重組瘦蛋白對生長豬血清和組織中脂肪酶活性的影響

■艾 薇 趙家升

(云南保山學院資源環(huán)境學院，云南保山678000）

近年來，養(yǎng)殖業(yè)趨向于規(guī)?；?、集約化，高能、高蛋白飼料雖然能促進豬快速生長，提前出欄，但同時也出現(xiàn)了豬的體脂含量增加，不符合現(xiàn)代營養(yǎng)、安全低脂肉食品的消費觀念[1]。目前研究的方法比較多，如通過遺傳育種手段使肉品質有所改善，通過調控脂肪代謝的關鍵酶——脂肪酶調控豬的生長。

瘦蛋白作為脂肪感受器向大腦及其他組織傳遞機體能量儲存信號和能量平衡的效應器受到廣泛的關注，但主要集中在嚙齒動物和人上，而關于在豬上的研究鮮有報道。本試驗旨在通過探討重組瘦蛋白對生長豬血清、組織中脂肪酶活性的影響，為其在畜牧業(yè)生長中的推廣使用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗所用的重組瘦蛋白由云南農業(yè)大學動物營養(yǎng)實驗室制備提供[2]，濃度為3.8 mg/ml。

1.2 試驗動物

選擇健康、胎次相近、體重為19～22 kg的DLY（杜×長×大）三元雜交豬24頭，公、母各半，隨機分為4組，每組6頭。1、2、3組為試驗組，注射重組瘦蛋白;4組為對照組，注射磷酸鹽緩沖溶液（PBS）。每組豬分圈飼養(yǎng)，飼喂市售不同階段豬日糧，自由采食、自由飲水。正式試驗開始前進行7 d的預試，預試期結束后進入正式試驗期。試驗組和對照組都采用腹腔注射的方式：第1、2、3組分別于21 kg體重時各組每頭豬分別注射0.1、0.5、1.0 mg/kg體重重組瘦蛋白；第4組于21 kg體重時注射PBS，每頭豬1 ml。注射后每周在固定時間和試驗結束前空腹前腔靜脈采血10 ml，血液凝固后，2 500 r/min離心5 min，收集血清，并于-20℃冷凍保存?zhèn)溆?，待測定豬血清脂肪代謝指標。

1.3 試驗日糧

根據(jù)NRC（1998）飼養(yǎng)標準，按試驗豬的生長階段和營養(yǎng)需要配制不同階段的日糧，不同階段日糧營養(yǎng)水平見表1。

1.4 血清、肝臟和脂肪組織脂肪酶活性測定

表1 不同階段日糧營養(yǎng)水平

取100 ml三角瓶4個，分別加入5 ml磷酸緩沖液和4 ml 25%聚乙烯橄欖油乳化液，置于40℃保溫水浴5 min后在其中兩瓶中各加入1 ml血清，繼續(xù)保溫水浴15 min，取出分別加入95%乙醇15 ml，搖勻終止酶的作用，再加酚酞指示劑3滴，用0.05 mol/l NaOH標準液滴定至溶液呈粉紅色為止。另外兩瓶不加血清也繼續(xù)保溫15 min,而后立即取出，各加15 ml 95%乙醇，再加1 ml血清，滴定至溶液為粉紅色為止，作為對照。

酶活性的定義：1 ml血清在40℃作用于聚乙烯橄欖油乳化液15 min后消耗1 ml 0.05 mol/l NaOH，作為100個活性單位。

1 ml血清中脂肪酶活性（U）=（滴定樣品所耗堿量-對照所耗堿量）×100(ml)。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

采用SPSS和EXCEL數(shù)據(jù)處理軟件進行系統(tǒng)分組分析，并進行LSD和Duncan's法多重比較和回歸分析。

2 結果和分析

2.1 重組瘦蛋白對豬血清脂肪酶活性的影響

腹腔注射0.1、0.5、1.0 mg/kg體重重組瘦蛋白后豬血清脂肪酶活性的變化見圖1。

由圖1可以看出，在整個試驗期注射0.1 mg/kg體重重組瘦蛋白對血清脂肪酶活性無顯著影響（P＞0.05）；注射0.5 mg/kg和1.0 mg/kg體重重組瘦蛋白在0～4周內血清脂肪酶活性與對照組相比顯著提高（P＜0.05），第6周以后至試驗結束血清脂肪酶活性與對照組相比差異不顯著（P＞0.05）。注射0.5 mg/kg和1.0 mg/kg體重重組瘦蛋白與對照組相比，第1 d血清脂肪酶活性分別提高14.79%和17.75%（P＜0.05），第1周時分別提高22.37%和24.85%（P＜0.05），第2周時分別提高21.14%和27.54%（P＜0.05），第4周時分別提高20.89%和23.67%（P＜0.05），第6周時分別提高5.40%（P＞0.05）和 13.02%（P＜0.05）；注 射 0.5 mg/kg與1.0 mg/kg體重重組瘦蛋白血清脂肪酶活性無明顯差異（P＞0.05）；在0～4周內注射0.5 mg/kg與1.0 mg/kg體重重組瘦蛋白比注射0.1 mg/kg體重重組瘦蛋白血清脂肪酶活性分別提高10%～19%和13%～22%（P＜0.05）；第6周時注射1.0 mg/kg體重重組瘦蛋白比0.1 mg/kg和0.5 mg/kg體重重組瘦蛋白提高8.97%和7.23%（P＜0.05）。

