銅與鋅對鉬中毒小鼠免疫功能的影響

■王 珅 畢聰明 梁軍生 肖銀霞

(遼寧醫(yī)學(xué)院畜牧獸醫(yī)學(xué)院，遼寧錦州121001)

鉬(Mo)是黃嘌呤氧化酶的組成成分,參與和影響機(jī)體內(nèi)多種物質(zhì)的代謝,是動物必需的微量元素，具有重要的生物學(xué)作用。同時，Mo也是動物消化道微生物的生長因子，被微生物吸收，適量的Mo可以促進(jìn)消化。動物一般不出現(xiàn)Mo缺乏癥，但易出現(xiàn)中毒現(xiàn)象。目前，關(guān)于鉬對羊、小鼠、雞的營養(yǎng)物質(zhì)消化代謝影響以及鉬中毒對免疫功能的影響的研究報道較多[1-3]。鋅、銅合理的營養(yǎng)水平可強(qiáng)化動物的防御和免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)動物對疾病的抵抗能力，但有關(guān)鋅、銅對小鼠高鉬的免疫保護(hù)的研究未見詳細(xì)報道。本研究擬以小鼠為試驗動物，探討高M(jìn)o添加水平對小鼠免疫功能的影響，以期為鉬中毒的免疫保護(hù)研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

鉬酸鈉、硫酸銅、硫酸鋅，粉末狀固體，飼料級，由遼寧凱為生物科技有限公司提供。

1.2 試驗動物及設(shè)計

采用完全隨機(jī)分組試驗設(shè)計，選用100只昆明小鼠，日齡和體重相近，試驗前基礎(chǔ)日糧預(yù)飼1周，隨機(jī)分為5個組，每組4個重復(fù)，每個重復(fù)5只，試驗分組見表1，試驗期為30 d。

表1 試驗分組

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗在遼寧醫(yī)學(xué)院畜牧獸醫(yī)學(xué)院臨床實驗室進(jìn)行，在試驗前，對飼養(yǎng)室進(jìn)行全面刷洗，消毒，自然光照通風(fēng)，正試期小鼠自由采食，水槽供水。

1.4 試驗方法

定期采血，作全血涂片，福爾馬林-丙酮緩沖液固定。醋酸染色液常溫染色浸染2 h，水洗晾干，1%甲基綠溶液復(fù)染1 min，沖洗晾干。油鏡下計數(shù)100個淋巴細(xì)胞，淋巴細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中有褐紅色顆粒為T淋巴細(xì)胞，沒有褐紅色顆粒的為B淋巴細(xì)胞。計算出T、B淋巴細(xì)胞的百分率，并根據(jù)白細(xì)胞計數(shù)和分類計數(shù)結(jié)果計算其絕對值。球蛋白含量的測定采用美國IDEXX全自動血液生化分析儀測定。

1.5 數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件中的One-way ANOVA進(jìn)行單因素方差分析，LSD進(jìn)行多重比較，P＜0.01為差異極顯著，P＜0.05為差異顯著，數(shù)據(jù)采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 外周血T淋巴細(xì)胞百分率變化（見表2）

表2 外周血T淋巴細(xì)胞百分率變化(%)

從表2結(jié)果可以看出，30 mg/kg鉬添加劑量能降低小鼠外周血T淋巴細(xì)胞百分率，試驗Ⅰ組小鼠26 d與1 d相比T淋巴細(xì)胞百分率下降了12.2%；試驗Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組26 d與1 d相比小鼠T淋巴細(xì)胞百分率分別降低了7.3%、3.1%、1.1%。26 d試驗Ⅳ組與試驗Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組相比差異顯著（P＜0.05），說明銅鋅聯(lián)合組能有效地拮抗鉬酸鈉引起的外周血T淋巴細(xì)胞百分率下降，并且其效果優(yōu)于單獨添加銅和鋅。

2.2 外周血B淋巴細(xì)胞百分率變化(見表3)

表3 外周血B淋巴細(xì)胞百分率變化(%)

