

隨機選取2011年9月15日至2013年10月31日來我院皮膚科就診并初步診斷(癥狀及臨床表現(xiàn))[1]為肛門生殖器疣的男性患者150例,年齡15～86歲,平均年齡38歲;由主治及其以上職稱皮膚科醫(yī)師作出診斷,即男性患者的生殖器、會陰、肛門等部位出現(xiàn)丘疹,乳頭狀、菜花狀或雞冠狀肉質(zhì)贅生物,表面粗糙角化。在患者本人知情同意后,多點多部位采集疣體組織,移入裝有保存液的瓶中,及時送實驗室檢測HPV基因型。

二、方法

1.試劑:中山大學達安基因股份有限公司生產(chǎn)的HPV基因分型檢測試劑盒(PCR-反向斑點雜交技術(shù)[2-3])。

2.儀器:美國MJ Research公司的PTC-200 PCR擴增儀,上海精宏實驗設(shè)備有限公司生產(chǎn)的DK2-2電熱恒溫振蕩水槽。

3.HPV基因分型:HPV分型試劑盒包括16種中高危型HPV-16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、CP8304和3種低危型HPV-6、11、43,根據(jù)試劑盒說明書要求判斷結(jié)果。

4.質(zhì)量控制:①顯色反應(yīng)控制點呈陽性,說明雜交過程正常;②Globin位點呈陽性,表示采樣、DNA抽提和PCR過程正常。若結(jié)果陰性,表示DNA抽提或PCR過程不成功,或未采集到疣體脫落細胞,該樣品應(yīng)重復實驗或重新采樣。

三、結(jié)果

150例男性肛門生殖器疣患者中,HPV陽性91例(60.67%),感染方式分為單一感染和多重感染(包括2～5種基因型混合感染),單一、二重、三重、四重和五重感染例數(shù)分別為60、22、5、3、1例;31例為多重感染,感染率為34.07%,二重感染率占70.97%。

150例患者中感染HPV基因型總數(shù)為136,感染率從高到低依次為:HPV-6(39例,28.68%)、11(36例,26.47%)、16(11例,8.09%)、52(7例,5.15%)、53(7例,5.15%)、51(6例, 4.41%)、58(6例,4.41%)和43(6例,4.41%),其他8種基因型感染數(shù)共18例,另有3種基因型HPV-18、31和56未檢測到。

91例中,74例(81.32%)為低危型HPV-6、11、43的單一或多重感染,17例(18.68%)為中高危型的單一或多重感染。多重感染 31例中,低危型合并中高危型感染 20例(64.52%),低危型之間合并感染6例(19.35%,5例為HPV-6、11合并感染,1例為HPV-11、43合并感染)。HPV-6合并中高危型感染13例(41.94%),HPV-11合并中高危型感染6例(19.35%)。36例HPV-11感染中,單一感染24例(66.67%); 39例HPV-6感染中,單一感染21例(53.85%)。

四、討論

我們運用PCR-反向斑點雜交技術(shù)對浙江麗水市150例肛門生殖器疣患者進行了19種HPV基因型檢測,結(jié)果有91例陽性,陽性率為60.67%,將近40%呈陰性結(jié)果,究其原因我們認為可能有3點:①在男性肛門生殖器疣患者中,至少發(fā)現(xiàn)了30多種HPV基因型分布[4],可能是我們僅檢測了19種基因型,未涵蓋本地區(qū)該人群的實際感染型別;②雖然囑臨床醫(yī)師多點多部位采集標本,以提高陽性檢出率,但是也有可能沒有采集到疣體組織脫落細胞或者細胞量過少導致假陰性結(jié)果;③由非HPV感染形成的疣狀物,如陰莖珍珠狀丘疹、扁平濕疣、鮑恩樣丘疹病、鱗狀細胞癌及皮脂腺增生等[1]。Giuliano等[4]研究了來自巴西、墨西哥和美國的1 160例男性,結(jié)果HPV總感染率為65.2%,其中巴西、美國和墨西哥HPV感染率分別為72.3%、61.3%和61.9%。Partridge等[5]研究了美國華盛頓大學240例男性學生,其累積HPV感染率為62.4%。我們認為,由于各國、各地區(qū)的生活習俗、衛(wèi)生狀況、性行為方式、研究對象以及檢測方法的不同,各地報道的男性HPV感染率也存在差異。

浙江麗水市男性肛門生殖器疣150例中感染HPV基因型總數(shù)為136,感染率從高到低依次為:HPV-6、11、16、52、53、51、58和43,其他8種基因型感染數(shù)不足5例,另有3種基因型未被檢測到。HPV-6、11單一感染分別為 21例 (53.85%)和24例(66.67%)。Potocnik等[6]檢測了55例男性生殖器疣的組織樣本,分別檢測到HPV-6、11、16、31、51、53、55、62、66、70、73和84,其中HPV-6、11占96.4%,HPV6大約是HPV11的4倍。Chan等[7]在中國香港對130例肛門生殖器疣樣本進行研究,各基因型感染依次為HPV-6、11、39、51、52、55、59、61、62、68、58、72、81、83、84和CP6108,63.1%的病例只有HPV-6和(或)HPV-11感染,26.2%有HPV-6和(或)HPV-11感染的同時合并一種或多種其他HPV基因型。非HPV-6、11感染的樣本占10.8%。