圖1 重組瘦蛋白對豬血清脂肪酶活性的影響

圖1的結果顯示，重組瘦蛋白可在一定時期內顯著提高豬血清脂肪酶活性，并且呈劑量依賴的特點，注射0.5 mg/kg和1.0 mg/kg體重的重組瘦蛋白在0～4周內可顯著提高豬血清脂肪酶活性。

2.2 重組瘦蛋白對豬脂肪組織和肝臟脂肪酶活性的影響

腹腔注射0.1、0.5 mg/kg和1.0 mg/kg體重重組瘦蛋白對豬脂肪組織和肝臟脂肪酶活性的影響見圖2。

圖2 重組瘦蛋白對豬組織脂肪酶活性的影響

由圖2可知，各試驗組脂肪組織脂肪酶活性均高于對照組，腹腔注射0.1、0.5 mg/kg和1.0 mg/kg體重重組瘦蛋白比對照組分別提高4.26%（P＞0.05）、26.60%和36.17%（P＜0.05）；注射0.5 mg/kg和1.0 mg/kg體重重組瘦蛋白脂肪組織脂肪酶活性組間無明顯差異（P＞0.05），比0.1 mg/kg體重重組瘦蛋白脂肪組織脂肪酶活性分別提高21.43%和30.61%（P＜0.05）。

肝臟脂肪酶活性各試驗組均高于對照組，注射0.1、0.5 mg/kg和1.0 mg/kg體重重組瘦蛋白比對照組分別提高 4.29%（P＞0.05）、18.57%和 29.29%（P＜0.05）；注射0.5 mg/kg和1.0 mg/kg體重重組瘦蛋白肝臟脂肪酶活性組間無明顯差異（P＞0.05），比0.1 mg/kg體重重組瘦蛋白肝臟脂肪酶活性分別提高13.70%和23.97%（P＜0.05）。

圖2的結果顯示，重組瘦蛋白可顯著提高豬脂肪組織和肝臟的脂肪酶活性，注射0.5、1.0 mg/kg體重重組瘦蛋白對脂肪組織和肝臟脂肪酶活性影響較明顯。

3 討論和小結

諸多的研究表明，動物性脂肪過量的攝入，會對人類的身體健康產生潛在的威脅，誘發(fā)心血管疾病的發(fā)生。通過減少外源脂肪和內源脂肪的合成，促進脂類的轉運和吸收，達到降低動物脂肪的含量[3]的目的。正常哺乳動物進食后，食物中碳水化合物經過一系列消化酶（α-淀粉酶、α-糖苷酶等）作用水解成單糖，經腸壁細胞吸收而被機體利用，飼料中的脂肪則在脂肪酶作用下分解為甘油和脂肪酸而被吸收[4]。瘦蛋白對脂肪代謝的調控與其作用有關，當機體的脂肪組織增加，obmRNA表達加強，其轉運系統(tǒng)中通過血腦屏障的瘦蛋白升高。瘦蛋白可作用于下丘腦的攝食神經，控制食欲，增加能量的消耗，進而減少脂肪的沉積。有研究發(fā)現(xiàn)，瘦蛋白可以直接抑制于脂類物質的合成，使血清中脂肪酸的水平顯著降低。也有研究發(fā)現(xiàn)，白色脂肪組織脂肪酸合成酶的基因在機體內受到瘦蛋白的抑制，導致脂肪組織中脂肪的合成速率下降[5]。

本研究結果表明，腹腔注射不同劑量的重組瘦蛋白對生長豬血清和組織中脂肪酶有不同程度的調節(jié)作用；在血清中，注射0.5 mg/kg和1.0 mg/kg體重的重組瘦蛋白在0～4周內可顯著提高豬血清脂肪酶活性；在組織中，注射0.5 mg/kg和1.0 mg/kg體重重組瘦蛋白對脂肪組織和肝臟脂肪酶活性影響較明顯。其原因可能是注射瘦蛋白提高脂肪酶的活性，加速脂類的分解、轉運以及提高在其他組織的利用率。故注射0.5 mg/kg和1.0 mg/kg體重的重組瘦蛋白對脂肪代謝中的關鍵酶——脂肪酶的效果比較顯著。綜上所述，重組瘦蛋白可提高豬血清、脂肪組織和肝臟脂肪酶活性，使體內脂肪分解代謝加強，脂肪沉積減少。