從表3可以看出，30 mg/kg鉬添加劑量能降低小鼠外周血B淋巴細(xì)胞的百分率，試驗I組小鼠26 d B淋巴細(xì)胞百分率比1 d下降了15.1%；26 d與1 d相比，銅添加的試驗II組、鋅添加的試驗Ⅲ組和銅鋅聯(lián)合添加的試驗Ⅳ組B淋巴細(xì)胞分別下降了5.6%、3.8%、2.3%，試驗26 d試驗Ⅳ組與試驗Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組相比差異顯著（P＜0.05），與對照組比較差異不顯著（P＞0.05）,說明銅鋅聯(lián)合添加能很好地對抗鉬酸鈉的免疫損傷。

2.3 血清球蛋白含量的變化(見表4)

表4 血清球蛋白含量的變化(g/l)

由表4可知，試驗Ⅰ組（30 mg/kg鉬添加劑量）在第16 d開始降低小鼠血清中球蛋白的含量，與對照組相比差異顯著（P＜0.05）；試驗Ⅱ組和試驗Ⅲ組也是從16 d開始大幅度降低血清球蛋白的濃度，與對照組相比差異顯著（P＜0.05），但Ⅰ組和Ⅱ、Ⅲ組之間差異不顯著，說明單獨添加銅和鋅對小鼠鉬中毒造成的免疫損傷不能起到很好的保護(hù)作用；試驗Ⅳ組和對照組相比差異不顯著（P＞0.05），說明銅與鋅聯(lián)合使用能夠協(xié)同保護(hù)鉬中毒小鼠的免疫損傷。

3 討論

3.1 鉬對小鼠免疫功能的影響

微量元素鉬是動物營養(yǎng)中必需微量元素，具有許多生物學(xué)功能，能促進(jìn)動物生長，提高動物的生產(chǎn)性能，對動物的免疫、代謝及發(fā)育等都起著重要的作用[4]。動物缺鉬時發(fā)育受阻，幼齡動物尤其表現(xiàn)明顯。研究證實，適量的鉬對肉牛有促生長作用，對乳牛有促進(jìn)產(chǎn)奶量的效果。適量的鉬能提高機(jī)體細(xì)胞的免疫力，試驗證明，適量的鉬可以提高雛雞和小鼠免疫器官的質(zhì)量、生長指數(shù)，而過量的鉬可以引起免疫器官的病理損傷[5]。試驗表明，飼料中添加30 mg/kg的鉬對小鼠造成了免疫損傷，降低了小鼠外周血中的淋巴細(xì)胞比率，并且降低血清中的免疫球蛋白含量。

3.2 銅與鋅對小鼠免疫功能的影響

銅缺乏可以引起胸腺、脾臟的萎縮，淋巴細(xì)胞減少，脾臟生產(chǎn)IL-1、巨噬細(xì)胞產(chǎn)生IL-1B和IL-6的能力以及淋巴細(xì)胞合成IL-2的能力減弱。本試驗表明，添加15 mg/kg銅在一定程度上降低了鉬所致的免疫損傷，但保護(hù)作用不明顯。研究表明，銅與鉬有吸收拮抗作用，但添加銅未見到明顯的保護(hù)。鋅是動物免疫系統(tǒng)發(fā)育和維持功能的關(guān)鍵物質(zhì)，研究表明，補(bǔ)鋅可以提高外周淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。本試驗證明，補(bǔ)鋅可以降低由于鉬中毒所致的淋巴細(xì)胞減少幅度，但單獨補(bǔ)鋅對血清球蛋白的降低未見明顯的保護(hù)作用。試驗表明，在飼料中同時添加銅和鋅對鉬中毒所致的淋巴細(xì)胞減少和血清球蛋白降低有很好的保護(hù)作用。

4 結(jié)論

每千克飼料中同時添加15 mg的銅與鋅能有效保護(hù)鉬中毒小鼠的免疫損傷，鋅在蛋白質(zhì)中與巰基結(jié)合比較穩(wěn)定，在其他元素間的調(diào)控中起著主導(dǎo)作用。鋅能作用于造血系統(tǒng)的不同環(huán)節(jié)，協(xié)同完成造血功能，從而在對抗鉬中毒中發(fā)揮提升外周血T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的作用。鋅也能抑制鉬在腸道的吸收，降低鉬毒性，鋅有競爭性置換鉬的作用，從而治療中毒。