HPV在麗水市男性肛門生殖器疣患者中的感染方式分為單一感染和多重感染(包括2～5種基因型混合感染)。我們研究對象的多重感染率為34.07%,70.97%為二重感染,低危型合并中高危型的多重感染占64.52%,19.35%為低危型之間的合并感染。Giuliano等[4]檢測的巴西、墨西哥和美國1 160例男性HPV感染者中,25.7%為HPV多重感染,17.8%為低危型和高危型的共同感染。Chan等[7]發(fā)現(xiàn)26.2%的病例有HPV-6和(或)HPV-11感染的同時合并一種或多種其他HPV基因型,HPV-16、18大多(66.7%)是以共同感染HPV-6、11的形式存在。Hadjivassiliou等[8]運用雜交捕獲2代(HC2)微量板法檢測了550例男性生殖器疣和64例非生殖器疣樣本,前者有16.4%為低危型和高/中危型的合并感染,后者有15.4%是二重感染。麗水市男性肛門生殖器疣患者中,多重感染的比率相對較高(34.07%),大部分為二重感染(70.97%),低危型合并中高危型的多重感染占64.52%, HPV-6、11合并中高危型感染分別占41.94%和19.35%。

[1]韓國柱.尖銳濕疣∥趙辨.中國臨床皮膚病學[M].南京:江蘇科學技術(shù)出版社，2010:1816-1821.

[2]黃慶，府偉靈，周玉，等.基因芯片對人乳頭瘤病毒的快速檢測和分型[J].中華醫(yī)院感染學雜志，2005，15(4):476-478.

[3]楊光，梁彩紅，崔金環(huán)，等.人乳頭瘤病毒基因分型芯片的建立及其在臨床中的應(yīng)用[J].中華流行病學雜志，2006，27(1):47-49.

[4]Giuliano AR，Lazcano-Ponce E，Villa LL，et al.The human papillomavirus infection in men study:human papillomavirus prevalence and type distribution among men residing in Brazil，Mexico，and the United States[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2008，17(8):2036-2043.

[5]Partridge JM，Hughes JP，F(xiàn)eng Q，et al.Genital human papillomavirus infection in men:incidence and risk factors in a cohort of university students[J].J Infect Dis，2007，196(8):1128-1136.

[6]Potocnik M，Kocjan B，Seme K，et al.Distribution of human papillomavirus(HPV)genotypes in genital warts from males in Slovenia[J].Acta Dermatovenerol Alp Panonica Adriat，2007，16 (3):91-96，98.

[7]ChanPK，LukAC，LukTN，etal.Distributionofhumanpapillomavirus types in anogenital warts of men[J].J Clin Virol，2009，44(2): 111-114.

[8]Hadjivassiliou M，Stefanaki C，Nicolaidou E，et al.Human papillomavirus assay in genital warts--correlation with symptoms[J].Int J STD AIDS，2007，18(5):329-334.

2013-11-14)

(本文編輯:顏艷)

Genotyping of human papillomavirus in male patients with anogenital warts in Lishui area,Zhejiang province

Jiang Weiping*，Zhang Songtao，Jiang Huiling，Gong Wei，Wu Shaofang，Yu Xinmin，Song Xin.*Department of Clinical Laboratory，Lishui Central Hospital，Lishui 323000，Zhejiang，China

Jiang Weiping，Email:jwp225@126.com

ObjectiveTo investigate the distribution of human papillomavirus(HPV)genotypes in male patients with anogenital warts in Lishui area，Zhejiang province.MethodsTissue specimens were obtained from the lesions of 150 male patients with anogenital warts.PCR-reverse dot blot hybridization was performed to detect the presence of 3 low-risk HPV types(HPV 6，11，and 43)and 16 moderate-or high-risk HPV types(HPV 16，18，31，33，35，39，45，51，52，53，56，58，59，66，68 and CP8304)in these specimens.Chi-square test was used for statistical analysis.ResultsHPV was detected in 91(60.67%)of the 150 male patients.Of the 91 positive patients，74(81.32%)were infected by single or multiple low-risk HPV types，whereas 17(18.68%)by single or multiple high-risk HPV types.Thirty-one(34.07%)patients harbored 2-5 HPV genotypes，including 20(64.52%) patients infected with both low-risk and high-risk HPV types，and 6(19.35%)patients infected with two low-risk HPV types.The coexistence of moderate-or high-risk HPV types with HPV 6 was observed in 13(41.94%) patients，and that with HPV 11 in 6(19.35%)patients.The most prevalent genotype was HPV 6(28.68%，39/136)，followed by HPV 11(26.47%，36/136)，16(8.09%，11/136)，52(5.15%，7/136)，53(5.15%，7/136)，51(4.41%，6/136)，58(4.41%，6/136)and 43(4.41%，6/136).ConclusionsLow-risk HPV genotypes predominate in male patients with anogenital warts，and there are large differences in the distribution of multiple infections and HPV genotypes.

Papillomavirus infections;Genitalia;Anus;Genotype

10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2014.10.017

323000浙江省麗水市中心醫(yī)院檢驗科(蔣衛(wèi)平),小兒科(蔣慧玲),病理科(龔偉),皮膚科(吳紹芳、俞新民、宋欣);浙江省麗水市蓮都區(qū)人民醫(yī)院中藥房(張嵩韜)

蔣衛(wèi)平,Email:jwp225@126.com